粉防己碱对缺氧和复氧损伤心室肌细胞内Ca2+超载的作用

目的 :研究粉防己碱 (Tet)对培养大鼠心室肌细胞缺氧和复氧损伤时细胞内 Ca2 超载的作用。方法 :采用荧光探针 Fura- 2 / AM结合计算机图像处理技术测定单个心室肌细胞内 Ca2 浓度。结果 :对照组心室肌细胞在缺氧和复氧过程中出现 2次细胞内 Ca2 浓度明显上升 ,维拉帕米 (Ver)处理组 (10μmol/ L )心室肌细胞出现 2次细胞内 Ca2 浓度轻度上升 ;Tet处理组 (30 0μmol/ L )心室肌细胞未出现细胞内 Ca2 浓度上升。两处理组分别与对照组比较均有极显著性差异 (P<0 .0 1) ,两处理组间比较亦有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论 :Tet对缺氧和复氧损伤心室肌细胞内 Ca2 超载有较强的阻抑作用     

诱导体外培养小鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞方法的研究

目的:采用布法罗大鼠肝细胞条件培养基代替重组LIF,建立在不加任何化学诱导剂的情况下诱导体外培养小鼠胚胎干细胞(ES细胞)分化为心肌细胞的方法。方法:在诱导分化实验前,应用BRL条件培养基来维持ES细胞生长和抑制其分化,并采取将悬滴培养法和聚集培养法结合起来,分三步诱导ES细胞分化的方法。结果:分化细胞中可见节律性收缩的细胞,经超微结构分析和免疫细胞学鉴定为心肌细胞。结论:本法无需添加化学诱导剂,为一种简便、经济的诱导体外培养小鼠ES细胞分化为心肌细胞的方法。     

坏死心肌修复的细胞和分子生物学研究进展

在细胞周期调控下,人类心肌细胞仅在胚胎期和出生后早期增生,出生后数月即停止分裂。由于心肌细胞坏死不可逆转,心肌梗死后,早期再灌注治疗虽然能挽救濒死心肌细胞,但已经死亡的心肌细胞将由瘢痕组织代替,由此造成的心力衰竭和心律失常是许多患者死亡的主要原因。近年来,随着细胞和分子生物学技术的发展,坏死心肌修复的研究取得了令人瞩目的成绩。移植外源或自体肌细胞从而代替坏死心肌细胞行使功能,转入外源基因表达重组蛋白从而刺激坏死心肌局部血管增生,这些均为坏死心肌修复开辟了新的途径。     

小鼠胚胎干细胞分化心肌细胞钠通道、钙通道电生理特性研究

目的:研究小鼠胚胎干细胞分化心肌细胞钠通道、钙通道电生理特性。方法:通过布法罗大鼠肝细胞条件培养基和小鼠胚胎成纤维细胞饲养层培养ES-D3细胞, 经过诱导分化, 收集第12d的干细胞分化心肌细胞并和培养的胚胎期小鼠心肌细胞一起做膜片钳实验, 比较两种细胞离子通道电生理特性。结果:第12d的干细胞分化心肌细胞钠通道、钙通道电流形态和通道特性与胚胎期心肌细胞类似。结论:ES细胞分化过程中出现离子通道功能表达, 干细胞分化心肌细胞与胚胎期小鼠心肌细胞钠通道、钙通道电生理特性类似。     

四氢巴马汀对家在体心脏单相动作电位和有效 …

利用单相动作电位 (MAP)技术 ,研究在整体条件下四氢巴马汀 (THP)对家犬在体心脏MAP和有效不应期(ERP)的影响 ,从而探讨THP在整体条件下的抗心律失常机制。家犬 8只 ,体重 12 .5± 3.0 ( 10～ 15 )kg。同时记录家犬右室心尖部的MAP和体表Ⅱ导联心电图 (ECG) ,比较在窦性心律下用药前和用药后 10 ,2 0 ,30min的ERP、MAP复极 5 0 %时程 (MAPD5 0 )和复极 90 %时程 (MAPD90 )以及MAP振幅 (MAPA)的变化。结果 :用药后 10min ,各参数均无明显变化 (P >0 .0 5 ) ;用药 2 0min后 ,ERP、MAPD5 0 和MAPD90 与用药前相比 ,均明显延长 (分别为 139± 18msvs 12 4±18ms,12 6± 16msvs112± 15ms ,16 4± 2 5msvs 140± 16ms,P均 <0 .0 1) ,但用药前后ERP MAPD90 的比值无显著性变化 (P >0 .0 5 )。结论 :THP通过延长动作电位 2相和 3相时程 ,使ERP和MAPD90 平行延长 ,但不改变用药前后ERP MAPD90 比值 ,从而具有增加心肌电稳定性的作用 ,推测此是其具有抗室性心律失常的作用的可能机制     

经腹腔转染iNOS基因对大鼠的降血压作用

目的:研究经腹腔转染人iNOScDNA进入正常大鼠体内对大鼠血压的影响及转染的iNOS基因在其体内表达的情况。方法:经腹腔基因转染。结果:①经腹腔转染iNOS基因大鼠的血压从转染后第2d起明显较注射前降低,至第6d降低仍有显著差异(P＜0.01);②转染iNOS基因大鼠在转染后第3d、第6d腹腔巨噬细胞的NO水平明显高于对照组(P＜0.01)。结论:经腹腔转染iNOS能明显降低大鼠血压。     

颅痛定对单个豚鼠心室肌细胞缺氧后复氧早期L-Ca电流的影响

目的 :研究颅痛定 (左旋四氢巴马汀 ,L - tetrahy- dropalm atine,L - THP)对缺氧后复氧早期心室肌细胞 L - Ca电流的影响。方法 :使用全细胞膜片钳技术研究心室肌细胞 L - Ca电流的变化。结果 :经 2 0 m in的缺氧以及 5 min的复氧后 ,1,10 ,10 0 (μmol· L- 1 ) L - THP分别将 Ca- max电流从 (6 75 .75± 10 7.0 7) p A减少至 (6 45 .46±10 8.75 ) p A、(4 92 .0 8± 72 .84) p A、(376 .6 0± 71.35 ) p A ,P值分别为 >0 .0 5、<0 .0 5、<0 .0 1。结论 :L - THP能有效地减少缺氧后复氧早期心室肌细胞 L - Ca电流 ,这种作用无疑是其抗再灌注早期心律失常的电生理基础。     

应用实时荧光定量PCR测定AdEasy系统中重组腺病毒滴度

目的:确立一种高效、简便的荧光实时定量PCR方法,对AdEasy系统中的重组腺病毒滴度进行测定.方法:采用Stratagene公司的AdEasyTM载体系统在293细胞中构建重组腺病毒,经10倍梯度稀释的病毒母液用以提取基因组DNA及空斑测定.以10倍梯度稀释的pAdEasy质粒作为标准模板进行实时PCR反应扩增六邻体基因片段,并绘制标准曲线.然后以上述的重组腺病毒DNA为模板,采用同样体系进行实时PCR反应,同时用琼脂糖空斑法测定病毒母液的滴度.结果:成功构建了重组腺病毒并对其进行了空斑测定.运用标准模板进行的PCR反应显示该方法的线性范围为101～108拷贝.病毒母液的DNA拷贝浓度(vg/ml)值,约为空斑滴度(pfu/ml)值的10倍.结论:荧光实时定量PCR方法可在较大的线性范围内检测重组腺病毒滴度,较之空斑法更为准确地反映了重组腺病毒的实际数量.     

Effects of L-THP on Ca2+ Overload of Cultured Rat Cardiomyocytes during Hypoxia and Reoxygenation

Ca2 overloadisoneoftheimportantpathophys-iologicalcharactersofcardiomyocyteinjuryfOllowinghypoxia--reoxygenation.TrlggeredactivitycausedbyCa2 overloadisthemaincauseofreperfusion--arryth-mias[l].L--tetrahydropalmatine(L--THP),alsonamedrotundium,isabiologica1alkaliofcorydalisYanhusuo,aherbalCa' antagonistwhichhasbeenwidelyusedintreatingarrythmias['].Herewedevel-opedacellmodelofhypoxiaandreoxygenationwithculturedratcardiomyocytes,whichwassimilartothemodelofischemia--reperfusioninjuryoftheheart…