建立和评价ELISA法检测血清和唾液中旋毛虫IgG抗体的研究

目的 建立检测血清和唾液中旋毛虫抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法.方法 应用方阵滴定法,筛选适宜的旋毛虫抗原(肌肉幼虫可溶性抗原、肌肉幼虫排泄分泌抗原、成虫可溶性抗原、成虫排泄分泌抗原)浓度、血清和唾液稀释度、辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔、山羊抗人IgG抗体稀释度.共有20份旋毛虫感染兔、10份旋毛虫病患者血清和唾液用于这4种抗原的敏感性试验,20份健康兔与38份其他寄生虫感染兔和患者的血清和唾液用于这4种抗原的特异性试验.结果 这4种抗原适宜包被浓度依次为8.0 μg/ml、6.0 μg/ml、10.0 μg/ml、9.0 μg/ml.适宜的血清稀释度依次为1:100、1:200、1:50、1:200,唾液均用原液.适宜的山羊抗兔、山羊抗人IgG稀释度分别为1:2 500和l:2 000.这4种抗原检测旋毛虫感染兔血清和唾液的敏感性分别为100%和80%~100%,检测旋毛虫病患者血清和唾液的敏感性分别为100%和60%~80%;检测血清和唾液的特异性依次为81.03%、89.65%、77.59%、82.76%和93.10%、96.55%、89.65%、91.35%.结论 建立了检测兔和人血清及唾液中旋毛虫lgG抗体的ELISA方法.当采集血清标本有困难时,可将唾液替代血清用于检测旋毛虫病.     

旋毛虫成虫三种抗原SDS-PAGE及Western-blot比较研究

目的研究大理猪源旋毛虫(Trichinella spiralis)成虫虫体可溶性抗原、表面抗原和排泄分泌抗原3种抗原的蛋白组分及其之间的差异,比较分析其免疫反应性。方法以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和蛋白印迹对成虫3种抗原进行蛋白组分及其免疫反应性分析。结果十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果:虫体可溶性抗原显示29条蛋白带,分子量范围在112kDa~10kDa之间,其中主带13条;表面抗原显示4条主要蛋白带,分子量分别为50、48、40、34kDa;排泄分泌抗原显示17条蛋白带,分子量范围在120~14kDa之间,其中主带6条,分子量分别为120、64、43、40、35、33kDa。蛋白印迹结果:虫体可溶性抗原出现13条反应条带,其中分子量为81、40、37、33、30kDa的条带着色明显;表面抗原出现4条反应条带,其分子量分别为50、48、40、34kDa;排泄分泌抗原显示7条反应带,其中43、40、27、18kDa着色明显。结论旋毛虫成虫虫体可溶性抗原与排泄分泌抗原较表面抗原蛋白组分复杂,3者主带部分属低分子量区;免疫反应性的强度表面抗原和排泄分泌抗原高于虫体可溶性抗原,说明前两种抗原是旋毛虫成虫刺激机体产生免疫应答的主要靶抗原。     

旋毛虫成虫排泄分泌抗原检测唾液中抗旋毛虫IgG抗体的研究

目的 评价旋毛虫(Trichinella spiralis)成虫排泄分泌抗原(adult worm excretory-secretory antigen,AWESA)作为诊断抗原检测旋毛虫感染日本大耳兔唾液中抗旋毛虫IgG抗体的可行性. 方法 建立旋毛虫感染日本大耳兔和对照组兔动物模型,采集感染前和感染后1～6周兔唾液和血清以及对照组兔唾液和血清.制备AWESA,建立AWESA作为诊断抗原的间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),以市售旋毛虫IgG抗体检测试剂盒作为对照,测定感染前和感染后1～6周兔唾液和血清以及对照组兔唾液和血清中抗旋毛虫IgG抗体.AWESA和试剂盒测得的唾液A值和血清A值进行线性相关分析,AWESA和试剂盒测得的唾液阳性率和血清阳性率分别进行x2检验.结果 AWESA检测唾液和血清特异性IgG抗体阳性率依次为0、5%、20%、40%、60%、85%、90%,0、30%、60%、85%、95%、100%、100%,除感染后0、1、2周外其余各周唾液A值与血清A值呈显著线性相关(P＞0.05、P＞0.05、P＞0.05、P＜0.05、P＜0.05、P＜0.05、P＜0.05).市售旋毛虫IgG抗体检测试剂盒检测旋毛虫感染前和感染后兔唾液和血清中特异性IgG抗体阳性率依次为0、15%、20%、40%、55%、75%、90%,0、35%、60%、95%、95%、100%、100%,除0、1、3周外其余各周唾液A值与血清A值呈线性相关(P＞0.05、P＞0.05、P＜0.05、P＞0.05、P＜0.05、P＜0.05、P＜0.05). 结论 AWESA与市售试剂盒检测唾液和血清中抗旋毛虫IgG抗体的阳性率具有一致性.     

旋毛虫抗原的研究进展

旋毛虫抗原分为表面抗原、排泄-分泌抗原(ES抗原)、虫体抗原和杆细胞颗粒相关抗原,本文综述了其分类、化学组成及其功能、免疫保护性和重组抗原的研究情况.     

旋毛虫新生幼虫可溶性抗原的分析

目的 初步分析云南大理旋毛虫不同时龄新生幼虫可溶性抗原的蛋白组分及其免疫反应性.方法 以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白印迹(Western blot)对旋毛虫不同时龄新生幼虫可溶性抗原进行蛋白组分及其免疫反应性分析.结果 SDS-PAGE结果显示:24 h 旋毛虫新生幼虫可溶性抗原显示36条蛋白染色条带,相对分子质量(Mr)范围在160000～10000之间,其中主带8条,Mr分别为73000、64000、58000、54000、46000、40000、34000、25000;48h旋毛虫新生幼虫可溶性抗原显示40条蛋白染色带,Mr范围在172000～10000之间,其中主带17条,Mr分别为120000、102000、89000、87000、79000、74000、72000、64000、58000、54000、46000、40000、34000、32000、25000、18000、10000.Western blot结果:以旋毛虫感染大鼠血清检测,24h旋毛虫新生幼虫可溶性抗原出现7条反应条带,Mr分别为89000、78000、64000、58000、40000、34000、25000;48 h新生幼虫可溶性抗原出现14条反应条带,Mr分别为89000、87000、79000、74000、72000、64000、58000、40000、38000、34000、32000、25000、18000、10000.而正常大鼠血清在相应位置均无特异性反应条带出现.结论 云南大理旋毛虫24、48h新生幼虫可溶性抗原存在7个共同蛋白组分,其中48 h新生幼虫虫体可溶性抗原中存在24h新生幼虫可溶性抗原没有的5个蛋白组分,新生幼虫虫体可溶性抗原的蛋白组分随时龄的增大而增多.旋毛虫感染大鼠血清均可识别24、48h新生幼虫可溶性抗原中6个蛋白组分,说明这些蛋白组分具有较强的免疫反应性.     

旋毛虫成虫与肌幼虫表面抗原的比较分析

目的比较大理猪源旋毛虫(Trichinela spiralis)成虫与肌幼虫表面抗原(Surface antigen,SA)的蛋白组分差异,并进一步分析其免疫反应性,为分离和筛选出免疫原性和免疫反应性强的旋毛虫抗原成分提供依据。方法采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),对成虫和肌幼虫SA蛋白成分进行分析,并进一步采用蛋白印迹(Western-blot)对其免疫反应性分析比较。结果旋毛虫成虫SA显示4条主要蛋白染色条带,分子量分别为50kDa、48kDa、40kDa和34kDa,旋毛虫肌幼虫SA显示10条主要蛋白染色条带,分别为105kDa、99kDa、80kDa、63kDa、55kDa、48kDa、35kDa、28kDa、24kDa和21kDa。;Western-blot检测结果表明,旋毛虫成虫SA出现4条反应条带,其分子量分别为50kDa、48kDa、40kDa和34kDa,旋毛虫肌幼虫SA出现7条反应条带,分子量分别为105kDa、99kDa、80kDa、55kDa、48kDa、35kDa和28kDa,其中48kDa和35kDa显色明显。结论旋毛虫成虫SA与肌幼虫SA都含有分子量为48kDa的蛋白组分,且两种抗原组分均具有较强的免疫反应性。     

旋毛虫成虫抗原的免疫保护性研究进展

该文介绍了旋毛虫成虫抗原免疫保护性研究的进展.通过比较三期抗原的免疫保护性,表明旋毛虫成虫抗原具有较强的免疫保护作用,该抗原可能是研制旋毛虫病疫苗的重要候选抗原.利用DNA重组技术将保护性强的成虫抗原的基因克隆并在体外表达,将是获得旋毛虫病疫苗抗原的重要方法.