HIV核心抗原p24原核系统的高效表达、纯化及活性鉴定

目的　在原核表达系统中对HIVp2 4抗原基因进行克隆和高效表达、纯化并鉴定其活性。方法　利用PCR技术从HIV-1全基因质粒 (B2N)中扩增p2 4抗原基因 ,并克隆入T载体中。通过酶切消化后连接到表达载体pRSET上 ,用此连接产物转化大肠埃希菌BL2 1,经IPTG诱导 ,表达p2 4抗原。利用固定化金属离子 (Ni2 )配体亲和层析技术从表达蛋白中纯化目的蛋白。并运用双酶切技术、SDS-PAGE电泳、WesternBlot(WB)及ELISA法分别对插入基因片段的正确性、表达产物的活性及特异性进行检测。结果　PCR产物约为 6 90bp ,与预期p2 4抗原全基因片段大小一致。重组质粒T-p2 4和pRSET-p2 4经BamHⅠ和HindⅢ双酶切 ,其插入的外源基因片段均为 6 90bp。将纯化前与纯化后的蛋白作SDS PAGE电泳 ,均可见一条约 2 4× 10 3的外源基因表达带 ,与计算的相对分子质量相符。经WB和ELISA试验 ,证明基因工程表达的p2 4抗原具有较高的特异性及活性。结论　成功构建了HIVp2 4表达载体pRSET-p2 4 ,并在原核细胞中高效表达 ,其表达产物具有良好的特异性及活性     

两种方法检测乙肝HBsAg效果对比

目的 :考察胶体金联免疫吸附与酶联免疫吸附试验的灵敏度与特异性。方法 :用乙肝表面抗原胶体金联免疫吸附试剂 (GCISA)和酶联免疫试剂 (ELISA)检测各种肝炎病人血清 90 9份 ,正常人血清 173份及乙肝表面抗原质控标准品。结果 :GCISA和ELISA分别检出 773和 770份阳性样品 ,总符合率为97 0 %。检测乙肝表面抗原质控标准品 ,GCISA的灵敏度为 1ng/ml,ELISA为 1～ 2ng/ml,且两种方法都只与HBsAg有特异反应 ,与乙肝病毒核心抗原、e抗原无交叉反应。结论 :GCISA检测血清中的HBsAg特异性强 ,灵敏度与ELISA一致 ,在检测单份样品时较ELISA简单快速 ,观察结果直观 ,不需仪器设备。     

HIV疫苗的研制进展

HIV属逆转录病毒科慢病毒属,该属病毒因其保护性机制尚未明确、病毒基因整合人宿主细胞、基因变异率高、病毒常通过黏膜传播及病毒可直接侵犯免疫系统等特点,使得疫苗的研制难度大大增加。有关艾滋病疫苗效果的评价有3项指标:①能产生不同血清型的中和抗体;②CTL能特异地破坏感染细胞;③免疫过的黑猩猩对试验性感染有抵抗力。目前研制HIV疫苗的方法主要为以下6种。     

抗丙型肝炎病毒(HCV)总抗体的研究

对HCV感染的检测,目前国内外普遍采用间接ELISA法,以HCV合成多肽和基因表达抗原包被酶标板,用HRP标记抗人-IgG为第二抗体,检测患者血清中抗HCV-IgG(本文以下简称IgG间接法)。但急性病毒感染,血清中往往首选出现IgM抗体,而IgG抗体出现较晚,IgG间接法会对早期感染漏检。近年来,国内外学者通过用抗人-IgG吸附等     

一例输血后丙型肝炎HIV感染者个案调查

一例输血后丙型肝炎ＨＩＶ感染者个案调查解放军３０２医院病毒研究室（北京１０００３９）貌盼勇，何红霞，洪世雯，冯传前，胡燕为了解输血后肝炎病人中人类免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）感染情况，我们对３０２医院的４７例输血后丙型肝炎患者做了ＨＩＶ抗体检测，现将结果报...     

用低温电子显微技术测定乙型肝炎病毒核心蛋白结构

两院院士投票评选的“′97世界十大科技进展”之一为“英国科学家发现乙肝病毒结构”,并指出这一成果为从分子角度研究乙肝病毒的致病机理,从而为研制乙肝疫苗和药物奠定了基础。英国“自然”杂志1997年386卷同时发表了英国医学研究委员会分子生物学实验室B.Bottcher等“用低温电子显微术测定乙型肝炎病毒核心蛋白折叠”和美国国立卫生研究院结构生物学实验室J.F.Conway等“用低温电子显微术显示乙肝病毒衣壳中的4-螺旋束”两篇研     

恒河猴实验感染庚型肝炎病毒的实验研究

目的研究庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）在恒河猴中的实验感染状态。方法用一名ＨＧＶＲＮＡ阳性、ＨＢＶ、ＨＣＶ均阴性的健康献血员血浆实验感染２只恒河猴，并取第一代猴感染后６周的血再感染１只第二代恒河猴，然后用以第二代猴感染６周后血继续感染２只第三代恒河猴。分别用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）检测受感染猴血清中的ＨＧＶＲＮＡ，并每周抽血测定血清中丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）。结果感染１周后猴血清ＨＧＶＲＮＡ阳转，最长持续阳性２８周以上。不同感染个体血清ＡＬＴ水平有明显差异，其中１号猴有短期轻度升高，５号猴血清ＡＬＴ较长时间在１００Ｕ／Ｌ以上。肝活检发现，感染后１６周猴肝组织出现明显的病毒性肝炎样病理改变。进一步对该献血员血浆和感染后猴血清中的ＨＧＶ５’端部分非编码区基因ＰＣＲ产物进行测序，结果显示感染用献血员血浆和猴血清中ＨＧＶ序列与国外株ＨＧＵ４４４０２的同源性分别为９８３３％和９５８３％；与ＨＧＵ３６３８０株的同源性分别为９２５０％和８９１７％；感染猴血清中ＨＧＶ序列与献血员ＨＧＶ序列同源性为９５８３％。结论恒河猴对ＨＧＶ敏感，可以做为实验模型动物     

人工合成肽抗原检测戊型肝炎病毒IgM方法的建立与应用

本课题采用合成多肽抗原建立了检测抗戊型肝炎病毒(HEV)-IgM的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,成本低、操作简便、快速、重复性好、特异性强。与抗甲型肝炎病毒(HAV)、乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)的IgM抗体无交叉反应,排除了RF的干扰,且可被β-     

检测HIV-1/2型抗体的双抗原夹心方法的建立及其试剂盒的研制

为建立更敏感的检测人免疫缺陷病毒 (ＨＩＶ)抗体的方法 ,并研制检测试剂盒。根据ＨＩＶ 1/ 2型的基因序列及其所编码氨基酸结构 ,采用固相法合成了ＨＩＶ 1型的ｇｐ4 1.1、ｇｐ4 1.2、ｇｐ12 0、Ｐ2 4和ＨＩＶ 2型的ｇｐ36　 5条多肽 ,混合包被酶标板作为固相抗原 ,并用辣根过氧化物酶标记以上多肽抗原作为标记物 ,建立检测血清中ＨＩＶ 1/ 2抗体的双抗原夹心ＥＬＩＳＡ法。同时 ,应用该方法制备检测ＨＩＶ抗体的试剂盒 ,并检测 3批卫生部药品和生物制品检定所ＨＩＶ诊断试剂国家参比品。用检定所参比品检测 ,该方法特异性、灵敏度均为 10 …     

引起细胞病变的甲肝病毒BJ—1株结构蛋白VP4—VP2基因序列的测定

测定我室分离的甲型肝炎病毒ＢＪ－１株结构蛋白ＶＰ４－ＶＰ２基因区的核心苷酸序列。方法从ＢＪ－１感染的Ａ５４９细胞中提取病毒ＲＮＡ模板，通过ＲＴ－ＰＣＲ扩增相应的ｃＤＮＡ片段，测定其核苷酸序列。结果ＢＪ－１株与野型株ＭＢＢ比较，ＶＰ４－ＶＰ２区有４个核苷酸变异，同源性为９９．５％，推论的氨基酸序列有１个氨基酸变异，同源性为９９．６％。与ＨＭ－１７５比较，有３０个核苷酸变异，同源性为９５．９％（７０５