Let-7b 慢病毒载体构建及对大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化为神经细胞的影响

目的：探讨Let‐7b过表达和Let‐7b抑制慢病毒载体在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）向神经细胞分化中的作用。方法构建Let‐7b过表达和Let‐7b抑制慢病毒载体并感染大鼠MSCs ,筛选最适感染复数（MOI）;实验分未感染组、感染组1（感染LV‐rno‐Let‐7b‐up）、感染组2（感染LV‐rno‐Let‐7b‐inhibition）、阴性对照组（感染空病毒）;采用法舒地尔诱导感染后大鼠M SCs分化为神经元细胞。倒置荧光显微镜下观察M SCs感染后荧光表达情况;采用免疫细胞化学染色检测神经元烯醇化酶（NSE）、神经微管结合蛋白（MAP‐2）的表达变化;PT‐PCR检测MAP‐2 mRNA的表达变化;MTT 法检测细胞存活率。结果倒置显微镜下观察大鼠LV‐rno‐Let‐7b‐up和LV‐rno‐Let‐7b‐inhibition慢病毒载体感染成功,MOI值为10,感染3 d时大鼠LV‐rno‐Let‐7b‐up慢病毒感染率最高,细胞存活率较高,感染率可达（92.1±4.3）％;MOI为20,感染5 d时大鼠LV‐rno‐Let‐7b‐inhibition慢病毒感染率最高,细胞存活率较高,感染率可达（90.3±4.2）％。法舒地尔可以诱导MSCs向神经细胞分化,感染组1诱导MSCs为神经细胞显著高于阴性对照组和感染组2,NSE、MAP‐2表达率明显高于阴性对照组和感染组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论结论 LV‐rno‐Let‐7b‐up可更高效感染大鼠 MSCs ,感染LV‐rno‐Let‐7b‐up后大鼠MSCs经法舒地尔诱导向神经细胞分化比率增加。     

大面积脑梗死患者血清 let-7f 表达的初步研究

目的：本研究拟初步探讨let‐7f与大面积脑梗死的诊断及发展的相关性。方法采用前瞻性队列研究方法,收集神经重症IC U的缺血性脑卒中患者血标本（128例）,并收集年龄、性别匹配的正常人群、脑出血患者作为对照。将血清标本进行miRNA提取、反转录及实时荧光定量PCR ,以检测血清中let‐7f的相对表达量。结果血清let‐7f在大面积前循环脑梗死患者中表达较正常人群显著下调（ P＜0.05）;在后循环脑梗死患者中的表达水平较正常人群无显著性差异。血清let‐7f在大面积脑梗死合并出血转化患者中表达较正常人群显著上调（ P＜0.05）,但较脑出血患者无显著性差异。血清let‐7f在脑出血患者中的表达水平较正常人群显著上调（ P＜0.05）。血清let‐7f在非大面积脑梗死患者中的表达水平较正常人群显著上调（P＜0.05）,但低于脑出血患者。血清let‐7f表达水平与肺部感染无显著性差异（P＞0.05）。血清let‐7f与脑出血或脑梗死合并出血呈高度正相关性,其次与梗死面积呈负相关。结论血清let‐7f表达水平对于大面积前循环脑梗死的诊断及发展具有一定的相关性。     

唤醒麻醉联合三维重建影像辅助下PMC治疗原发性三叉神经痛的疗效

目的 探讨唤醒麻醉联合三维重建影像辅助下经皮三叉神经半月节微球囊压迫术（PMC）治疗原发性三叉神经痛（PTN）的效果。方法 回顾性分析2018年8月至2019年12月收治的13例PTN的临床资料。均采用唤醒麻醉联合三维重建影像辅助下PMC治疗。结果 13例术中球囊压迫的平均时间为3 min，球囊造影剂充盈量平均为0.6 ml。12例术后即刻疼痛完全消失，1例明显缓解；有效率为100%，治愈率为92.3%。术后发生口角疱疹3例（23.1%）、面部血肿1例（7.6%），术后2周内恢复正常。术后均有患侧面部轻微麻木感，未出现角膜反射减弱、角膜溃疡、咀嚼肌瘫痪情况，也未出现颅内感染、出血等严重并发症。出院后随访3~6个月，12例患侧疼痛未复发，1例明显缓解者术后2周疼痛进一步缓解；面部麻木均消失。结论 唤醒麻醉联合三维重建影像辅助下PMC治疗PTN效果良好。术中病人的主动参与，以及三维重建影像的应用，对球囊的位置和成形有重要指导意义，可以提高手术的成功率，减少术后并发症     

鞘内注射ERK1/2抑制剂对骨癌痛大鼠的镇痛作用研究

目的 研究鞘内注射细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）抑制剂（SCH772984）对骨癌痛Sprague-Dawley（SD）大鼠疼痛行为学及脊髓背角Fos蛋白表达的影响,探讨ERK-P90RSK-Fos信号通路在骨癌痛中的作用。方法 取鞘内置管后5天的雌性SD大鼠40只,随机分成5组（n=8）,包括Sham假手术组和BNP模型组（分别为对照组,SCH772984给药组SCH 0.1组,SCH 1组,SCH 10组）。在造模后第9天,Sham组不给药,BNP模型组鞘内分别给5% DMSO 10μl、SCH772984抑制剂 0.1、1.0、10μg（SCH772984抑制剂溶于10μl 5%的DMSO中）。测定造模前1天、造模后3、6、9、12、15、18天以及给药后1、3、6、9、12、18、24h的机械缩足阈值（MWT）、热缩足潜伏期（PWL）以及2min自发缩足次数。取鞘内置管后5天的SD大鼠40只,随机分为5组（n=8）,其中B1、B2、B3组在造模后第9天,鞘内注射SCH772984抑制剂10μg后分别于1、9、24h取材,M组为模型对照组,鞘内注射5% DMSO后9h取材,S组为空白对照组。通过免疫印迹（Western blot）法及免疫荧光测定脊髓背角p-ERK、p-p90RSK以及Fos蛋白表达情况。结果 鞘内注射ERK1/2抑制剂（SCH772984）对骨癌痛大鼠有镇痛作用,并且该效应随着剂量的增加而增大;鞘内注射ERK1/2抑制剂（SCH772984）10μg可明显减少脊髓背角Fos蛋白的表达。结论 ERK-p90RSK-Fos通路可能影响骨癌痛。     

血浆 let-7c在烟雾病中的表达变化及意义

目的：探讨烟雾病（MMD）患者血清let‐7c的表达变化及意义。方法实验组选择MMD患者29例,对照组选择正常健康人群29例,脑出血15例,大面积脑梗死20例,非大面积脑梗死18例,神经免疫性疾病31例。应用实时荧光定量PCR检测各组血清let‐7c表达水平。结果实时荧光定量PCR表明,MMD患者血清let‐7c的表达水平较对照组、非大面积脑梗死、大面积脑梗死、脑出血、神经免疫性疾病患者增高,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论烟雾病患者中血清let‐7c表达上调,为其诊断提供潜在的新生物学标记物。     

Let-7d慢病毒载体体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经细胞

背景：微小RNA在生命体生长、衰老的过程中起着重要的作用,了解微小RNA let-7d家族成员对骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的影响可以对干细胞移植起促进作用。
　　目的：探讨let-7d慢病毒载体在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化中的作用。
　　方法：①构建大鼠慢病毒载体并感染大鼠骨髓间充质干细胞;实验分为未转染组、阴性对照组(感染空白慢病毒)、转染上调组(感染let-7d-LV)、转染下调组(感染let-7d-inhibition-LV)。②采用法舒地尔诱导转染后大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经细胞,以免疫细胞化学染色检测NSE、MAP-2的表达变化;RT-PCR检测MAP-2 mRNA的表达变化;MTT法检测细胞存活率。
　　结果与结论：倒置荧光显微镜下观察 let-7d 慢病毒载体转染成功。法舒地尔可以诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化,其中转染上调组的诱导效率与阴性对照组相比升高,NSE、MAP-2表达率上升(P<0.05);转染下调组的诱导效率与阴性对照组相比下降,NSE、MAP-2表达率下降(P <0.05)。结果表明let-7d慢病毒载体可以促进骨髓间充质干细胞向神经细胞的分化,通过控制 let-7d 的表达可以影响骨髓间充质干细胞向神经细胞的分化效率。     

lncRNA HOXA11-AS对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:探究长链非编码RNA(long-nocoding RNA,lncRNA) HOXA11-AS在骨肉瘤中的表达及其对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制.方法:采用2012年1月至2015年12月浙江省人民医院骨外科13例骨肉瘤组织及癌旁正常组织,以及骨肉瘤细胞系MG63、U20S和人成骨细胞株hFOB1.19,用实时荧光定量PCR检测骨肉瘤组织和骨肉瘤细胞系MG63和U20S中lncRNA HOXA11-AS的表达水平.用慢病毒载体构建稳定过表达lncRNA HOXA11-AS的骨肉瘤MG63及U20S细胞,用CCK-8和克隆形成实验、Transwell小室法分别检测过表达lncRNA HOXA11-AS对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响.建立过表达lncRNA HOXA11-AS MG63骨肉瘤细胞裸鼠移植瘤模型,以空载体慢病毒Lv-NC转染的细胞作为对照,观察过表达lncRNA HOXA11-AS对裸鼠移植瘤生长的影响.结果:lncRNA在骨肉瘤组织和MG63及U20S细胞中表达水平显著下调(P＜0.01).与hFOB1.19细胞比,过表达lncRNA HOXA11-AS细胞后,(1)显著抑制骨肉瘤MG63及U20S细胞的增殖[(4.03 ±0.98) vs(6.96 ±0.54),(4.68±0.77) vs (8.87±1.23),均P＜0.01]、迁移细胞数[(83.00 ±6.03) vs(168±12.54),(96.00 ±8.77)vs(184.00±14.63)个,均P＜0.01]和侵袭细胞数[(35.00±3.48) vs (97.00±8.32),(38.00±1.73) vs (87.00±6.37)个,均P＜0.01];(2)显著抑制骨肉瘤裸鼠皮下移植瘤的生长(P＜0.01).结论:lncRNA HOXA11-AS在骨肉瘤细胞中低表达,且lncRNA HOXA11-AS过表达对骨肉瘤的发生发展具有抑制作用,可以作为骨肉瘤治疗潜在的分子靶点.