人PD-L2基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的 克隆人PD-L2基因并构建PD-L2胞外区的原核表达载体，在大肠杆菌中进行表达。方法 以RT-PCR方法从活化的人外周血单个核细胞总RNA中克隆PD-L2基因的cDNA，构建PD-L2胞外区的原核表达载体，在大肠杆菌BL21(ED3)中进行表达并鉴定。结果 克隆到PD-L2基因cDNA编码区全长序列，经DNA测序证明其与已报道的序列一致。进而构建了PD-L2胞外区的原核表达载体，并在大肠杆菌表达，免疫印迹分析表明在IPTG诱导后表达PD-L2胞外区蛋白，相对分子质量Mr为22000，与理论值大小相符。结论 成功克隆PD-L2基因，其胞外区蛋白在大肠杆菌中获得表达，为进一步研究PD-L2功能提供了条件。     

HLA-A*0201与EGFP融合蛋白表达载体的构建及其在K562细胞的表达和定位

目的:构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与HLA-A^*0201(A^*0201)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体,分析其在K562细胞中的表达和亚细胞定位。方法:以RT-PCR方法克隆A^*0201cDNA,构建A^*0201-EGFP融合蛋白表达载体,转染K562细胞,以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果:从两个HLA-A2阳性供者外周血细胞中克隆到A^*0201cDNA编码区全长序列。通过PCR方法在起始位点前加入Kozak序列并删除终止密码,成功构建A^*0201-EGFP融合蛋白表达载体。以该质粒转染K562细胞,5h后A^*0201和EGFP的表达百分率分别为25.12±2.26、27.37±3.59,24h后表达水平无明显提高。表达的融合蛋白主要分布于细胞膜上,胞内分布较少。相反,转染空载体的细胞不表达A^*0201分子,仅表达EGFP,且其在细胞内呈弥散样分布。结论:成功构建A^*0201-EGFP融合蛋白表达载体,并在K562细胞中得到表达,表达产物主要分布于细胞膜表面,提示表达该融合蛋白的K562细胞是潜在的人工抗原提呈细胞。     

喘可治注射液抑制小鼠变应性接触性皮炎的实验研究

目的：探讨中药喘可治注射液抑制小鼠变应性接触性皮炎（Ⅳ型变态反应）的效果。 方法： 将小鼠按给药不同分为喘可治注射液高、中，低剂量组，地塞米松(DEX)组，苯海拉明及生理盐水组，利用2，4-二硝基氟苯诱发的小鼠左耳变应性接触性皮炎的动物模型，各组于第0 d、1 d致敏前2 h，第2 d和第5 d诱发前2 h及诱发后6 h腹腔注射给药，通过测量左耳厚度差、左耳重量差，体重差及观察左耳病理改变，比较不同剂量喘可治注射液之间以及与对照组之间的疗效。 结果： 喘可治注射液高、中、低剂量和DEX组小鼠左耳厚度及重量的增加，浸润的单核细胞和中性粒细胞的数量均明显低于生理盐水组(P<0.01)；DEX组小鼠左耳红肿的程度虽稍低于喘可治组，但小鼠体重差与其它组比较均有显著差异（P<0.01）；苯海拉明组小鼠变应性接触性皮炎的程度与生理盐水组差异无显著。 结论： 喘可治注射液具有明显抑制小鼠变应性接触性皮炎的作用。     

PD-L2剪切异构体与EGFP融合蛋白的表达及其亚细胞定位研究

目的　探讨PD L2的剪切异构体在哺乳动物细胞的表达和亚细胞定位。方法　以RT PCR方法克隆人PD L2基因的常规剪切体和新型剪切异构体的cDNA ,构建其与EGFP融合的表达载体 ,分别转染K5 6 2细胞进行表达 ,经抗PD L2抗体染色后以流式细胞仪和激光共聚焦显微镜分析融合蛋白的表达及其亚细胞定位。结果　从活化的人白细胞中克隆到常规剪切体PD L2Ⅰ和新型剪切异构体PD L2Ⅱ的cDNA ,后者删除了编码胞外区Ig C结构域的外显子 3。进而构建了PD L2Ⅰ EGFP和PD L2Ⅱ EGFP融合蛋白表达载体 ,分别转染K5 6 2细胞。流式细胞仪分析显示 ,转染前者的细胞中既可检测到EGFP的表达又可在细胞膜上检测到PD L2表达 ;而转染后者的细胞中只能检测到EGFP的表达 ,在其细胞膜上不能检测到PD L2表达。共聚焦显微镜观察显示 ,PD L2Ⅰ EGFP主要分布于细胞膜表面 ,PD L2Ⅱ EGFP则主要分布于细胞内。结论　常规剪切体PD L2Ⅰ能正确定位于细胞膜表面 ,而新型剪切异构体PD L2Ⅱ则位于细胞内 ,不能运输至细胞膜 ,提示不同PD L2剪切异构体可能与其功能的调变有关     

Th1／Th2细胞在炎症浸润中的不同表现

Th细胞向外周组织的浸润是局部炎症部位极化免疫的首要条件。Th细胞向外浸润过程中表达了不同的受体以适应不同的需要，Th1细胞优先表达P－和E－选择素配体、CHCR3、CCR5、粘合素α6β1等分子；Th2细胞则优先表达CCR3、CCR4、CCR8等分子，导致它们在炎症浸润过程中具有不同的外渗潜力，产生不同的局部炎症反应，而且它们之间也可通过负性调节来互相抑制对方。     

IDO-EGFP表达载体的构建及其在人软骨细胞中的表达

目的 克隆人吲哚胺双加氧酶(IDO)基因并构建IDO与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白哺乳动物细胞表达载体。方法 利用RT-PCR方法从人白细胞克隆IDO基因并构建IDO-EGFP融合蛋白表达载体。通过细胞核转染仪将表达载体转人人软骨细胞进行瞬时表达，以共聚焦显微镜对表达的绿色荧光进行分析。结果 从活化的人白细胞中克隆到IDO基因编码区全长，并构建了IDO-EFFP融合蛋白表达载体。以该表达载体转染原代人软骨细胞，表达的融合蛋白较均匀地分布于整个细胞。结论 成功构建了IDO-EGFP哺乳动物细胞表达载体，为进一步研究IDO奠定了基础。     

012 Th1／Th2细胞在炎症浸润中的不同表现

Th细胞向外周组织的浸润是局部炎症部位极化免疫的首要条件。Th细胞向外浸润过程中表达了不同的受体以适应不同的需要，Th1细胞优先表达P-和E-选择素配体、CXCR3、CCR5、粘合素α6β1等分子；Th2细胞则优先表达CCR3、CCR4、CCR8等分子，导致它们在炎症浸润过程中具有不同的外渗潜力，产生不同的局部炎症反应，而且它们之间也可通过负性调节来互相抑制对方。     

伊曲康唑治疗念珠菌性龟头炎疗效分析

目的：探讨伊曲康唑治疗念珠菌性龟头炎的临床疗效。方法：应用伊曲康唑每日２００ ｍｇ ，口服７ 日的短疗程疗法治疗念珠菌性龟头炎。结果：１ 周治愈率为９５－８２ ％ ，４ 周治愈率为９７－０１ ％ 。不良反应发生率为４－７６ ％ ，主要表现为胃肠道反应，一般在治疗过程中会自行消失而不影响治疗。提示：该疗法具有疗程短、见效快、复发率低、不良反应轻、耐受性好等优点，值得在临床推广应用。     

Th1/Th2细胞在炎症浸润中的不同表现

Th细胞向外周组织的浸润是局部炎症部位极化免疫的首要条件。Th细胞向外浸润过程中表达了不同的受体以适应不同的需要 ,Th1细胞优先表达P 和E 选择素配体、CXCR3、CCR5、粘合素α6 β1等分子 ;Th2细胞则优先表达CCR3、CCR4、CCR8等分子 ,导致它们在炎症浸润过程中具有不同的外渗潜力 ,产生不同的局部炎症反应 ,而且它们之间也可通过负性调节来互相抑制对方。     

氧化苦参碱抑制二硝基氟苯所致小鼠接触性皮炎及淋巴细胞增殖

目的：探讨氧化苦参碱(OMT)对二硝基氟苯(DNFB)所致小鼠变应性接触性皮炎(ACD)的抑制作用及小鼠淋巴细胞增殖的影响。 方法： ①建立DNFB所致小鼠ACD模型，以不同剂量的OMT、PBS、氢化可的松(HCT)进行腹腔注射，检测小鼠耳廓肿胀度变化。②利用羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色，流式细胞术检测OMT对小鼠淋巴细胞增殖的影响。 结果： ①OMT对DNFB所致小鼠ACD呈剂量依赖性抑制作用,且与同等剂量HCT作用效果相似,但副作用明显减小。②体外实验证明，在500、125和31 mg/L组，OMT对小鼠淋巴细胞增殖呈剂量依赖性抑制。 结论: OMT对DNFB所致小鼠ACD有显著的抑制作用，而且抑制小鼠淋巴细胞增殖；OMT是一种免疫抑制剂。