1株快速增殖的HAV分离株基因型分析

目的确定1株快速增殖HAV临床分离株HAV302的基因型及其特点。方法提取培养病毒RNA模板,通过反转录-聚合酶链反应技术扩增该病毒编码区基因并行序列测定,随后利用序列分析软件对其进行序列分析和基因型比对。结果 HAV302株VP1/2A区基因序列与Gen Bank中收录的HAVⅠ型中的ⅠB亚型MBB株核苷酸同源性最高(99.4%)。进化树分析显示,HAV302株与MBB株亲缘最近。与MBB株相比,非结构蛋白编码区中的2B和2C区在整个病毒的编码区中变异最大。结论 HAV302株属于HAVⅠ型中的ⅠB亚型,其2B和2C区的变异可能是导致病毒快速增殖的原因之一。     

肠道病毒71型（EV71）AH3株感染性克隆的构建与鉴定

目的 构建肠道病毒71型（Enterovirus71,EV71） AH3株的全基因序列感染性克隆.方法 通过分段扩增和酶切连接将EV71全基因组cDNA片段逐步克隆入PWSK29载体,构建含全病毒基因组序列的重组质粒.转染Vero细胞后,获得拯救病毒.经RT-PCR、酶切、测序、间接免疫荧光（IFA）等方法进行鉴定.结果 酶切鉴定结果与预期一致,序列分析显示为EV71基因;其转染Vero细胞后,可观察到典型的细胞病变;所获得的拯救子代病毒滴度（TCID50）为107.5;IFA检测可见感染细胞出现绿色荧光.结论 成功构建EV71全基因序列感染性克隆,为病毒致病机理及减毒疫苗的研究奠定基础.