hTERT启动子调控hNIS基因介导肺癌细胞碘摄取和131I治疗的实验研究

目的 构建含人端粒酶反转录酶(hTERT)核心启动子调控的人钠/碘同向转运体(hNIS)基因重组腺病毒,并靶向转染至肺癌A549细胞中特异性表达.探讨hTERT启动子调控的hNIS基因介导放射性碘治疗肿瘤的可能性.方法 应用AdEasy系统构建重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS,同时构建巨细胞病毒(CMV)启动子调控的hNIS重组腺病毒Ad-CMV.hNIS作为阳性对照,不含hNIS的重组腺病毒Ad-CMV作为阴性对照.应用反转录.聚合酶链反应(RT-PCR)方法验证hTERT在转染肿瘤细胞中的转录活性,摄碘实验检测表达的hNIS蛋白功能,细胞克隆形成实验评价131I对转染肿瘤细胞的毒性作用.结果 成功构建重组腺病毒Ad-hTERT-hNIS、Ad-CMV-hNIS及Ad-CMV,并经PCR验证正确.RT-PCR证实hNIS cDNA能从Ad-hTERT-hNIS转染的细胞中扩增出来.Ad-hTERT-hNIS和Ad-CMV-hNIS转染的肺癌A549细胞摄碘能力比阴性对照组Ad-CMV转染的细胞分别提高了23和31倍,且摄碘能力可以被NaClO4抑制.Ad-hTERT-hNIS和Ad-CMV-hNIS转染的肺癌A549细胞均可被131I杀死,2组细胞成活率分别为(31.2±1.45)%和(23.6±4.08)%,而阴性对照组和未转染病毒组分别为(89.0 ±2.99)%和(91.2 ±4.63)%.结论 hTERT启动子调控的hNIS重组腺病毒转染肿瘤细胞后,应用131I治疗有望成为一种新的基因靶向治疗手段.     

SLE病人外周血T淋巴细胞Fas的表达及其与ANA的关系

应用流式细胞仪检测系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）２０例正常人外周血新鲜分离的Ｔ淋巴细胞Ｆａｓ抗原的表达，并采用ＥＬＩＳＡ法检测病人血浆中抗核抗体（ＡＮＡ）的含量，结果发现，ＳＬＥ病人外周血Ｔ淋巴细胞Ｆａｓ的表达明显高于正常对照组（Ｐ〈０．０１），且活动期明显非活动期（Ｐ〈０．０１）。活动期血浆ＡＮＡ含量明显高非活动期（Ｐ〈０．０５）。外周血Ｔ淋巴细胞Ｆａｓ阳性率与血浆ＡＮＡ含量呈正相关。结果提示：在ＳＬ     

Raji 细胞系特异性Fab噬菌体抗体库的构建及筛选

目的构建针对B细胞淋巴瘤Raji细胞系噬菌体抗体库并从中筛选出特异性的抗体。方法以Raji细胞免疫BALB/c小鼠,RT-PCR法从脾淋巴细胞中扩增抗体轻链к和重链Fd基因。经SacI/XbaI和XhoI/SpeI双酶切,依次克隆入噬菌体载体pComb3H-SS中,并电转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体VCSM13进行超感染,构建B细胞淋巴瘤Raji细胞系特异性Fab噬菌体抗体库。以Raji细胞为抗原进行筛选,获得抗Raji细胞的抗体,通过ELISA法进行抗原结合活性的测定,并对所得阳性克隆进行基因测序分析。结果构建了容量为2.18×107的抗人B细胞淋巴瘤Raji细胞系的Fab噬菌体抗体库,并筛选获得了与Raji细胞系特异性识别结合的8株阳性克隆。对其中两个阳性克隆进行基因序列分析,结果显示其重链可变区、轻链可变区分别与免疫球蛋白基因库中已注册的鼠源性免疫球蛋白重链可变区和轻链可变区序列具有高度同源性。结论成功地构建Fab噬菌体抗体库并筛选出针对Raji细胞系膜抗原的抗体,为进一步研究B细胞淋巴瘤的免疫治疗提供了实验基础。     

131I标记B细胞淋巴瘤Fab抗体荷瘤裸鼠体内分布和显像

目的 研究131I标记B细胞淋巴瘤Fab抗体(131I-Fab抗体)在荷人B细胞淋巴瘤裸鼠体内的分布和放射免疫显像效果.方法 应用免疫组织化学和流式细胞仪检测经噬菌体抗体库技术获得的B细胞淋巴瘤Fab抗体的免疫活性.以Iodogen法对Fab抗体和CD20单克隆抗体(简称单抗,对照)进行131I标记.标记物经尾静脉注入荷瘤裸鼠后2,4,8和24 h分别进行显像,并测定荷瘤裸鼠体内主要组织的放射性分布.结果 免疫组织化学和流式细胞仪检测结果表明Fab抗体和131I-Fab抗体均能与Raji细胞膜抗原结合,结合率＞87%.显像结果显示131I-Fab抗体在注入荷瘤裸鼠体内8 h即可使肿瘤清晰显影,24 h基本被清除.131I-CD20单抗注入后24 h肿瘤可见放射性浓聚.荷瘤裸鼠体内分布结果表明在2,4和8 h 131I-Fab抗体组肿瘤每克组织百分注射剂量率(%ID/g)分别为(1.37±0.28),(1.84±0.13)和(2.21±0.15)%ID/g,均高于对照组[分别为(0.33±0.06),(0.62±0.08)和(1.46±0.24)%ID/g;F=52.22,278.42和29.00,P均＜0.05],24 h则明显低于对照组[分别为(0.44±0.07)和(3.56±0.66)%ID/g;F=89.7,P＜0.05].2,4,8,24 h 131I-Fab抗体组肿瘤/非肿瘤组织放射性(T/NT)比值分别为(0.22±0.03)～(5.44±0.31),(0.43±0.11)～(21.01±3.97),(1.09±0.07)～(20.28±2.77),(1.12±0.02)～(10.29±1.78);而对照组T/NT比值分别为(0.04±0.01)～(3.10±0.29),(0.11±0.05)～(7.99±1.81),(0.48±0.06)～(23.55±1.69),(2.32±0.34)～(33.23±6.83).结论 131I-Fab抗体具有相对分子质量小、活体定位准确高效、显像早和清除快速等优点, 对临床放射免疫显像诊断B细胞淋巴瘤具有潜在的应用价值.     

人端粒酶逆转录酶核心启动子的克隆

目的克隆出人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因核心启动子,为构建hTERT核心启动子调控的重组腺病毒提供实验基础。方法提取肝癌细胞HepG2基因组DNA作为模板,进行PCR扩增,扩增产物酶切后亚克隆至pcDNA3.1（＋）质粒。对重组体进行酶切和测序鉴定。结果PCR扩增出约250 bp的目的片段,经酶切和测序鉴定表明质粒构建成功。结论hTERT核心启动子的成功克隆,为进一步实验提供了基础。     

伴t(8;21)特征的继发性四倍体核型的M2型急性粒细胞性白血病一例

多倍体是实体瘤中比较常见的细胞遗传学改变,而在急性髓系白血病(ＡＭＬ)中很少见,至今报道的少于３０例,本室曾报告４例伴有ｔ(８;２１)为特征的继发性四倍体核型Ｍ-2型急性白血病~([1,2]),最近又发现１例,现报告如下。     

中国康复医学会第四届脑血管病康复医疗学术交流会

<正>全国第四届脑血管病康复医疗学术交流会于1993年12月16～20日在上海召开,出席会议的代表来自25个省(区)市,共209名,我国著名神经内科专家第四军医大学西京医院栗秀初教授作了加快我国脑血管病的康复医疗工作进程的学术报告.会议共收到学术论文382篇,大会交流30篇,还分别以“基础与实验研究”、“辅助诊断与康复评估”、“临床观察与分析”、“康复疗法与措施”、“传统康复与中西医结合”、“药物与手术治疗”、“康复护理”、“康复模式与社区康复”、“康复医学工     

131I-抗ProGRP（31-98）单克隆抗体E-B5放射免疫显像及放射免疫治疗实验研究

目的了解131I标记的胃泌素释放肽前体（ProGRP）单克隆抗体E-B5在荷小细胞肺癌裸鼠的体内分布及放射免疫显像情况,观察131I—E—B5对荷小细胞肺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用。方法（1）分别建立荷小细胞肺癌、荷肺腺癌及荷大肠癌裸鼠模型。（2）自荷小细胞肺癌裸鼠尾静脉注射131I—E-B5后1,12,24,48,72和96h处死裸鼠并取各主要脏器组织,计算各时间点的每克组织百分注射剂量率（％ID／g）和肿瘤／非肿瘤放射性（T／NT）比值。（3）分别对荷小细胞肺癌、荷肺腺癌和荷大肠癌裸鼠模型进行131I—E—B5放射免疫显像,观察移植瘤的显影情况,并计算移植瘤体／对侧相同部位的放射性（T／B）比值。（4）以未经任何治疗处理组为对照,采用瘤内注射法观察比较3．7,7．4,14．8和22．2MBq131I-E—B5和Na131I对荷小细胞肺癌裸鼠移植瘤的抑制作用。采用SPSS13．0软件处理数据,行两样本均数t检验。结果（1）体内分布研究示：注射后72h,荷小细胞肺癌裸鼠移植瘤体的放射性摄取达到最高值,为（14．1±2．9）％ID／g,高于其他脏器及组织（t=4．11～8．58,P均〈0．05）,瘤体与各脏器组织的T／NT比值随时间延长而逐渐升高,72h时瘤体与肌肉组织的T／NT比值高达4．67±0．66。（2）放射免疫显像发现：注射131I—E—B5后24h荷小细胞肺癌裸鼠移植瘤部位放射性明显聚集,随时间延长放射性浓聚程度逐渐增强,72至96h时最为清晰。荷肺腺癌裸鼠移植瘤局部无明显的放射性浓聚。荷大肠癌裸鼠移植瘤模型显像结果与荷小细胞肺癌裸鼠模型显像结果类似,但其T／B比值低于荷小细胞肺癌裸鼠模型（t=4．29,P〈0．01）。注射后72h,荷小细胞肺癌、荷大肠癌及荷肺腺癌裸鼠的T／B比值分别为5．27±0．97,2．28±0．72和1．26±0．65。（3）131I—E-B5对荷小细胞肺癌移植瘤的生长抑制作用明显大于Na131I（t=2．88～17．77,P均〈0．05）。结论131I—E—B5对小细胞肺癌有较好的靶向作用,可以抑制小细胞肺癌移植的生长并破坏肿瘤组织,有望成为一种较为理想的小细胞肺癌放射免疫显像及放射免疫治疗药物,值得进一步深入研究。     

间期荧光原位杂交检测骨髓增生异常综合征-5/5q-染色体异常

目的 评价间期荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH)在检测骨髓增生异常综合征（MDS）－5/5q-染色体异常中的价值。方法 应用荧光素SpectrumRed直接标记的5q31单一序列特异性DNA探针,对48例MDS患者和10名正常对照者的骨髓细胞进行间期FISH检测,每例分析200－300个细胞,以1个红色荧光杂交信号＞6％（x^- 3SD)为阳性标准,并与常规细胞遗传学检测结果相比较。结果 48例MDS患者中,间期FISH检测13例（27．1％）为阳性,其中7例常规细胞遗传学检测也为阳性,6例为阴性;经配对x^2检验,间期FISH和常规细胞遗传学两种方法阳性检出率差异有显著性（P＜0．05）。结论 间期FISH是检测MDS－5／5q-染色体异常的有力的分子遗传学工具,其敏感性高于常规细胞遗传学检测法,是常规细胞遗传学检测法的一个重要补充。     

染色体检测在骨髓增生异常综合征诊断中的意义

骨髓增生异常综合征(ＭＤＳ)系一组造血干细胞的克隆性疾病 ,其主要特征为无效造血所致的难治性血细胞减少 ,部分患者死于因骨髓衰竭所致的出血或感染 ,部分患者则转变为急性白血病。ＭＤＳ的临床表现和血液学改变是高度异质性的 ,1982年国际ＦＡＢ协作组将其分为以下 5个亚型 :①难治性贫血 (ＲＡ) ;②环状铁粒幼细胞增多的ＲＡ(ＲＡＳ) ;③原始细胞增多的ＲＡ(ＲＡＥＢ) ;④向白血病转化中的ＲＡＥＢ(ＲＡＥＢ -ｔ) ;⑤慢性粒单核细胞白血病 (ＣＭＭＬ)。病态造血改变虽为ＭＤＳ的重要细胞学特征 ,但需要指出的是 ,它并不是诊断ＭＤＳ绝对…