艰难梭菌谷氨酸脱氢酶的表达及抗原性分析

目的：构建艰难梭菌（CD）谷氨酸脱氢酶（GDH）的原核表达载体,表达重组蛋白并鉴定其抗原活性。方法以 CD 的 ATCC43255菌株基因组 DNA 为模板,通过 PCR 法扩增 GDH 全长基因片段,构建原核表达载体并转化到大肠杆菌中,IPTG 诱导表达 GDH 蛋白,并用 Ni 柱进行纯化。利用 CD 抗原检测试剂盒对 GDH 抗原区段的抗原性进行鉴定。结果构建的原核表达载体 pET-28a／GDH 可在大肠杆菌中成功表达,获得的 GDH 抗原能与相应抗体产生特异性反应。结论原核表达的 CD 的 GDH 抗原具有很好的抗原活性,为进一步制备相应抗体并建立CD 的 GDH 抗原的免疫检测方法奠定了基础。     

丙型肝炎病毒非结构区 3(NS3)Ⅰ、Ⅱ型血清反应性的比较研究

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)非结构区3(NS3)Ⅰ型、Ⅱ型血清反应性.方法利用表达载体PBVIL1对HCV全长NS3区Ⅰ型、Ⅱ型抗原表位进行克隆表达,经纯化获得电泳纯的抗原.经酶联免疫吸附(ELISA)的方法检测丙型肝炎179份总抗体可疑阳性血清,再用NS3区Ⅰ、Ⅱ型抗原进行相应抗体检测.结果通过测定HCV-NS3区Ⅰ型、Ⅱ型抗体,179份HCV-NS3区1型阳性检出105份,HCV-NS3区Ⅱ型阳性检出95例.结论重组表达的HCV-NS3 Ⅰ型、Ⅱ型抗原对丙型肝炎病毒血清反应略有不同.二者具有一定的互补性.     

白介素-15突变体在大肠杆菌中的克隆表达及鉴定

目的 :构建两株IL 15末端缺失突变体以研究其N、C端对其功能的影响。方法 :以pBV2 2 0为载体 ,在大肠杆菌中进行表达。表达产物以包涵体形式存在 ,经过SDS PAGE纯化 ,复性 ,以CTLL 2增殖实验检测野生型及突变体的生物活性。结果 :N端缺失突变体失去了增殖活性 ,而C端缺失突变体保持了对CTLL 2的生长刺激活性     

丙型肝炎病毒优势表位抗原不同嵌合表达蛋白的血清反应性研究

目的采用含HCV不同优势表位抗原进行连接表达,对20份血清进行对比检测,探讨血清反应性.方法构建原核融合表达载体pBVIL-1,精选出HCV主要表位抗原插入表达载体在E.coli中表达,纯化后的融合抗原包被酶联板,用ELISA方法进行测定.结果不同抗原组合连接(HCV NS4-Core、NS4-Core-NS3、NS4-Core-NS5AB-NS3)对血清的反应性不同.结论含有多个抗原表位的嵌合抗原,能提高检测的灵敏度.     

利用噬菌体表面呈现技术制备HIV-1整合酶单链抗体的初步研究

目的：研制ＨＩＶ－１整合酶（ｉｎｔｅｇｒａｓｅ，ＩＮ）的重组噬菌体单链抗体。方法：采用噬菌体表面呈现方法。结果：由ＩＮ蛋白免疫的小鼠脾细胞ｍＲＮＡ中构建了单链抗体基因ｃＤＮＡ文库，克隆入噬菌粒载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ，经转化大肠杆菌ＴＧ１，获得了库容为３．５×１０５的表达文库。利用包被在酶联板上的ＩＮ蛋白进行四轮亲和富集，筛选出７６株具有ＩＮ结合活性的重组噬菌体。对随机挑选的一株克隆进行了ＤＮＡ序列分析，证明其符合小鼠抗体序列。结论：获得了抗ＨＩＶ－１ＩＮ的噬菌体单链抗体，为其进一步研究打下基础。     

人C-反应蛋白的提取、纯化和测定

C-反应蛋白(CRP)是一种经典的急性时相的血浆蛋白质。正常健康人血清中CRP含量极低(1～3μg/ml),而在各种炎症(感染)、组织损伤,恶性肿瘤、心肌梗塞等情况下,在数小时内即急剧上升,超过正常值达数十至数百倍之巨。当病情缓解时又能迅速恢复正常。CRP浓度的变化虽仅反映了疾病的非特异性变化,但在临床上对疾病的诊断、鉴别诊断、治疗和转归均有重要的参考意义。因而近年来在国内、外又引起了人们极大的兴趣和重视。CRP的分离提纯方法,文献报道很多,有硫胺划分后C多糖(CPS)沉淀法,DEAE-纤维素离子交换法,用CRP的配基如磷     

人外周血淋巴细胞表面SRBC受体的研究 Ⅳ.人和猪SRBC受体的比较研究

人和猪的胸腺和外周血淋巴细胞都能和SRBC形成E-玫瑰花。如SRBC是以同样的配体和上述细胞结合,那末在上述细胞的表面应具有同样的SRBC受体。去年我们用亲和层析法提取人血清中SRBC受体,在PAGE上虽呈一条区带,但其中尚含有不     

人ZnT8抗原在1型糖尿病诊断中的初步应用

目的构建人锌转运子ZnT8基因N末端、C末端和N-C融合区段的原核表达载体,诱导表达获得重组蛋白,并初步验证各抗原在1型糖尿病ZnT8自身抗体检测中的价值。方法应用RT-PCR方法调取目的基因,构建相应的原核表达质粒,转化大肠杆菌E.coli HB101,诱导表达获得纯化重组蛋白,并作为抗原包被酶联板,初步建立检测ZnT8自身抗体的ELISA方法 ,评价各基因片段在1型糖尿病诊断中的价值。结果获得了3种可被1型糖尿病患者血清识别的重组人ZnT8抗原区段,其中C末端区段ZnT8（268-369aa）与其它两个片段相比具有更高的检测敏感性和特异性,成为首选的抗原区段。结论所选重组人ZnT8（268-369aa）抗原区段具有良好的抗原性,可作为1型糖尿病患者辅助诊断试剂的候选抗原。     

基于化学发光肠道病毒71型IgM抗体检测试剂的研制及初步应用

目的在肠道病毒71型(EV71)重组外壳蛋白VP1的基础上建立以化学发光为基础的IgM抗体检测技术,并与普通TMB显色酶联免疫吸附法比较,评价其临床应用前景。方法采用抗IgM单克隆抗体及辣根酶标记的重组VP1抗原,在此基础上建立EV71-IgM捕获法化学发光检测技术,并对比化学发光检测技术与普通酶联检测技术在45份EV71抗体阳性和30份阴性血清中的反应情况。结果化学发光法、普通酶联免疫吸附法、市售EV71-IgM检测试剂分别能与38份、19份、26份EV71抗体阳性血清发生阳性反应,灵敏度分别为84.4%、42.2%和57.8%;化学发光法灵敏度显著高于其他两种,差异有统计学意义(P<0.05);3种检测方法与阴性血清均无阳性反应。结论在EV71-VP1重组抗原的基础上建立的EV71-IgM捕获法化学发光检测技术具有很高的灵敏度,并有很好的临床应用前景。     

HIV-1整合酶单链抗体在大肠杆菌中的表达、纯化与鉴定

将具有HIV－1整合酶结合活性的单链抗体重组噬菌体感染HB2151大肠杆菌,经IPTG诱导．在周质腔萃取物及培养基上清中,均检测到有较特异与整合酶结合的可溶性单链抗体的表达。利用HiTrapAnti－Etags对单链抗体进行了亲和层析纯化。Western-blot结果初步表明,单链抗体不仅可与整合酶的单体反应,而且也可与其二聚体结合。提示：研制的单链抗体可用于对HIV－1整合酶活性影响的研究。