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半巢式RT-PCR法检测呼吸道合胞病毒 总被引:3,自引:0,他引:3
目的建立快速、敏感、特异的人呼吸道合胞病毒(Respiratory syncytial virus,RSV)检测方法。方法根据RSVF基因的保守序列设计3条引物,建立半巢式RT-PCR(semi-nested RT-PCR)检测方法。用该方法检测125例患急性下呼吸道感染的婴幼儿的鼻咽吸引物(nasopharyngeal aspirates,NPA)标本,同时对标本进行病毒分离和直接免疫荧光法检测。结果该半巢式RT-PCR灵敏度为0.1TCID50,用该方法在125例标本中共检出RSV阳性标本63例,阳性率50.4%。结论建立快速、敏感、特异的RSV半巢式RT-PCR检测方法,该方法适用于临床早期诊断和流行病学监测。 相似文献
7.
乙型流行性感冒病毒的基因快速检测 总被引:1,自引:2,他引:1
〔目的〕建立乙型流行性感冒病毒的核酸快速诊断技术。〔方法〕采用RT -PCR方法对乙型流感病毒的HA基因进行检测 ,我们对乙型流感病毒的HA基因保守区域设计相关引物 ,进行扩增 ,并作了特异性与灵敏度比较。〔结果〕该引物只能扩增乙型流感病毒的特异性片段 ,而对其它型别的流感病毒以及麻疹、风疹、腮腺炎病毒无交叉反应。检测的灵敏度一次PCR可达 1TCID50 ,二次PCR反应可达 0 .1TCID50 。〔结论〕采用该方法从临床患者含漱液标本中的检出率 ,比采用MDCK细胞分离的阳性率更高 ,可达到迅速、正确地诊断乙型流感的实用目的。 相似文献
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目的 为了对2004年浙江省报告的输入性疑似登革热病例查明病因,从分子水平分析流行毒株的生物学特征,追踪传染源,为疾病的预防控制提供实验室依据。方法 对疑似患者血清标本采用ELISA、IFA和荧光RT—PCR方法分别检测登革病毒IgM、IgG抗体和病毒核酸,并用C6/36和BHK-21细胞分离登革病毒。采用RT—PCR方法扩增病毒E基因和NS1基因后分别进行序列测定,并与不同国家和地区的登革热毒株进行同源性和进化树分析。结果 从患者血清中检测到登革病毒IgM、IgG抗体和登革2型病毒核酸,并分离到登革2型病毒;浙江省登革2型病毒分离株(ZJ/01/04)与登革2型国际标准株Jamaica、国内Fujian/10/99株和Saudi/92株在E基因上氨基酸的同源性分别为97.1%、99.2%和99.6%,而与登革1、3、4型毒株相同区域氨基酸同源性分别为68.7%、66.9%和63.6%。基因进化树显示ZJ/OI/04分离株与Saudi/92株亲缘关系最近,在进化树的同一分支上。结论 从病原学、血清学和分子生物学特征上均证实该输入病例是由登革2型病毒引起,该毒株最有可能来源于沙特阿拉伯。 相似文献
9.
TaqMan荧光定量RT-PCR快速检测登革1、2型病毒 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 建立特异、灵敏、快速的荧光定量RT—PCR方法用于检测登革1、2型病毒核酸,并初步应用于登革热的临床标本检测。方法 根据GenBank登录的登革热毒株序列。应用生物学软件进行序列比对,分别在登革病毒1型的NS5基因和2型的C基因的保守区设计特异性引物和TaqMan探针。对荧光定量RT—PCR反应条件进行优化,验证该方法的特异性、灵敏度和稳定性。同时对疑似登革热病例血清标本进行检测。结果 该方法对登革1、2型病毒的检测有高度的特异性,与登革病毒的4个血清型之间以及流行性乙型脑炎病毒、肾综合征出血热病毒等均无交叉反应,检测的灵敏度均达0.1TCID50,可从疑似登革热病例血清标本中直接检测登革病毒核酸,从病毒核酸提取至完成检测仅需3h左右。结论 本研究建立的TaqMan荧光定量RT—PCR是一种快速检测登革1、2型病毒特异、敏感的方法,适用于临床早期诊断。 相似文献
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目的比较p63与CK34陋12、SMA、PSA在前列腺病变中阳性表达的差异,探讨p63免疫标记前列腺基底细胞的可行性。方法选材共5l例,其中前列腺浸润性腺癌21例,前列腺增生症30例。选用p63等4种免疫组化抗体对上述病变进行标记。结果①93%在增生症之前列腺基底细胞p63呈阳性表达,高级别PIN中呈不连续表达;②83%CK34βE12呈阳性表达;③前列腺浸润性腺癌的p63和CK34βE12均阴性;④PSA在所有病例分泌腺上皮中呈阳性表达;⑤SMA对所有病例间质平滑肌及血管平滑肌呈阳性表达。结论通过2组不同病变观察基底细胞的有无是前列腺浸润性腺癌与前列腺增生症的主要鉴别点之一。p63抗体对前列腺基底细胞同CK34βE12一样敏感及特异,在我们的实验中其敏感性还高于CK34βE12。故在鉴别前列腺浸润性癌与增生症时,p63可作为首选抗体之一。 相似文献