黄蒲通窍胶囊对阿尔茨海默病模型大鼠Wnt/Ca2+信号通路的影响

目的 观察黄蒲通窍胶囊对阿尔茨海默病（Alzheimers disease,AD）模型大鼠学习记忆的影响,探究其潜在作用机制。方法 将30只SD大鼠随机分为空白组、模型组、黄蒲通窍胶囊组,每组10只,腹腔注射D-半乳糖联合双侧海马注射Aβ25-35复制AD大鼠模型;给药28 d,采用Morris水迷宫实验检测大鼠的学习记忆能力,检测后取材,采用苏木精-伊红染色观察海马神经细胞损伤情况,采用Western blot法检测海马组织中Wnt5、Frizzled、PLCβ蛋白表达水平,采用ELISA法检测血清三磷酸肌醇（inositol triphosphate,IP3）表达水平。结果 Morris水迷宫实验结果显示：训练期,各组大鼠的逃避潜伏期随时间的增加呈下降趋势;测试期,与空白组比较,模型组大鼠逃避潜伏期明显延长,目标象限路程与时间百分比明显减少（P＜0.05）;与模型组比较,黄蒲通窍胶囊组大鼠逃避潜伏期明显缩短,目标象限路程百分比和时间百分比明显增加（P＜0.05）。苏木精-伊红染色结果显示：与空白组比较,模型组大鼠海马神经细胞萎缩破裂、层数减少、排列松散;与模型组比较,黄蒲通窍胶囊组大鼠海马神经细胞损伤减轻。Western blot法检测结果显示：与空白组比较,模型大鼠Wnt5、Frizzled、PLCβ表达水平均明显升高（P＜0.05）;与模型组比较,黄蒲通窍胶囊组大鼠Wnt5、Frizzled、PLCβ表达水平均明显降低（P＜0.05）。ELISA法检测结果显示：与空白组比较,模型组大鼠IP3表达水平明显升高（P＜0.05）;与模型组比较,黄蒲通窍胶囊组IP3表达水平明显降低（P＜0.05）。结论 黄蒲通窍胶囊可减少AD模型大鼠海马神经细胞的损伤,改善其学习记忆的能力,其机制可能与抑制Wnt/Ca2+信号通路有关。     

止血药物干预对高血压性脑出血早期血肿扩大的影响研究

脑出血是卒中最严重的一种类型,半数以上的死亡发生在发病后2d[1],脑出血多为高血压所致。长期以来,对于Herb-steini提出的原发性高血压脑出血的血肿形成是一短促过程的看法[2],人们一直奉若经典,但也有人通过临床观察和血管造影发现,部分脑出血患者发病后常常有数小时、甚至数十小时的症状持续加重期,提示存在活动性出血[3]。     

益气活血通络方对糖尿病周围神经病变小鼠JNK信号通路蛋白及炎性因子的影响

目的研究益气活血通络方对糖尿病周围神经病变模型小鼠(db/db小鼠)JNK信号通路蛋白及炎性因子的影响,探讨其对db/db小鼠周围神经的保护作用机制。方法 40只db/db小鼠随机分为5组:模型组、硫辛酸组和益气活血通络方高、中、低剂量(6.4、3.2、1.6 g/kg)组,另设8只db/m小鼠作为正常组。灌胃给药,1次/d,连续8周。末次给药后,测定小鼠足底热敏反应时间和运动神经传导速度(MNCV);酶联免疫吸附法(ELISA法)检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot法检测背根神经节中c-jun氨基末端激酶(JNK)和磷酸化的c-jun氨基末端激酶(p-JNK)的蛋白表达。结果与正常组比较,模型组小鼠MNCV减慢,足底热敏反应时间延长,血清中IL-1β、TNF-α水平升高,背根神经节中JNK、p-JNK蛋白的表达增强,差异具有统计学意义(P0.01或P0.05)。与模型组比较,益气活血通络方能提高小鼠MNCV,缩短足底热敏反应时间,降低血清中IL-1β、TNF-α水平,一定程度下调背根神经节中JNK、p-JNK的蛋白表达(P0.01或P0.05)。结论益气活血通络方能抑制JNK信号转导通路的异常激活,减轻db/db小鼠炎症反应,从而保护周围神经的功能。     

黄地安消胶囊对糖尿病认知功能障碍大鼠神经保护作用及机制研究

目的 通过观察黄地安消胶囊对糖尿病认知功能障碍（diabetic cognitive dysfunction,DCD）动物模型神经保护及Bax/Bcl-2凋亡信号通路的影响,探讨黄地安消胶囊治疗DCD、改善学习记忆功能的作用机制。方法 采用腹腔注射STZ联合Aβ25-35双侧海马注射复制DCD动物模型,期间予以高剂量（12 g/kg）,中剂量（6 g/kg）及低剂量（3 g/kg）的黄地安消胶囊干预28 d,同时设立正常组、模型组以及二甲双胍和多奈哌齐组,每组10只。Morris水迷宫实验测试各组大鼠逃避潜伏期,大鼠尾静脉取血检测大鼠模型复制前及给药前后空腹血糖变化,苏木精-伊红染色观察各组大鼠海马神经细胞损伤情况,免疫荧光法观察各组大鼠海马Aβ清除情况,Western blot法检测大鼠海马神经细胞Bax、Bcl-2的蛋白表达量,qRT-PCR法检测Bax、Bcl-2的mRNA含量。结果 与正常组比较,模型组大鼠空腹血糖水平和逃避潜伏期明显升高（P＜0.05）,海马神经细胞损伤较重,Aβ沉积较多,Bax蛋白表达量及mRNA含量明显升高（P＜0.05）,Bcl-2蛋白表达量及mRNA含量明显降低（P＜0.05）;与模型组比较,黄地安消胶囊中剂量组具有最好的疗效,大鼠空腹血糖水平和逃避潜伏期明显降低,海马神经细胞损伤较轻,Aβ沉积较少,Bax蛋白表达量及mRNA含量明显降低（P＜0.05）,Bcl-2蛋白表达量及mRNA含量明显升高（P＜0.05）。结论 黄地安消胶囊对DCD大鼠的学习记忆能力有明显改善作用,能够降低血糖,改善DCD大鼠海马神经细胞的损伤,清除Aβ沉积,其作用机制可能与调控Bax/Bcl-2凋亡信号通路有关。     

益气活血通络方对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞炎性因子表达的影响

目的 研究益气活血通络方含药血清对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)炎性因子白细胞介素-1β（interleukin-1 beta, IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor alpha, TNF-α）、单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1）及金属基质蛋白酶-1（metal matrix proteinase-1, MMP-1）表达的影响,探讨益气活血通络方对脐静脉内皮细胞的保护作用。方法 选择SD大鼠30只,中药灌胃,制备含药血清。体外培养HUVECs,MTT法检测不同时间点、不同浓度葡萄糖对细胞存活率的影响;将HUVECs随机分为5组,即空白对照组,模型组,益气活血通络方低、中、高浓度组,高糖刺激后,分别加入不同浓度益气活血通络方含药血清干预,收集上清及细胞,ELISA法检测IL-6的表达,Western Blot法测定IL-1β、TNF-α、MCP-1及MMP-1蛋白的表达。结果 细胞培养48 h 后,33.3 mmol/L高糖组（模型组）细胞活力显著降低（P＜0.05）;高糖刺激可引起IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1及MMP-1蛋白的高表达(P＜0.05）,益气活血通络方含药血清显著抑制IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1及MMP-1蛋白的高表达（P＜0.05)。结论 益气活血通络方可抑制炎性因子的高表达,对高糖损伤的HUVECs有一定的保护作用。     

益气活血通络方对糖尿病神经病理性疼痛大鼠脊髓星形胶质细胞活性及JNK信号通路的影响

目的:探讨益气活血通络方防治糖尿病神经病理性疼痛(DNP)的作用机制。方法:高脂喂养联合单次小剂量注射STZ制备2型糖尿病大鼠,通过检测机械痛阈(MWT)和热缩足反应时间(TWL)判定DNP模型成功。Western blot检测脊髓JNK、p-JNK、GFAP蛋白表达;ELISA检测脊髓IL-1β、IL-10和TNF-α的表达;免疫荧光法检测脊髓星形胶质细胞活性。结果:与模型组比较,益气活血通络方各剂量组大鼠MWT、TWL均显著改善(P<0.01);大鼠脊髓JNK、p-JNK、GFAP蛋白表达均显著降低(P<0.01,P<0.05);大鼠脊髓炎性因子IL-1β、IL-10、TNF-α均显著降低(P<0.01,P<0.05);且DNP大鼠脊髓星形胶质细胞活性受到显著抑制(P<0.01)。结论:益气活血通络方对DNP大鼠具有明显的防治作用,其作用机制可能是通过抑制JNK信号通路,调节脊髓星形胶质细胞活性,从而减轻神经炎症反应导致的中枢敏化来实现的。     

芦荟大黄素对阿尔茨海默病大鼠PI3K/AKT/mTOR通路介导自噬的影响

目的 研究芦荟大黄素对阿尔茨海默病（Alzheimers disease,AD）大鼠的神经保护作用以及可能的调控机制。方法 选择健康雄性SD大鼠30只,采用随机分组的方式将大鼠分为空白组、模型组和芦荟大黄素组,每组10只。采用腹腔注射D-半乳糖和双侧颅内海马注射Aβ25-35的方式联合进行AD大鼠模型的复制。芦荟大黄素组大鼠按10 mL/kg给予芦荟大黄素混悬液,空白组和模型组给予等容积纯水,共28 d。Morris水迷宫试验检测大鼠学习记忆能力,苏木精-伊红染色观察海马CA1区神经细胞损伤情况,Western blot法和qRT-PCR法分别检测大鼠海马磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol-3-kinases,PI3K)/蛋白激酶B（protein kinase B, AKT）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（the mammalian target of rapamycin,mTOR）通路蛋白、自噬相关蛋白及其mRNA的表达水平。结果 AD大鼠学习记忆能力明显下降（P＜0.05）,海马CA1区神经细胞出现明显损伤,而芦荟大黄素可显著改善 AD大鼠学习记忆能力（P＜0.05）,减轻海马CA1区神经细胞损伤;AD大鼠海马p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、P62蛋白表达水平明显增加（P＜0.05）,Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,而芦荟大黄素可以显著减少AD大鼠海马p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、P62的蛋白表达水平（P＜0.05）,显著增加Beclin-1和LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白表达水平（P＜0.05）;AD大鼠海马PI3K、AKT、mTOR、P62 mRNA表达水平显著增加（P＜0.05）,Beclin-1和LC3 mRNA表达水平显著降低（P＜0.05）,而芦荟大黄素可以显著减少大鼠海马PI3K、AKT、mTOR、P62 mRNA表达水平（P＜0.05）,显著增加Beclin-1和LC3 mRNA表达水平（P＜0.05）。结论 芦荟大黄素能够显著改善AD大鼠的学习记忆能力,其作用机制可能是通过调控PI3K/AKT/mTOR通路介导的自噬来实现的。     

案例教学法在《人体寄生虫学》课程教学中的应用与思考

为了克服传统教学法在《人体寄生虫学》课程教学中的不足,探讨案例教学法的应用价值,本文就《人体寄生虫学》课程案例的选择和设计、案例教学过程、案例教学的优点以及存在的问题进行了总结和探讨,以期激发学生的学习热情,培养学生的自主学习能力,达到更好的教学效果。     

染料木素对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤的保护作用及CaM-CaMKIV信号通路的影响

染料木素是一种异黄酮类化合物,被称为植物雌激素,对心血管疾病、肿瘤、绝经后相关妇科疾病等都有较好的临床疗效,在阿尔茨海默病(AD)的防治上具有潜力。该实验通过观察染料木素对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞损伤的保护作用及CaMCaMKIV信号通路的影响,探讨染料木素对AD的神经保护作用机制。体外培养PC12细胞,MTT法筛选染料木素安全浓度和Aβ_(25-35)的造模浓度和最佳给药时间。预先给予不同浓度染料木素(25,50,100μmol·L~(-1))处理PC12细胞后,以Aβ_(25-35)建立AD细胞模型。采用MTT法检测染料木素对AD细胞模型细胞存活率的影响,倒置显微镜观察细胞形态的改变,AO/EB荧光染色观察细胞的凋亡情况,观察染料木素对AD细胞模型的神经保护作用并确定染料木素最佳给药浓度,qRT-PCR和Western blot法检测细胞中CaM,CaMKK,CaMKIV,tau的mRNA和蛋白表达。结果显示,和空白组相比,AD模型组细胞存活率明显下降,细胞损伤增加,凋亡细胞增多,CaM,CaMKK,CaMKIV,tau的mRNA含量和蛋白表达明显升高,而染料木素可明显提高AD细胞模型的细胞存活率,减少AD细胞模型的细胞损伤和细胞凋亡,显著下调AD细胞模型中CaM,CaMKK,CaMKIV,tau的mRNA含量和蛋白表达。结果表明染料木素对Aβ_(25-35)诱导的AD细胞模型具有明显的神经保护作用,其作用机制可能与下调CaM-CaMKIV信号通路及其下游tau蛋白的表达有关。