利用基因参照品图谱分析克拉玛依地区HBV基因型

目的了解克拉玛依地区HBV基因型分布状况,比较其与GenBank HBV序列同源性以及进化树分析。方法通过对S基因区B、C、D型GenBank序列分析,研究MboⅠ酶和EarⅠ酶在不同型中具有独特的切点,利用限制性片段多态性分析(PCR_RFLP)区分各型,将各个基因型与GenBank序列进行1∶1同源性比对的进化树分析。结果272份样品有241份成功分型。C型44.8%,B型36.9%,D型4.1%,B C型10.8%,B D型3.3%。少数民族C型40.4%,B型30.7%,D型9.6%。B、C、D型的同源性分别是97.8%~98.7%,96.9%~99.3%,97.5%~99.0%。进化树分析发现,克拉玛依地区的2例D型与新疆哈密地区D型进化距离最近。结论克拉玛依地区HBV基因型B、C、D均有,以B、C型占优势,未检测到A型,D型与新疆哈密地区D型有较近的亲缘关系。     

Ⅲ型中国株HCV E2/NS1基因的扩增及其哺乳动物细胞表达质粒克隆构建

Ⅲ型中国株ＨＣＶＥ２／ＮＳ１基因的扩增及其哺乳动物细胞表达质粒克隆构建吴朝栋陶其敏杜绍财常锦红（北京医科大学人民医院肝病研究所，北京１０００４４）Ｅ２／ＮＳ１基因被认为是丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因组的结构区基因，具有较大的变异性［１］，而且在不同的...     

HCV NS5 b套式PCR在酶切基因分型研究中的应用

目的：探讨ＨＣＶ ＮＳ５ ｂ区酶切分型技术在临床上的应用。方法：选用了ＨｐａⅡ、Ｃｆｒ１０Ⅰ、ＡｌｕⅠ、ＨｈａⅠ、ＨａｅⅢ、ＡｖａⅡ、ＴａｑⅠ、ＢｓｔＮⅠ、Ｓａｖ３ＡⅠ、ＳｔｕⅠ、ＢａｌⅠ、ＳｍａⅠ等１３种限制性内切酶,对已知２３例１ｂ型和１７例２ａ型样品进行酶切分析和验证。结果：４０例ＮＳ５ｂ分型结果表明２３例１ｂ型中有ＡｌｕⅠ特异切点,无１ａ的ＢａｌⅠ切点和２ｂ的ＭｂｏⅠ切点,１７例２ａ型中无     

丙型肝炎诊断试剂的研究

本文用分子生物学方法根据中国人HCV基因特点进行多肽合成,研究丙型肝炎C区、E区酶标试剂的临床应用以及与抗C 100-3试剂的比较,并以 RT双 PCR的方法建立了HCV RNA的检测试剂及临床应用。结果发现抗-CP试剂敏感性、特异性均优于抗C100-3,从临床检测结果看,在自然人群中感染率抗-CP为2.8％,抗C100-3为2.1％,特别在输血后肝炎中,抗 CP阳性率高达 71.7％～75.9％。因此提出对HCV的诊断确立与愈后判断各类试剂有各自的作用,不能只根据某一试剂的某一次结果而简单地否定 HCV感染。HCV RNA测定,建立了5’末端非编码区及非结构区(NS 1),采用双PCR观察结果抗-CP阳性者绝大多数为RNA阳性,并提示将有助于抗病毒药物疗效的观察指标。     

82例 HCV RNA 阳性血清聚合酶链反应产物的酶切分析

为了探讨广州地区ＨＣＶ感染的基因型，作者对广州地区不同人群中１０５例抗－ＨＣＶ阳性血清用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）进行了ＨＣＶＲＮＡ的检测，对其中８２例ＨＣＶＲＮＡ阳性患者血清做了ＰＣＲ产物的限制性内切片段长度多态性（ＲＦＬＰ）分析，结果显示：ＨＣＶⅡ型感染７８例（９２．１％），ＨＣＶⅢ型１例，ＨＣＶⅡ／Ⅲ型混合感染３例，４例ＨＣＶⅢ型感染均是肝病患者，初步表明广州地区ＨＣＶ感染大多数属Ⅱ型。     

丙型肝炎病毒非编码区ABC程序酶切分型研究

目的为进一步了解中国是否存在HCV 3b基因及1a、2b和6a基因型感染，建立HCV 5′端非编码区(5′ NCR)不同基因型的基因库。方法分型方法按ABC程序进行，A应用BHH′(BsrBⅠ、HaeⅡ、HinfⅠ)复介内切酶消化5′NCR cDNA，可将不同基因型划分为5组：1a、1b，6a，2a、2b，3a，3b、4a。B应用BstU Ⅰ内切酶鉴别1a、1b。C应用Hae Ⅲ内切酶鉴别2a、2b、3b、4a及6a。电泳检测片段大小。结果(1)la、1b、2a、2b、3a、3b、4a、6a 8种基因型参比品的ABC分型结果表明，该8种基因型获得良好的分型效果。(2)93份HCV RNA阳性患者ABC分型结果表明，1b型感染率占66．67％，2a型18．28％，1b／2b型、3b型及2b型均为3．23％，2a／2b型和1b／2a型各为2．15％，1a型1．08％。结论结果表明应用HCV 5′-NCR ABC分型技术既保证了HCV RNA检测的灵敏度，又能完成1a-6a型中的8种基因型的鉴别。     

脱氧尿嘧啶核苷酸掺入量对尿苷酶抗污染效果的影响

目的 了解脱氧尿嘧啶核苷酸（dUTP)掺入量与尿苷酶（UDG）抗污染的关系。方法 通过聚合酶链反应将50％ dUTP和全dUTP掺入HCV cDNA，并观察UDG的抗污染效果。结果 0．05U、0．1U、0．2U的UDG37℃消化60min,PAGE检测可抗10^-1－10^-8 50％ dU-DNA模板污染。0．1U UDG 37℃ 10min能抗10^-6,20min-30min可抗10^-5,PAGE虽阴性，但DNA－EIA杂交A值0．617，仍为阳性；40min可抗10^-3，未经杂交证实。37℃消化20min电泳检测可抗10^-1-10^-8全dU-DNA污染，DNA－EIA杂交A值在0．005－0．049均为阴性。结论 本文研究结果证实，用50％ dU-DNA为模板，37℃ 10-20min时，抗污染效果较差，需增加抗污染时间。应用全dU-DNA为模板时，可获得良好的抗污染效果。     

~3H乙肝病毒DNA探针在分子杂交检测血清中乙肝病毒DNA的临床应用

自从1983年本所建立斑点分子杂交方法检测血清乙肝病毒DNA以来,(以下简称斑试)有数篇报导应用~(32)P乙肝病毒DNA探针进行临床检测。说明斑试敏感、特异,并证实了乙肝病毒DNA与HBeAg、Dane颗粒、DNAP之间有良好的相关性,一些资料表明将~(32)P乙肝病毒DNA探针应用SouthernBlot法检测肝组织内乙肝病毒DNA状态。~3H乙肝病毒DNA探针过去多用于肝组织内病毒的原位杂交。我们应用缺刻转移标记制     

特异性免疫沉淀法检测血清中HBV Dane颗粒DNA聚合酶

乙型肝炎病毒(HBV)DNA聚合酶(DNAP)活力测定,对于观察HBV的复制和鉴别乙型肝炎的感染与否是有一定指导意义的,本试验自1978年建立以来,由于不少单位没有超速离心机,致使这一灵敏、特异的检验技术,一直没有被广泛地应用于临床,为此,研究改进,建立经济、简易的DNAP活力检测方法,非常必要。 我们自1979年开始研究应用免疫沉淀法,使血清中Dane颗粒被形成特异性抗原抗体复合物沉淀下来,再经Pronase E和NP-40处理测定DNAP活力,并用正交试验选择了DNAP的最佳反应条件,通过对正常人和HBsAg携带者血清中DNAP活力的检测数据比较,证明该方法灵敏度高,特异性强,经济简易,便于推广应用。     

中国HCV5''-非编码区复合酶切分型及其3b基因型序列分析

目的研究中国丙型肝炎病毒(HCV)不同基因型感染分布情况,并对3b序列进行分析。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增HCV5’NCR 1a、1b、2a、2b、3a、3b、4a、6a不同基因型的cDNA及187份HCV RNA阳性样品中cDNA。A应用BHH(BsrBⅠ、HaeⅡ、HinfⅠ)复合内切酶消化5‘-NCR cDNA,B应用BstUⅠ消化,C应用HaeⅢ消化,电泳检测片段大小。结果187例HCV RNA阳性患者A B C分型结果表明,1b型感染率占67．38％,2a型12．30％,1b/2a型为5．88％,3b型5．35％,2b型3．21％,2a/2b、1b/2b型各为2．14％,1a型1．07,6a型0．54％。3份3b基因型5’-NCR A-T克隆测序结果表明,3株3b型之间同源性为99．54％～100％。其中chiKQ50与G1514395 3a株为96．28％与G1676877 3b株同源性为98．6％,与1a型为93．49％,与1b型为94．88％,与2a型为91．63％,与2b型为89．30％,与4a型为95．35％,与6a型为93．4％,结论研究结果表明该项分型技术既保证了RT-PCR检测灵敏度,又具有良好的分型效果。提示：该分型方法不仅适合中国HCV基因型检测,对亚洲及欧洲和非洲HCV分型研究也具有一定的参考价值。