FTY720联合雷帕霉素抗胰腺癌细胞增殖作用的体外研究

目的 探讨FTY720和雷帕霉素联合用药体外抗胰腺癌细胞增殖的相互作用.方法 采用Panc-1和AsPc-1胰腺癌细胞株作为体外研究模型.以不含FTY720或雷帕霉素培养液处理的细胞株为对照组,FTY720单独用药的浓度范围为1～15 μmol/L;雷帕霉素单独用药的浓度范围为0.002～200 μmol/L,联合用药方案采用两组浓度的雷帕霉素联合7组不同浓度的FTY720;或者采用两组浓度的FTY720联合5组不同浓度的雷帕霉素.采用MTT法评估药物对细胞增殖的抑制率,采用双变量相关性分析法统计药物剂量与细胞增殖抑制率之间的相关性.结果 单独用药作用下,FTY720或雷帕霉素用药剂量与胰腺癌细胞增殖的抑制率呈现剂量依赖性（FTY720＋AsPc-1：r=0.887,P=0.000;雷帕霉素＋AsPc-1：r=0.822,P=0.000 ;FTY720＋Panc-1：r=0.796,P=0.000;雷帕霉素＋Panc-1：r=0.786,P=0.000）.当10μmol/L FTY720和0.002 μmol/L雷帕霉素联用时,对AsPc-1细胞增殖的抑制率达50%（P=0.000）,对Panc-1细胞增殖的抑制率达40%（P=0.000）,两药联用具有协同作用.结论 FTY720及雷帕霉素在体外均能呈剂量依赖性地抑制胰腺癌细胞增殖,联合用药后能协同抑制胰腺癌细胞的增殖.     

高渗盐水预处理可减轻中性粒细胞介导的肝脏缺血再灌注损伤

目的：探讨高渗盐水预处理对肝脏缺血再灌注损伤的拮抗作用及其机制。方法：建立大鼠局部肝脏缺血再灌注模型。设假手术组（sham组）、缺血再灌注组（IR组）和高渗盐水预处理组（HTS组），分别于再灌注后1 h、3 h、6 h、12 h和24 h处死大鼠，测定谷丙转氨酶（ALT）；抗凝血流式细胞仪测定中性粒细胞CD11b/CD18(Mac-1)的阳性率；RT-PCR和Western blotting分别测定肝内细胞间黏附分子1（ICAM-1）的mRNA和蛋白表达；比色法测定肝脏内髓过氧化物酶（MPO）活性；常规病理及电镜观察肝脏的病理学改变及肝脏内中性粒细胞的浸润情况。结果： ① HTS组在3 h、6 h和12 h血清ALT水平明显低于IR组（P<0.05）。②HTS组在6 h和12 h中性粒细胞Mac-1表达显著弱于IR组（P<0.05）。③HTS组肝脏MPO活性在再灌注后6 h、12 h和24 h明显低于IR组（P<0.05）。④HTS组大鼠肝脏内ICAM-1mRNA及蛋白表达明显低于IR组。⑤HTS组肝内中性粒细胞浸润、肝细胞浊肿和肝窦狭窄程度轻于IR组。结论： HTS预处理能够通过抑制中性粒细胞Mac-1和肝内ICAM-1的表达，明显抑制肝内中性粒细胞的黏附和聚集，起到拮抗肝脏缺血再灌注损伤的作用。     

转化生长因子β1诱导胰腺癌细胞获得肿瘤干细胞功能的研究

目的探讨转化生长因子β1（TGF-β1）对胰腺癌细胞系肿瘤干细胞标记物CD133表达的影响。 方法将三种胰腺癌细胞系（AsPc-1、Panc-1和SW1990）分别分成对照组及实验组,三种细胞系中对照组予以10 μl CD133抗体及90 μl磷酸盐缓冲液（PBS）标记液,实验组予以10 μg/L TGF-β1及90 μl PBS标记液。运用流式细胞计数（FACS）评估TGF-β1对Panc-1、AsPc-1和SW1990中CD133表达的影响;同时,采用磁性活化细胞分选技术（MACS）筛选出三种细胞系CD133阴性细胞,分成Blank组、T组及T + I组,T + I组同时加入10 μg/L浓度的TGF-β1以及10 μmol /L TGF-β1抑制剂,Blank组仅添加等量的PBS溶液,T组中加入10 μg/LTGF-β1及与抑制剂等量的PBS溶液。采用FACS评估TGF-β1及其特异性抑制剂对胰腺癌CD133阴性细胞的影响。 结果AsPc-1[（1.63 ± 0.21）% vs.（0.63 ± 0.12）%,t = 7.276,P = 0.002]、Panc-1[（3.48 ± 1.26）% vs.（0.66 ± 0.22）%,t = 4.924,P = 0.001]和SW1990[（3.83 ± 0.71）% vs.（0.90 ± 0.44）%,t = 6.102,P = 0.004]细胞系中实验组CD133阳性率显著高于对照组。同时,由MACS分选后的CD133阴性细胞中,AsPc-1[（1.70 ± 0.66）%、（0.50 ± 0.00）%、（0.64 ± 0.21）%]、Panc-1[（1.45 ± 0.53）%、（0.50 ± 0.00）%、（0.42 ± 0.17）%]和SW1990[（1.68 ± 1.26）%、（0.50 ± 0.00）%、（0.62 ± 0.11）%]中T组CD133阳性率均显著高于Blank组及T + I组（P均< 0.05）。 结论TGF-β1可以使胰腺癌细胞获得肿瘤干细胞能力,并且该现象可以被TGF-β1抑制剂所阻断。     

原位肝移植术后胆道并发症治疗经验

目的总结原位肝移植术后胆道并发症的治疗经验。方法1999年2月至2004年2月,我中心采用胆总管-胆总管端端吻合术施行原位肝移植236例,96例采用置“T”管引流的胆管间断吻合;39例采用未置“T”管的胆管间断吻合技术;101例采用未置“T”管、前壁间断后壁连续的胆管吻合。结果全组术后32例(13·3%)发生胆道并发症,其中胆管狭窄24例(10·0%),胆漏6例(2·5%),胆管结石2例(0·8%)。3组胆道并发症发生率分别为17·7%、15·4%和7·9%,其中肝门部/肝内胆管狭窄发生率分别为8·3%,2·6%和1·0%。第3组胆道并发症发生率和胆管狭窄发生率显著降低(P<0·05)。20例胆管狭窄患者接受放射和/或内镜介入治疗,其中单纯吻合口狭窄治愈率90%,肝门部/肝内胆管狭窄治愈率60%。结论弃用“T”管的胆管前壁间断后壁连续的吻合方式能显著减少胆道并发症;非缺血相关性胆管吻合口狭窄和单纯肝门部胆管狭窄应首选介入治疗。     

高渗盐水对缺血/再灌注损伤肝脏血红素加氧酶-1表达的影响

目的 探讨高渗盐水预处理对肝脏缺血／再灌注损伤的保护作用及其机制。方法 25只SD大鼠随机分为假手术组、血红素加氧酶-1（HO-1）抑制剂锌原卟啉（ZnPP）组、缺血／ig灌注组、高渗盐水预处理组及ZnPP干预组，每组5只。建立大鼠局部肝脏缺血／再灌注损伤模型，于缺血／再灌注后6h测定血清丙氨酸转氨酶（ALT）活性、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量、肝组织髓过氧化物酶（MPO）活性及肝组织内皮素1（ET1）含量；采用逆转录-聚合酶链反应（RTPCR）和蛋白质免疫印迹法（Westernblot）检测肝组织HO-1mRNA和蛋白表达；光镜和电镜下观察肝脏病理学改变及肝窦情况。观察使用ZnPP后，高渗盐水预处理对肝脏缺血／再灌注损伤的保护作用。结果 肝脏缺血／再灌注后血清ALT活性、TNF-α含量及肝组织MPO活性、ET-1含量均明显升高（P均d0．01），HO-1mRNA和蛋白表达明显增强。高渗盐水预处理明显增强缺血／再灌注后肝脏HO-1mRNA及蛋白表达，降低血清ALT、TNF-α水平及肝组织MPO活性和ET-1含量，肝脏微循环明显改善；使用ZnPP以后，高渗盐水预处理的保护作用消失。结论 高渗盐水预处理通过增强HO-1表达，对肝脏缺血／再灌注损伤产生保护作用。     

环孢素A对乙型肝炎病毒作用的体外实验

目的探讨环孢素A（CsA）在体外对乙型肝炎病毒（HBV）蛋白合成、DNA复制的影响。方法将不同浓度的CsA（0．6～20．0μg／ml）作用于HepG2．2．15细胞系，通过检测细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原（HBsAg）和乙型肝炎e抗原（HBeAg）水平；以及细胞内乙型肝炎核心抗原（HBcAg）mRNA水平和HBVDNA水平来评价HBV复制情况；通过检测细胞内PyK2激酶402位点酪氨酸（PyK2Y402）磷酸化水平来探讨CsA对HBV复制的作用机制。结果CsA对HBV复制具有抑制作用，随着CsA浓度的升高，对HBsAg和HBeAg的抑制率逐渐上升，细胞内HBVDNA复制水平下降。10．0μg／ml CsA作用4d时，对HBsAg和HBeAg的抑制率分别为49．7％和34．3％，HBVDNA的表达量仅为对照组的34．9％。在2．0“g／ml CsA作用下PyK2 Y402的磷酸化水平下降。结论CsA对HepG2．2．15细胞HBsAg和HBeAg表达、HBVDNA复制均有抑制作用，并呈剂量依赖性。CsA可能通过降低PyK2 Y402的磷酸化水平抑制HBV的复制。