溴化1-甲基-1-苄基-4-(((三苯基锡基)硫)硫代甲酰基)哌嗪-1-铵的活性测定

目的测定硫代甲酸盐有机锡类成盐化合物溴化1-甲基-1-苄基-4-(((三苯基锡基)硫)硫代甲酰基)哌嗪-1-铵对小鼠的半数致死量(median lethal dose,LD50)、对小鼠体液免疫功能的影响及其抗菌活性。方法急性毒性试验检测LD50,溶血素测定法测定体液免疫功能,纸片扩散法、倍比稀释法检测其抗菌活性。结果以小鼠急性死亡率为指标,测得LD50为93.7 mg/kg,可信限为(100.98±8.66)mg/kg,可信限率为8.58%,小于10%,表明实验方法准确度高,数据可靠性高;溶血素测定结果表明:与对照组相比,低、中、高3个剂量组的半数溶血值(half value of hemolysin,HC50)显著较高(P<0.01),差异有统计学意义,与阴性对照组相比,空白对照组及3个剂量组均较高(P<0.01),差异有统计学意义,表明此药有提高体液免疫的效果;抗菌活性测定结果表明此药对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和伤寒杆菌均显示抑菌作用,其中对伤寒杆菌抑制效果最好,其最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC值)为0.31 mg/m L。结论溴化1-甲基-1-苄基-4-(((三苯基锡基)硫)硫代甲酰基)哌嗪-1-铵为中度毒性药物,有体液免疫调节作用,且随剂量增加作用降低,对所测菌株具有抗菌活性。     

水杨醛缩氨基脲含硅有机锡化合物的合成和抑菌活性测试

目的 合成新型的含硅有机锡化合物,并进行抑菌活性测试。方法 利用4种水杨醛缩氨基脲配体与(Me₃SiCH₂)₂SnCl₂通过常温下的自组装反应合成了4种新型含硅有机锡化合物,利用红外光谱、核磁共振以及X-射线单晶衍射对所得产物的结构进行表征,通过纸片扩散法测试产物的抑菌活性。结果 在化合物1~4中,水杨醛缩氨基脲配体均呈现三齿配体形式与锡原子螯合配位,中心锡原子呈五配位的三角双锥结构。抑菌实验发现3种新合成的水杨醛缩氨基脲含硅有机锡化合物对G⁺菌包括金黄色葡萄球菌、G⁺蜡样芽孢杆菌和真菌蜡蚧轮枝孢菌显示抑菌作用。化合物3对金黄色葡萄球菌的抑菌圈为20 mm,最低抑菌浓度为25.17 mol·L^-1。此类化合物对G^-菌包括大肠杆菌、伤寒杆菌、产气肠杆菌无明显抑制作用。结论 水杨醛缩氨基脲含硅有机锡化合物对G⁺菌包括金黄色葡萄球菌及真菌蜡蚧轮枝孢菌具有一定的抑菌活性,对G^-菌无明显的抑制作用。     

重组人组织型纤溶酶原激活剂衍生物在毕赤酵母中的表达

目的在毕赤酵母中表达重组人组织型纤溶酶原激活剂衍生物(rPAm),并检测rPAm的活性。方法用PCR从质粒pLFrGGI上扩增出目的蛋白(rPAm)基因,再亚克隆到酵母表达载体pMEX9K中,转化到宿主菌GS115,菌落PCR鉴定转化子,重组酵母经甲醇诱导后,通过SDS-PAGE及Western-blot分析鉴定表达产物,再通过层析法纯化目的蛋白,用溶圈法测定目的蛋白的活性。结果表达的重组蛋白分子量约为50kD。纯化后的目的蛋白的纯度可达到95%。Western-blot显示能与抗tPA抗体特异性结合,纯化后rPAm比活性为5.02×105IU/mg,比活性与t-PA相当。结论成功构建了rPAm酵母表达工程菌,建立了对目的蛋白的纯化方法。     

抗凝血酶受体单克隆抗体的制备与鉴定

采用杂交瘤技术，获得了４株稳定分泌抗凝血酶受体单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株。４株ＭｃＡｂ均为ＩｇＧ１κ链。ＥＬＩＳＡ交叉试验结果表明，该ＭｃＡｂ不与人凝血酶、凝血酶原和ＨＣＶ多肽反应。４株杂交瘤细胞培养上清液效价为３．２×１０－２～１．２８×１０－３，腹水效价为１．６×１０－６～５．１２×１０－７。     

抗基孔肯亚病毒人-鼠嵌合抗体真核表达载体的构建和表达

目的：表达具有中和活性的抗基孔肯亚病毒人．鼠嵌舍抗体。方法：用RT-PCR法克隆具有中和活性的抗基孔肯亚病毒鼠源单克隆抗体CHIK-IF1的轻重链可变区基因，克隆人IgG1恒定区基因组基因，构建了轻重链嵌舍基因和表达质粒pCdhfrlL，pcDNA3、1H，共转染二氢叶酸还原酶缺陷型CHO细胞，用ELISA检测培养上清中嵌舍抗体的表达，MTX加压筛选表达量高的克隆，扩大培养收集上清并纯化，纯化的嵌合抗体进行SDS-PAGE、Western印迹检测和抗原结合活性的检测。结果与结论：在CHO细胞中成功表达了抗基孔肯亚病毒的嵌舍抗体，为制备抗基孔肯亚病的被动免疫制剂奠定了良好的基础。     

抗前列腺干细胞抗原鼠单克隆抗体的制备及其初步鉴定

目的:制备抗前列腺干细胞抗原鼠单克隆抗体(mAb).方法:采用杂交瘤技术,获得了10余株针对前列腺干细胞抗原(PSCA)的鼠mAb杂交瘤细胞株,对其中的6株进行了相关鉴定.结果:6株mAb的腹水效价均达到 1: 512 000,将其中的两株mAb进行了纯化,纯化后纯度大于90%,抗体亚类(型)mAb1、 mAb26为 IgG2b/k型,mAb6、 mAb11、 mAb37 为IgG1/k型,mAb46为 IgG2a/k型;ELISA结果显示制备的mAb与PSCA可发生特异反应.结论:制备了抗前列腺干细胞抗原鼠mAb,为PSCA生物学功能的研究打下基础.     

利用穿梭质粒快速构建含抗HAV Fab基因的重组杆状病毒

采用Bac-to-Bac系统,分别将Fd、轻链连同其信号肽基因克隆于pFastBac Dual不同启动子下,转化DH10Bac后,快捷方便地获得重组病毒,并且在sf9细胞中表达出具有HAV抗原结合活性的Fab。 1.材料和方法:(1)质粒、细胞株:pBSFdS:含重链及其信号序列基因的质粒,pBSLS:含轻链及其信号序列基因的质粒,由本室构建;pFastBac Dual质粒购自美国Gibco公司。草地贪夜蛾细胞(sf9),购自美国Invitrogen公司。(2)重组Bacmid的筛选:重组转座载体pFBFab转化DH10Bac,涂布于X-gal和IPTG的平板,挑选较大的白色菌落,提取质粒,即为重组的Bacmid。(3)转染sf9细胞:用Lipofectamine Plus转染,27℃培养过夜,次日换液,继续培养72h。收集上清液,500×g离心10min,将上清液分成小份作病毒原种。(4)重组蛋白的表达及检测:每瓶加入含适量重组杆状病毒毒种的完全培养基2ml,加入     

抗耐药菌中草药成分的研究进展

耐药菌,尤其是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的出现是抗生素广泛应用于临床后产生的越来越严重的难题：普通抗生素难以奏效,虽然万古霉素是MRSA感染的最有效的抗生素,临床上广泛应用可导致严重的不良反应,而且对万古霉素耐药的细菌已见报道。由抗生素应用引起的耐药性问题使国内外医药界把注意力转向具有抗菌活性的中草药,如何从中草药中筛选出抗耐药菌的活性成分引起更多的关注,本文介绍抗耐药菌中草药成分的研究进展。     

中草药成分抗缺血性脑卒中药理作用的研究进展

脑卒中后脑损伤涉及多种机制,临床上一般用溶栓治疗来解除梗死,建立缺血区域血流再灌注,而对于缺血引起的脑组织损伤尚无有效治疗药物。中药因具有多治疗靶点而日益受到人们的关注,从中草药中筛选出治疗缺血性脑卒中的活性成分具有良好的开发前景。