模拟失重可通过BKCa信号调控大鼠肠系膜小动脉血管功能的昼夜节律变化

目的 探讨模拟失重对大鼠肠系膜小动脉舒张功能昼夜节律的影响以及血管舒张调控分子大电导钙激活钾离子（BK_Ca）信号的时间节律特征。 方法 采用1周尾部悬吊大鼠模型,检测大鼠肠系膜小动脉的舒张功能,继而在一天24 h内不同的6个授时因子时间点（Zeitgeber time,ZT)（ZT 0、4、8、12、16和20）以膜片钳电生理学方法记录BK_Ca通道的全细胞电流,以Western blot分析和RT-PCR检测BK_Ca通道a亚基的蛋白和mRNA表达水平。 结果 对照组大鼠肠系膜小动脉的舒张功能表现为白天升高（ZT4,中午12:00）、夜晚（ZT16,凌晨12:00）降低的趋势;而悬吊组大鼠后肠系膜小动脉舒张功能在白天与夜晚均显著下降（P < 0.05）,且其昼夜波动幅度明显降低（P < 0.05）。对照组大鼠肠系膜小动脉血管平滑肌细胞BK_Ca通道电流密度、a亚基的蛋白与mRNA表达水平均呈现“昼高夜低”的节律特征;而悬吊组可显著降低BK_Ca通道在白天与夜晚的电流密度、a亚基的蛋白与mRNA表达水平,而且其通道活性和蛋白表达的昼夜波动幅度也显著降低（均P < 0.05）,但mRNA表达水平的昼夜波动幅度没有明显变化,提示存在转录后修饰调控。 结论 模拟失重可通过BK_Ca信号调控大鼠肠系膜小动脉血管的昼夜节律变化,深入研究BK_Ca通道昼夜节律特征,对揭示航天飞行后心血管功能失调和血管疾病的发生机制均有深远的意义。     

胰腺癌患者血循环miR-429的表达及其临床意义

目的:检测胰腺癌患者血浆miR-429表达水平,分析其表达与胰腺癌临床病理学特征的关系。方法:定量PCR检测BXPC-3、PANC-1细胞株以及3例胰腺癌组织中miR-429的表达水平。收集未经治疗的37例胰腺癌患者的血浆标本,采用实时定量PCR法检测miR-429表达水平,收集胰腺癌患者的临床病理学参数(年龄、临床分期、分化程度、组织类型及淋巴结转移情况),比较不同miR-429水平的临床病理参数分布差异。结果:相较于正常胰腺细胞、胰腺组织,miR-429在胰腺癌细胞株和癌组织中均处于低表达水平(P<0.05)。miR-429表达与肿瘤大小、TNM临床分期、神经浸润以及生存期密切相关,均有统计学差异(P<0.05)。结论:循环血miR-429的表达可能成为胰腺癌早期诊断、预后判断的指标。     

miRNA-34a抑制乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的增殖与侵袭

目的:研究miRNA-34a(miR-34a)对乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的生物调控作用。方法:采用定量PCR检测人乳腺上皮细胞MCF-10A,乳腺癌细胞株MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453、Hs578T中miR-34a的表达水平。通过miR-34a mimics分别上调MCF-7、MDA-MB-231细胞中miR-34a的表达水平,MTT和Transwell检测肿瘤细胞增殖能力、侵袭力等生物学行为的变化。结果:乳腺癌细胞MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453、Hs578T中miR-34a处于低表达水平。通过miR-34a mimics上调MCF-7、MDA-MB-231细胞中miR-34a的表达后,细胞的增殖能力被miR-34a抑制（P＜0.05）,miR-34a对细胞侵袭有显著抑制作用（P＜0.05）。结论:miR－34a在乳腺癌细胞MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-453及Hs578T中低表达,miR-34a抑制乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231的细胞增殖和侵袭能力。     

小分子化合物S1抑制K562细胞增殖及其机理研究

目的:探讨小分子化合物S1对K562细胞的抑制作用及机理,为S1治疗慢性粒细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）提供理论与实验基础。方法:MTT法检测不同浓度S1对K562细胞增殖的抑制作用;应用Chou-Talalay计算联合指数,观察单独应用S1与S1联合阿糖胞苷对K562细胞增殖抑制的协同作用;Western-blotting方法检测不同浓度S1作用后K562细胞系中Bcl-2蛋白表达水平的变化。结果:与对照组相比,S1可以抑制K562细胞的增殖（P<0.05）;S1与阿糖胞苷联合应用对K562细胞的生长抑制具有协同作用,联合指数CI<1;S1可下调K562细胞系中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达。结论:小分子化合物可通过下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达抑制K652细胞的增殖,并与阿糖胞苷具有协同作用。     

miRNA-141对胃癌细胞生长的抑制调节作用

目的:研究miRNA-141在胃癌细胞中的生物学功能。方法:定量PCR检测人胃黏膜细胞GES-1,胃癌细胞株BGC823、MGC803、SGC7901中miRNA-141的表达,通过miRNA-141 inhibitor、mimics分别抑制及促进miRNA-141的表达,观察癌细胞增殖、克隆形成、侵袭能力的变化。结果:胃癌细胞BGC823、MGC803、SGC7901中miRNA-141处于低表达状态。上调miRNA-141的表达后,miRNA-141明显抑制SGC7901细胞增殖（P<0.05）,抑制肿瘤细胞克隆形成（P<0.05）及癌细胞侵袭力（P<0.05）。结论:miRNA－141对胃癌细胞SGC7901具有负性调控作用,可以作为潜在的治疗靶点。     

钟控基因PER1、PER2在乳腺癌中的表达及临床意义

目的:研究钟控基因PER1、PER2在乳腺癌中的表达,明确时钟基因表达在乳腺癌中的作用。方法:取60例乳腺癌患者癌组织和癌旁组织,分别用免疫组化办法检测PER1、PER2基因蛋白表达,与病理和临床结果进行统计学分析。结果:PER1、PER2基因在乳腺癌细胞和癌旁组织中阳性表达率有显著差异（P＜0.01）。乳腺癌PER1蛋白表达和ER、PR、c-erbB2表达、组织分级有显著相关性,和年龄、肿瘤大小和分期无相关性。PER2表达和c-erbB2、组织分级有显著相关性,和年龄、ER、PR、肿瘤大小和分期无相关性。结论:钟控基因PER1、PER2表达缺失和乳腺癌发生有关,在乳腺癌发生过程中具有重要作用。     

黄芩素对miR-183/Kif2a介导乳腺癌细胞增殖和凋亡的机制研究

目的探讨黄芩素对miR-183/Kif2a介导的乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的作用及可能机制。方法噻唑蓝(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)法检测黄芩素对乳腺癌细胞增殖活性的影响,实时荧光定量聚合酶链式反应法检测细胞中miR-183和Kif2a信使RNA的表达,在线靶基因预测软件预测miR-183和Kif2a的靶向关系。转染miR-183抑制剂和pcDNA 3.1-Kif2a,黄芩素处理细胞后,MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞术测定细胞凋亡,蛋白质免疫印记技术(western blot,WB)检测细胞中G1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)、p21、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(C-Caspase-3)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(C-Caspase-9)蛋白表达。结果经黄芩素处理后的乳腺癌细胞增殖能力下降(P<0.05),细胞中miR-183水平升高(P<0.05),Kif2a信使RNA水平降低(P<0.05)。miR-183靶向结合Kif2a并负向调控Kif2a的表达(P<0.05)。miR-183抑制剂或pcDNA 3.1-Kif2a转染可以逆转黄芩素对乳腺癌增殖、凋亡以及C-Caspase-3、C-Caspase-9、Cyclin D1、p21蛋白表达的作用。结论黄芩素通过miR-183/Kif2a调控乳腺癌细胞增殖和凋亡。     

FAT4通过调节乳腺癌耐药蛋白表达调节结直肠癌对5-FU的耐药性研究

[目的]研究FAT4通过上调乳腺癌耐药蛋白(BCRP)影响结直肠癌对5-FU的耐药性。[方法]采用RT-PCR检测50例结直肠癌患者中癌组织以及相应癌旁组织和正常组织中FAT4表达量;采用免疫组化检测手术组以及手术+新辅助化疗组中FAT4以及BCRP的相对表达量,并采用Pearson相关性分析FAT4与BCRP表达水平间的相关性;采用RT-PCR检测各结直肠癌细胞系(SW48、HT-29、HCT-116、SW620、DLD1、SW480、CaCO2、LOVO)中FAT4和BCRP mRNA的表达量;构建过表达FAT4或敲降FAT4的直肠癌细胞系,用RT-PCR以及Western blot检测FAT4表达水平的变化;进一步使用5-FU刺激过表达FAT4或敲降FAT4的直肠癌细胞系,MTT检测其增殖能力的变化。[结果]与正常组织以及癌旁组织比较,FAT4以及BCRP在癌组织中表达量较高(P<0.001),5-FU刺激结直肠癌细胞后,与对照组比较,FAT4过表达可以增加其细胞增殖能力(P<0.01),FAT4敲减可以降低细胞增殖能力(P<0.01)。Pearson相关性分析显示,结直肠癌患者中FAT4和BCRP表达水平存在明显的正相关(P<0.001)。在HT-29细胞中FAT4过表达能促进BRCP的表达,在SW480细胞中FAT4敲减后会抑制BRCP的表达;在过表达FAT4的结直肠癌细胞中转染shBCRP会降低其对5-FU的耐药性。[结论]FAT4通过上调耐药基因BCRP,使直肠癌细胞对5-FU的耐药性增加。     

青年高血压病患者的临床特点分析

目的：通过对青年与老年原发性高血压的血压水平、血压分类、危险因素及靶器官损害和并存临床情况的比较,探讨青年高血压病的临床特点,为青年高血压病的临床防治提供参考依据。方法随机选择2008年1月~2008年12月在西安交通大学医学院第一附属医院住院的原发性高血压病患者314例,按年龄分为青年组172例（≤45岁）和老年组142例（≤60岁＜75岁）进行病例对照研究,两组患者具有可比性。比较两组间发病的一般情况、实验室检查、靶器官损害及并存临床情况的特点。结果（1）血压水平比较,收缩压青年组低于老年组,舒张压青年组高于老年组;（2）男性、高血压病家族史、吸烟、饮酒、肥胖在青年组中的发生率明显高于老年组;（3）青年组血钠含量较老年组低,血钙含量较老年组高;青年组中TG、ApoB显著高于老年组、HDL-C、ApoA-I、ApoA-I/ApoB则显著低于老年组;两组HOMA-IR水平比较,（2.77±2.80）uU/Lvs（1.80±1.49uU/L）。结论（1）青年高血压病以舒张压升高为主,脉压差较小,患病年龄较短,血压升高程度较轻。青年高血压病患者中,1、2级高血压及单纯舒张期高血压较老年组多见。（2）家族史、肥胖、饮酒、吸烟是青年高血压病患者的主要危险因素。（3）青年高血压病患者合并脂代谢、胰岛素抵抗、糖代谢等代谢性问题的比例较大。     

磷酸化caspase-8 在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的探索Src对caspase-8的磷酸化作用对非小细胞肺癌患者的临床意义。方法应用免疫组化方法检测Src及caspase-8
在非小细胞肺癌组织及对照肺组织中的表达,应用Western blot 检测非小细胞肺癌组织和对照肺组织的磷酸化caspase-8
（p-Y380-casp8）的表达,Kaplan-Meire法分析p-Y380-casp8阳性组和阴性组的无疾病生存情况。结果Caspase-8与Src在非小
细胞肺癌组织和对照肺组织中阳性表达率无显著性差异（P>0.05）,免疫组化caspase-8（+）Src（+）的非小细胞肺癌组织中磷酸化
caspase-8均阳性表达,磷酸化caspase-8在非小细胞肺癌组织中的阳性率显著高于对照肺组织（52.4% vs 7.1%,P<0.05）,磷酸化
caspase-8阳性表达非小细胞肺癌患者组术后2年无疾病生存率显著低于磷酸化caspase-8阴性组（32.0% vs 60.3%,P<0.05）。结
论磷酸化caspase-8 可以成为非小细胞肺癌患者不佳预后的标志分子,为临床非小细胞肺癌患者预后评估提供了全新理论
基础。