IL-1Ra和IL-10真核表达质粒载体的构建及其表达检测

目的:构建人IL-1Ra和人IL-10真核表达质粒载体并检测其表达。方法:用双酶切方法切取PCDI-IL-1Ra和PCDI-IL-10质粒中包含人IL-1Ra和人IL-10 CDS全长序列的cD-NA片段,并分别连接到真核表达质粒pcDNA3.1上,然后用壳聚糖转染上述质粒到原代软骨细胞,RT-PCR检测其mRNA水平的表达。结果:成功将人IL-1Ra和IL-10 CDS全长序列的cDNA片段克隆到真核表达载体,mRNA水平检测到目的基因的表达明显提高。结论:真核表达质粒可以用于外源基因的原代软骨细胞导入和表达,为进一步的基因治疗研究提供依据。     

游泳训练对增龄小鼠骨骼肌IIb型肌球蛋白重链基因表达的影响

测定与分析了游泳训练对增龄小鼠骨骼肌Ⅱb型肌球蛋白重链基因表达水平的影响.结果表明:①增龄引起小鼠骨骼肌Ⅱb型肌球蛋白重链基因表达水平下降;②运动可提高年轻小鼠和老龄小鼠的Ⅱb型肌球蛋白重链基因表达水平;③不同的训练安排对小鼠骨骼肌Ⅱb型肌球蛋白重链基因表达水平的影响不同,隔日训练的效果比每日训练好.     

游泳训练对增龄小鼠骨骼肌Ⅱb型肌球蛋白重链墓因表达的影响

测定与分析了游泳训练对增龄小鼠骨骼肌Ⅱｂ型肌球蛋白重链基因表达水平的影响。结果表明：①增龄引起小鼠骨骼肌Ⅱｂ型肌球蛋白重链基因表达水平下降;②运动可提高年轻小鼠和老龄小鼠的Ⅱｂ型肌球蛋白重链基因表达水平;③不同的训练安排对小鼠骨骼肌Ⅱｂ型肌球蛋白重链基因表达水平的影响不同,隔日训练的效果比每日训练好。     

雌激素对Ca2+通道亚型Cav1及Cav3在子宫内膜癌细胞中表达的影响

子宫内膜癌是最常见的女性生殖道三大恶性肿瘤之一,其发生、发展与高雌激素水平相关,多见于老年妇女,近年来发病率有升高趋势.有关子宫内膜癌发病机制,传统的观点是雌激素与其核受体(nER)结合,激活下游元件调控相应的基因转录,使细胞增殖;而Wang等[1]证明了子宫内膜癌细胞膜上存在雌激素膜受体(mER),并且雌激素能够调控mER的表达;Zhang等[2]发现,雌激素可以通过细胞膜引起Ca2+浓度快速增高.     

胰岛素样生长因子结合蛋白3增强子元件(IEE)的生物学特征

背景:在细胞水平,胰岛素样生长因子结合蛋白3竞争性地与胰岛素样生长因子结合阻止了胰岛素样生长因子与其受体结合,从而抑制了胰岛素样生长因子的活性.目的:观察衰老细胞中调节性蛋白质胰岛素样生长因子结合蛋白3的生物学特征.设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-09/2007-09在西安交通大学生物医学信息工程教育部重点实验室完成.材料:人胚肿二倍体成纤维细胞(2BS)购于中国生物制品研究所.方法:用Northern的方法显示胰岛素样生长因子结合蛋白3基因的表达在年轻和衰老的2BS细胞中存在差异:聚合酶链反应扩增出人类胰岛素样生长因子结合蛋白3上游包括5'-UTR区的2kb的序列,并用酶切得到4组不同长短的胰岛素样生长因子结合蛋白3启动子片段并确定可调控转录活性的区域;通过重叠寡核苷酸凝胶阻滞实验确定在该活性区域中的增强子元件-IEE(IGFBP-3 enhancerelement)及其与蛋白结合的碱基序列等;用DNase I Footprinting法确定了IEE中与蛋白结合的核心序列.主要观察指标:①胰岛素样生长因子结合蛋白3基因在年轻和衰老细胞中的表达差异.②通过重叠寡核苷酸确定增强子元件.③通过凝胶阻滞试验证实该复合物结合活性与衰老相关的.④通过凝胶阻滞试验确定IEE与蛋白结合的碱基序列.⑤用DNase I Footprinting法确定IEE中与蛋白结合的核心序列.⑥判断与IEE结合蛋白的相对分子质量.结果:与年轻的2BS细胞相比,衰老的2BS细胞中胰岛素样生长因子结合蛋白3基因的表达升高:5'-ccagcctgccaa gca gcg tgcCCCggttgc-3'是胰岛素样生长因子结合蛋白3的增强子元件;该元件与蛋白结合的核心序列是CTG CCA和GCGTGC CCC G,而且这种结合是与衰老相关的:结合蛋白的相对分子质量大约在27 000.结论:在2BS细胞中发现了一个新的转录增强子,它与蛋白结合的核心序列是CTGCCA和GCG TGC CCC G,可与一个大约27 000的蛋白结合:在衰老细胞中可选择性地促进胰岛素样生长因子结合蛋白3的表达.     

雌激素对Ca2+通道亚型Cav1及Cav3在子宫内膜癌细胞中表达的影响

子宫内膜癌是最常见的女性生殖道三大恶性肿瘤之一,其发生、发展与高雌激素水平相关,多见于老年妇女,近年来发病率有升高趋势.有关子宫内膜癌发病机制,传统的观点是雌激素与其核受体(nER)结合,激活下游元件调控相应的基因转录,使细胞增殖;而Wang等[1]证明了子宫内膜癌细胞膜上存在雌激素膜受体(mER),并且雌激素能够调控mER的表达;Zhang等[2]发现,雌激素可以通过细胞膜引起Ca2+浓度快速增高.     

大鼠衰老过程中脑细胞DNA与Yas原癌基因的甲基化

衰老过程中DNA甲基化水平常有明显改变。我们用MSPⅠ/HpaⅡ酶解电泳和高效液相色谱(HPLC)两种方法进行比较,研究了不同年龄大鼠的肝脑细胞基因组DNA甲基化的程度。酶解电泳图谱未观察到青年鼠和老年鼠之间基因组甲基化的差别,但用HP-LC测量DNA中5-甲基胞嘧啶的含量时发现,老年     

胰岛素样生长因子结合蛋白3增强子元件(IEE)的生物学特征**☆◆

背景：在细胞水平，胰岛素样生长因子结合蛋白3竞争性地与胰岛素样生长因子结合阻止了胰岛素样生长因子与其受体结合，从而抑制了胰岛素样生长因子的活性。 目的：观察衰老细胞中调节性蛋白质胰岛素样生长因子结合蛋白3的生物学特征。 设计、时间及地点：单一样本观察，于2006-09/2007-09在西安交通大学生物医学信息工程教育部重点实验室完成。 材料：人胚肺二倍体成纤维细胞(2BS)购于中国生物制品研究所。 方法：用Northern的方法显示胰岛素样生长因子结合蛋白3基因的表达在年轻和衰老的2BS细胞中存在差异；聚合酶链反应扩增出人类胰岛素样生长因子结合蛋白3上游包括5’-UTR区的2kb的序列，并用酶切得到4组不同长短的胰岛素样生长因子结合蛋白3启动子片段并确定可调控转录活性的区域；通过重叠寡核苷酸凝胶阻滞实验确定在该活性区域中的增强子元件-IEE(IGFBP-3 enhancer element)及其与蛋白结合的碱基序列等；用DNase I Footprinting法确定了IEE中与蛋白结合的核心序列。 主要观察指标：①胰岛素样生长因子结合蛋白3基因在年轻和衰老细胞中的表达差异。②通过重叠寡核苷酸确定增强子元件。③通过凝胶阻滞试验证实该复合物结合活性与衰老相关的。④通过凝胶阻滞试验确定IEE与蛋白结合的碱基序列。⑤用DNase I Footprinting法确定IEE中与蛋白结合的核心序列。⑥判断与IEE结合蛋白的相对分子质量。 结果：与年轻的2BS细胞相比，衰老的2BS细胞中胰岛素样生长因子结合蛋白3基因的表达升高； 5’-cca gcc tgc caa gca gcg tgc ccc ggt tgc-3’是胰岛素样生长因子结合蛋白3的增强子元件；该元件与蛋白结合的核心序列是CTG CCA和GCG TGC CCC G，而且这种结合是与衰老相关的；结合蛋白的相对分子质量大约在27 000。 结论：在2BS细胞中发现了一个新的转录增强子，它与蛋白结合的核心序列是CTG CCA和GCG TGC CCC G，可与一个大约27 000的蛋白结合；在衰老细胞中可选择性地促进胰岛素样生长因子结合蛋白3的表达。     

人衰老成纤维细胞c—myc原癌基因的损伤修复

目的；观察人衰老成纤维细胞特异因基ｃ－ｍｙｃ的损伤修复，方法采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交法。结果；衰老细胞能有效地修复ｃ－ｍｙｃ基因。结论；衰老细胞有效地修复对细胞存亡至关重要的基因。