抗人肝癌单克隆抗体嵌合Fab在巴氏毕赤酵母中的高效分泌表达

目的:通过分步整合,用巴氏毕赤酵母表达抗人肝癌单克隆抗体(mAb)HAb18的嵌合Fab(cFab)片段。方法:将抗人肝癌mAbcFab/HAb18基因的原核表达载体pET32a/cFab中的CL和Fd段基因,分别亚克隆到酵母表达载体pPIC9K和pPICZαA中,构建重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd并测序鉴定。将重组质粒pPIC9K/CL和pPICZαA/Fd分步整合到酵母菌GS115的染色体上,经G418和Zeocin筛选高拷贝的转化子及鉴定Mut表型后,用含5mL/L甲醇的培养基诱导表达。结果:成功地表达抗人肝癌mAbHAb18的cFab,表达水平为26mg/L。Westernblot鉴定证实,表达产物具有良好的与HAb18结合的活性和特异性。结论:cFab/HAb18在巴氏毕赤酵母获得表达,为对其进一步大规模的生产和临床应用奠定了基础。     

大鼠β细胞素蛋白的表达、纯化及生物学活性鉴定

目的:获得大量重组大鼠β细胞素并检测其活性。方法:用PCR法从大鼠肾组织中扩增534bp的β细胞素基因片段,并按读框克隆到原核表达载体pET28a( )中。以构建的重组质粒pET28a-rBTC转化大肠杆菌BL-21(DE3)菌株,在IPTG诱导下表达β细胞素蛋白,表达产物用SDS-PAGE和Westernblot检测。采用镍柱亲和层析法纯化目的蛋白。结果:经IPTG诱导后,在大肠杆菌中可表达相对分子质量Mr为20000的目的蛋白。目的蛋白主要以包涵体的形式表达;表达量约占菌体蛋白总量的20%～30%。表达的目的蛋白与抗His标签抗体具有良好的反应性。结论:大鼠β细胞素基因在PET表达系统中得到高效表达;蛋白复性后能有效地促进NIH3T3细胞的体外增殖。     

肝移植106例术后急性排斥反应的诊断和治疗

目的:总结肝移植急性排斥反应的新表现及诊治经验. 方法:回顾我中心106例肝移植资料,对其中发生急性排斥反应病例的临床表现、病理组织学改变、诊治方案加以分析. 结果:106例肝移植中,术后发生急性排斥反应17例(16.0%);其中临界型1例,轻度6例,中度7例,重度3例. 这些病例在具备病理组织学改变的同时缺乏典型的临床特征和肝功能生化指标的改变. 结论:由于强效免疫抑制剂的应用,肝移植术后急性排斥反应发生的临床症状和体征不典型,我们应该重视急性排斥反应的诊断并积极治疗.     

p27~(Kip1)诱导肝癌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨过表达的p27Kip1对肝癌细胞的抑制作用。方法:利用脂质体介导法将真核表达载体pcDNA3.1/Myc-His(+)C-p27Kip1基因导入HHCC细胞中,用Westernblot检测p27Kip1是否导入到肝癌细胞中;用流式细胞仪检测过表达的p27Kip1对肝癌细胞HHCC的抑制作用;电子显微镜技术探讨过表达的p27Kip1抑制肝癌细胞生长的可能机制。结果:Westernblot检测表明,转染p27Kip1的HHCC细胞大部分有p27Kip1蛋白的表达;而转染空载体或未转染的HHCC细胞,均未见p27Kip1蛋白表达。经连续3次克隆化后,转染pcDNA3.1/Myc-His(+)C-p27Kip1的HHCC细胞100%表达p27Kip1蛋白。过表达的p27Kip1对HHCC细胞有明显的抑制作用,其抑制率为49.09%～56%;过表达的p27Kip1可以封闭G1期的进程和诱导肝癌细胞发生凋亡,其凋亡百分比为12.3%。结论:过表达的p27Kip1可以通过诱导肝癌细胞凋亡抑制肝癌细胞生长。     

乌司他丁治疗急性胰腺炎临床疗效观察

目的：观察乌司他丁对急性胰腺炎的治疗作用。方法：回顾性对比分析1996－06－2001－06 72例急性胰腺炎，应用乌司他丁，生长抑素和其他方法的治疗效果。结果：应用乌司他丁治疗组体温，白细胞总数，SpO2，腹部胀痛及压痛恢复与生长抑素组和对照组有显著差异（P＜0．05），血压，心率，呼吸，肠鸣音，血，尿淀粉酶恢复明显优于对照组（P＜0．05），结论：乌司他丁对急性胰腺炎有较好的治疗作用，尽早应用能在较短时间内稳定，控制急性胰腺炎的病情发展，减少并发症的发生。     

临床活体肝部分移植术1例报告

临床活体肝部分移植术１例报告７１００３２西安第四军医大学西京医院窦科峰管文贤李开宗高志清付由池张新海曹忆妹张英民王宇朱庆生周晓东丁振若蒋永培孙秉中沈丽英李兰荪田俊士贺洪德赵青川史宪杰岳树强陶开山安家泽王德盛自１９８９年９月成功开展首例临床活体肝部分移...     

创伤性胆道出血的诊断与治疗

目的：通过对我院处理典型病历的分析，探讨创伤性胆道出血的机制及诊断和治疗方法。方法：本文中介绍了我院经不同方法处理成功的3例创伤性胆道出血，针对这3例患者的病情，分别采用了保守治疗，选择性肝动脉松塞及手术治疗方法。结果：1例患者经止血、抗感染治疗痊愈；1例出现活动性出血时经选择性肝动脉栓塞治愈。另1例经手术治愈，上述病例经随访病情无反复。结论：通过对上述3例病例的分析，我们认为对于出血周期较长，每次出血量较少，一般情况较好的患者可以试行内科治疗。而对其它患者，若有条件应首选择性肝动脉栓塞，其次为手术治疗。     

困难型腹腔镜胆囊切除手术体会(附102例分析)

目的:探讨采用腹腔镜胆囊切除治疗术中操作困难的患者。方法:对102例术中操作困难的患者行LC。结果:所有患者中中转开腹8例,术后胆漏1例,其他患者均取得了相对满意的疗效,顺利痊愈,没有死亡病例发生。结论:困难型LC风险大,术中需谨慎,加强责任心,能熟练胆道解剖变异,规范操作,术中反复确认,可大大降低损伤机会。