大分子BAC基因打靶载体转染鸡胚原始生殖细胞

背景：利用原始生殖细胞技术可以方便地将各种外源基因转入鸡体内,以较快的速度获得转基因鸡,但到目前为止原始生殖细胞的转染效率仍然很低,且很难进行较大基因片段的转染。 目的：拟实现大分子BAC载体对鸡胚原始生殖细胞的转染。 设计、时间及地点：基因水平的细胞学体外观察,于2006-08/2008-07在广东省佛山大学完成。 材料：种蛋来自华南农业大学鸡场粤黄鸡群,受精蛋在37.5 ℃、相对湿度为65%的条件下孵化68~72 h。BAC-TDN-GID载体由佛山大学分子生物学实验室保存。 方法：以rRNA基因及其间隔序列作为同源重组引导序列,构建含GFP基因和hIFN基因的大分子BAC基因打靶载体,将鉴定为阳性的载体进行扩增培养并大量抽提。取课题组孵化至第19期的粤黄鸡胚,挑取其生殖嵴或性腺,胰酶消化法获得原始生殖细胞,并辅以饲养层和生长因子进行培养。采用脂质体介导法在原始生殖细胞内进行基因转移,对存活的细胞进行目的基因DNA水平和RNA水平鉴定。 结果：第19期鸡胚性腺原始生殖细胞体外培养48 h呈桑椹状或者椭圆状,72 h形成细胞集落,过碘酸染色呈紫红色。分子量达30 kb的大分子转基因载体BAC-TDN-GID转染鸡胚原始生殖细胞48 h可见荧光细胞,表明转染成功。经PCR和RT-PCR鉴定,证实扩增的产物大小与预期结果大致相吻合,目的基因hIFN已经整合进入原始生殖细胞基因组,并已开始表达。 结论：实验成功将大分子BAC载体上的外源基因转染入体外分离培养的鸡胚原始生殖细胞。     

紫外分光光度法测定土霉素片含量

本文采用紫外分光光度法于２６８ｎｍ波长处测定土霉素片的含量，在浓度１０－３０μｇ浓度范围内符合Ｂｅｅｒ定律。本法操作简便，稳定性好；平均回收率９９．８５％（ｎ＝４）ｃｖ＝０．９３％。     

宫颈上皮内瘤变的治疗方法探讨

目的 通过观察宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasias,CIN)的病理学分级及转化,探讨官颈环形锥切术(loop electrosurgical excision procedure,LEEP)对宫颈上皮内瘤变的治疗效果.方法 对2006年1月至2009年7月在本院妇女保健...     

5-氟脲嘧啶联合阿昔洛韦乳膏治疗尖锐湿疣26例

尖锐湿疣是由人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）引起的,ＨＰＶ是一种细胞核内ＤＮＡ复制病毒。本病好发于青年,主要由性接触传播。近年来国内外尖锐湿疣的发病率明显上升,且ＨＰＶ感染与宫颈癌的关系越来越受重视。目前治疗方法较多,但都容易复发。选用５－氟脲嘧啶（５－Ｆｕ）加阿昔洛韦乳膏外涂治疗尖锐湿疣２６例,取得了较好的效果,总结如下。１临床资料１．１病例选择临床确诊为尖锐湿疣２６例,年龄１８～３５岁;其中未婚１８例,已婚８例,均为非孕期;病程为７天至２月;其中２３例肉眼即可确诊,３例经组织病理检查确诊;全部病例疣体…     

益气升陷疏肝汤加减治疗胃下垂21例报道

目的：观察自拟益气升陷疏肝汤治疗胃下垂的疗效。方法：采用益气升陷疏肝汤。随证加减治疗胃下垂21例。结果：治愈16例，占76．2％；好转3例，占14．3％；无效2例，占9．5％。结论：益气升陷疏肝汤加减治疗胃下垂疗效较好，值得进一步研究。     

医源性子宫内膜异位症50例分析

子宫内膜异位症是一种发病率日益升高的常见病，已引起众多学者的重视，近年大量文献报道本病与医源性播散有关。现将我院10a来收治的医源性子宫内膜异位症50例进行分析讨论，以达到提高对本病的认识，降低误诊率，预防因手术引起子宫内膜异位症的发生之目的。     

大分子BAC基因打靶载体转染鸡胚原始生殖细胞

背景:利用原始生殖细胞技术可以方便地将各种外源基因转入鸡体内,以较快的速度获得转基因鸡,但到目前为止原始生殖细胞的转染效率仍然很低,且很难进行较大基因片段的转染.目的:拟实现大分子BAC载体埘鸡胚原始生殖细胞的转染.设计、时间及地点:基因水平的细胞学体外观察,于2006-08/2008-07在广东省佛山大学完成.材料:种蛋来自华南农业大学鸡场粤黄鸡群,受精蛋在37.5℃、相对湿度为65%的条件卜孵化68～72 h.BAC-TDN-GID 载体由佛山大学分子生物学实验室保存.方法:以rRNA基因及其间隔序列作为同源重组引导序列,构建含GFP基因和hlFN基因的大分子BAC基因打靶载体,将鉴定为阳性的载体进行扩增培养并大昔抽提.取课题组孵化至第19期的粤黄鸡胚,挑取其生殖嵴或性腺,胰酶消化法获得原始生殖细胞,并辅以饲养层和生长因子进行培养.采用脂质体介导法在原始生殖细胞内进行基因转移,对存活的细胞进行目的基因DNA水平和RNA水平鉴定. 结果:第19期鸡胚件腺原始生殖细胞体外培养48 h呈桑椹状或者椭圆状,72 h形成细胞集落,过碘酸染色呈紫红色.分子量达30 kb的大分子转基冈载体BAC-TDN-GID转染鸡胚原始生殖细胞48 h可见荧光细胞,表明转染成功.经PCR和RT-PCR鉴定,证实扩增的产物大小与预期结果大致相吻合,目的基囚hlFN已经整合进入原始生殖细胞基因组,并已开始表达.结论:实验成功将大分子BAC载体上的外源基因转染入体外分离培养的鸡胚原始生殖细胞.     

卡前列甲酯联合缩宫素预防妊娠高血压疾病剖宫产术后出血的临床研究

目的:观察卡前列甲酯(卡孕栓)联合缩宫素对妊娠高血压疾病(妊高征)剖宫产术中、术后出血的预防效果.方法:选择住院剖宫产分娩妊高征患者200例,随机分为缩宫素组100例.卡孕栓+缩宫素组100例,观察两组给药后术中、术后2 h出血量的差异及血压的变化.结果:术中、术后2 h出血量、产后出血的发生率,卡孕栓组明显少于对照组(P<0.05).卡孕栓组用药后血压无明显升高,两组差异无显著性(P>0.05).结论:卡孕栓+缩宫素预防妊高征剖宫产术中、术后出血,安全、方便,且疗效显著.     

妊娠期外阴阴道假丝酵母菌病的临床研究及护理干预

目的：了解滕州市孕妇外阴阴道假丝酵母菌病的感染情况,探求安全短效的理想治疗方案。方法：选择2006年10月～2008年10月在我院建母子保健卡的孕妇患外阴阴道假丝酵母菌病236人,通过三种方法进行治疗,其中A组采用制霉素阴道栓,B组碘伏棉球擦洗加制霉素阴道栓,C组碘伏棉球擦洗加制霉素阴道栓加护理干预。在治疗后7天、14天及1月、住院分娩前观察临床疗效及微生物学指标。结果：用药7天时,A、B、C三组总有效率比较,差异有统计学意义（P〈0．01）;第14天时三组间差异无统计学意义（P〉0．05）。1个月、住院分娩前复查微生物学指标,各组之间差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：在首诊时采用碘伏棉球擦洗外阴阴道,能迅速缓解外阴阴道假丝酵母菌病的症状,促进制霉素阴道栓药物起效。而护理干预在使其正确治疗、缩短疗程方面起到很大作用。     

紫外分光光度法测定土霉素片含量

本文采用紫外分光光度法于268nm波长处测定土霉素片的含量,在浓度10—30μg浓度范围内符合Beer定律。本法操作简便,稳定性好;平均回收率99.85％(n=4)cv=0。93％。