肉毒毒素防治药物的研究进展

肉毒毒素是目前已知毒性最强的蛋白质,可以引发严重的突发公共卫生事件,也是重要的生物战剂和生物恐怖剂,因此迫切需要研制医学防治药物以应对其威胁。本文概述了国内外在肉毒毒素预防性疫苗和治疗性中和抗体防治药物研发进展,同时分析了肉毒毒素防治药物的新趋势和今后的主要发展方向。     

阿尔茨海默病多肽表位疫苗免疫原性研究

目的以淀粉样蛋白Aβ作为免疫靶标,优化阿尔茨海默病多肽B细胞表位疫苗。方法化学合成人Aβ1-42多肽、含B细胞表位的Aβ1-15多肽、含两个B细胞表位及一个辅助T细胞表位PADRE的多肽Aβ（1-15）2-PADRE及含13个氨基酸的PADRE。以上4种多肽免疫普通BALB/c小鼠,ELISA试验比较免疫后的小鼠血清抗体水平和亚型,点杂交分析其与不同状态Aβ的结合免疫特性。结果 Aβ（1-15）2-PADRE组免疫后诱导产生了良好的免疫效果,100μg组4次免疫后其抗体滴度可以达到1∶3500;抗体亚型分析后得知,其主要产生IgG1型抗体,免疫反应完全偏向于Th2型,其免疫血清可与不同状态Aβ的结合免疫特性不同。结论辅助T细胞表位PADRE增强了B细胞表位Aβ1-15的免疫效果,并且其免疫血清抗体与Aβ寡聚体结合效果更好。     

炭疽保护性抗原第四结构域基因在重组SFV复制子载体中的表达

目的：构建炭疽毒素保护性抗原第四结构域PA4基因的重组Semliki森林病毒（Semliki forest virus，SFV）复制子载体，并观察PA4抗原在重组SFV复制子载体中的表达。方法：将PA4基因克隆到基于RNA和DNA的SFV复制子表达载体中，获得的重组SFV复制子载体直接转染．BHK21细胞，通过间接免疫荧光和Western印迹试验检测PA4在细胞中的表达；与辅助病毒载体共转染制备重组病毒颗粒，通过间接免疫荧光和Western印迹检测PA4在重组病毒颗粒感染细胞中的表达。结果与结论：成功地构建了基于RNA和DNA的PA4重组SFV复制子载体，并且在体外基于RNA和DNA的重组SFV复制子表达载体能够在细胞中有效地表达非分泌型和分泌型的PA4抗原，制备了具有感染能力并能表达PA4抗原的重组病毒颗粒，为进一步以SFV复制子作疫苗载体观察炭疽新型复制子疫苗的免疫原性奠定了基础。     

川楝素水解与氢化还原产物的结构鉴定及其对肉毒毒素解毒作用研究

目的鉴定川楝素水解及氢化还原产物的结构,并测定其对肉毒毒素的解毒效果。方法用一定比例的稀氨水水解川楝素,用氢化铝锂还原川楝素的环氧键,然后用高效液相色谱纯化各产物,用质谱、核磁共振氢谱鉴定产物结构;解毒活性测定中,小鼠用2LD50的A型肉毒毒素攻毒,腹腔注射不同剂量的川楝素水解及氢化产物后,4 d内观察小鼠死亡情况。结果与结论除全脱乙酰基产物外,获得2个川楝素单脱乙酰基产物及全脱乙酰基并环氧键还原的新产物,这些产物的毒性及对肉毒毒素的解毒活性降低。该工作为川楝素的体内药代产物鉴定及应用奠定了一定的基础。     

美国生物防御对策研究与国家战略储备药物分析

美国政府为应对日趋严峻的生物恐怖威胁,出台了一系列针对生化袭击的法规和研究计划.本文研究了以生物盾牌计划为核心的美国国家生物防御应对策略及其衍生计划,包括卫生与公众服务部( DHHS)/生物医学高级研究发展局(BARDA)生物恐怖应对计划及预算方案、以疾控中心(CDC)病原体清单为基础的顶级核化生威胁对策方案及其他重要病原体生物防御治疗研究计划等.分析了目前以上述研究为依托纳入国家战略储备体系的药物及研发趋势.     

A型肉毒毒素轻链抑制剂苯并硒唑衍生物的合成及活性评价

目的 合成一系列含芳香基、直链取代基苯并硒唑,抑制A型肉毒毒素(BoNT/A)轻链活性,获得A型肉毒毒素(BoNT/A)的解毒剂.方法 以邻氨基苯甲酸甲酯为起始原料,经重氮化、酰氯化合成中间产物2?硒化苯甲酰氯,再与含不同取代基的芳香胺、直链胺反应合成一系列依布硒啉(ebselen)类及其他苯并硒唑衍生物.采用荧光共振能量转移法(FRET)测定各苯并硒唑衍生物对BoNT/A轻链的抑制活性,测定它们与谷胱甘肽(GSH)的反应性,以考察其与体内其他蛋白或含巯基分子的反应性,最后测定各抑制剂的体内解毒活性.结果 4?甲酸基、4?乙酸基取代依布硒啉的抑制轻链活性(IC50分别为0.81、0.42μmol/L)高于依布硒啉(IC50=1.31μmol/L)1～2倍;含丙酸基、甲基、乙基、氟、氯、溴、胺基、甲氧基、3,5?二甲氧基依布硒啉硒唑衍生物以及喹啉基、直链丁酸基及己酸基苯并硒唑活性降低(IC50为4.16～7.18μmol/L);而依布硒啉邻羧基衍生物、苯并咪唑硒唑的抑制剂活性显著下降(IC50>10μmol/L).GSH与含苯并咪唑硒唑、依布硒啉邻羧基衍生物反应较慢,其余均较快.2LD50的BoNT/A给毒1 h后,单次或多次给予20 mg/kg依布硒啉或其他苯并硒唑衍生物,苯并咪唑硒唑组可显著提高小鼠在72 h内的生存率.结论 在依布硒啉右侧苯环上连接甲酸基和乙酸基后能提升其对BoNT/A轻链抑制活性,并增加了水溶性,但不能提高体内活性,苯并咪唑硒唑可显著提高小鼠在72 h内的生存率.     

川楝素水解与氢化还原产物的结构鉴定及其对肉毒毒素解毒作用研究

目的鉴定川楝素水解及氢化还原产物的结构,并测定其对肉毒毒素的解毒效果。方法用一定比例的稀氨水水解川楝素,用氢化铝锂还原川楝素的环氧键,然后用高效液相色谱纯化各产物,用质谱、核磁共振氢谱鉴定产物结构;解毒活性测定中,小鼠用2LD50的A型肉毒毒素攻毒,腹腔注射不同剂量的川楝素水解及氢化产物后,4 d内观察小鼠死亡情况。结果与结论除全脱乙酰基产物外,获得2个川楝素单脱乙酰基产物及全脱乙酰基并环氧键还原的新产物,这些产物的毒性及对肉毒毒素的解毒活性降低。该工作为川楝素的体内药代产物鉴定及应用奠定了一定的基础。