ox-Lp(a)通过上调miR-125a-5p靶向抑制0,1-转位酶2增加单层血管内皮细胞通透性

目的 探讨ox-Lp(a)损伤血管内皮细胞的表观遗传调控机制。 方法 生物信息学分析和筛选与0,1-转位酶2(TET2) mRNA 3’-UTR靶向结合的候选miRNA,荧光素酶报告基因系统验证其结合的靶向性;以0 mg/L、25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L及200 mg/L的ox-Lp(a)与HUVEC-12内皮细胞孵育24 h,或用100 mg/L ox-Lp(a)与HUVEC-12内皮细胞孵育0 h、6 h、12 h、24 h及48 h,qRT-PCR和Western blot分别检测TET2 mRNA和蛋白的表达水平。qRT-PCR检测hsa-miR-125a-5p表达水平,以5hmc水平分析TET2活性的变化,Transwell检测ox-Lp(a)对单层血管内皮细胞通透性的影响。 结果 生物信息学分析和荧光素酶报告基因验证结果表明TET2为hsa-miR-125a-5p的靶基因,且hsa-miR-125a-5p与TET2 mRNA的3’-UTR结合的自由能值低(－30.1 kcal/mol)。ox-Lp(a)呈剂量和时间依赖性抑制TET2蛋白和mRNA的表达水平,以100 mg/L ox-Lp(a)作用HUVEC-12内皮细胞 24 h的效果最佳;100 mg/L ox-Lp(a)作用HUVEC-12内皮细胞 24 h后,TET2活性显著下降,且显著上调hsa-miR-125a-5p的表达。anti-hsa-miR-125a-5p能逆转ox-Lp(a)对HUVEC-12内皮细胞 TET2蛋白和mRNA表达水平的抑制作用和活性下降。ox-Lp(a)显著增加单层血管内皮细胞通透性,但可被anti-hsa-miR-125a-5p部分逆转。 结论 ox-Lp(a)通过上调hsa-miR-125a-5p并与TET2 mRNA 3’-UTR靶向性结合,抑制TET2蛋白和mRNA的表达水平及活性,从而增加单层血管内皮细胞通透性。     

microRNA调节细胞自噬影响动脉粥样硬化

动脉粥样硬化(As)是心脑血管疾病主要的病理因素。关于动脉粥样硬化发生发展的病理机制迄今为止尚未完全阐明。自噬是一种普遍存在于真核细胞中高度保守的生物学过程。正常水平的自噬抑制动脉粥样硬化的发生发展,而自噬缺陷或自噬过度则会加速斑块的破裂,导致心脑血管意外的发生。研究表明,microRNA通过参与动脉粥样硬化相关细胞自噬的调节影响动脉粥样硬化进程。文章主要就microRNA调节内皮细胞、巨噬细胞、平滑肌细胞自噬水平在动脉粥样硬化中的作用进行综述。     

母体表达基因3通过miR-125a-5p/TET2途径抑制HepG2细胞载脂蛋白(a)的表达

目的研究发现母体表达基因3(MEG3)对HepG2细胞载脂蛋白(a)[Apo(a)]表达的调控作用及其机制。方法用荧光素酶报告系统分析MEG3与miR-125a-5p的靶向性结合。采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测高表达Apo(a)的HepG2细胞和低表达Apo(a)的SMMC7721细胞中MEG3的表达情况;向HepG2细胞转染MEG3,Western blot和qRT-PCR检测Apo(a)、TET2表达情况;采用小干扰RNA技术沉默TET2的表达。结果 (1)MEG3与hsa-miR-125a-5p能互补性结合,荧光素酶报告基因系统分析结果证实了MEG3与hsa-miR-125a-5p结合的存在。(2)miR芯片结果表明,在HepG2细胞中,hsa-miR-125a-5p表达水平升高,是对照组的近1.5倍,MEG3在HepG2细胞和SMMC7721细胞中均有表达,但前者MEG3的表达水平显著低于后者。(3)MEG3抑制Apo(a)表达。(4)MEG3下调miR-125a-5p的表达,上调TET2的表达; miR-125a-5p的mimics可逆转MEG3对Apo(a)的下调作用及TET2的表达,但可被miR-125a-5p的抑制剂逆转; TET2沉默可逆转MEG3对Apo(a)的下调作用。结论 MEG3通过miR-125a-5p/TET2途径下调HepG2细胞Apo(a)的表达。     

参与负性调控胆固醇逆向转运的microRNA

加强胆固醇逆向转运(RCT)具有抗动脉粥样硬化作用,microRNA(miRNA)参与多种生物学过程的调控,研究发现多个miRNA参与RCT调控,其通过对RCT的关键蛋白ATP结合盒转运体A1(ABCA1)和受体B类Ⅰ型清道夫受体(SR-BⅠ)的调控而发挥作用。目前已发现多种miRNA可抑制ABCA1和SR-BⅠ蛋白表达水平,进而抑制RCT和胆固醇流出,本文拟就负性调控RCT的miRNA进行综述。     

干预载脂蛋白AⅠ表达的研究进展

大量的临床流行病学研究已经表明,高密度脂蛋白(HDL)水平与心血管疾病风险呈负相关。载脂蛋白AⅠ(Apo AⅠ)是HDL中的主要功能蛋白,其含量约占HDL的70%左右。寡脂的Apo AⅠ是ATP结合盒转运子A1(ABCA1)介导的巨噬细胞胆固醇流出的主要接受体,能够介导巨噬细胞中游离胆固醇的外流,启动胆固醇逆转运(RCT)过程,并在肝外组织清除过多胆固醇。大量的动物实验也已证实即使HDL保持正常水平,Apo AⅠ的缺乏也可导致动脉粥样硬化病变加重,过表达人Apo AⅠ基因抑制动脉粥样硬化早期脂纹的产生,因此调控Apo AⅠ基因表达对动脉粥样化及其他心血管疾病具有重要意义。本文拟就干预Apo AⅠ基因表达调控机制及诱导和抑制Apo AⅠ表达的相关因素进行综述。     

胆酸通过上调miR-23b-3p抑制载脂蛋白A表达

目的分析胆酸降载脂蛋白A(Apo A)效应与miR-23b-3p的关系,研究胆酸降Apo A作用新机制。方法首先用生物信息学在线工具对miR-23b-3p与调控LPA基因的转录因子肝细胞核因子4γ(HNF4γ)进行靶基因分析,使用荧光素酶报告系统对miR-23b-3p与调控LPA基因的转录因子HNF4γ进行靶基因验证实验,Western blot检测Apo A表达水平、p38MAPK(MAPK:丝裂原活化蛋白激酶)及p-p38MAPK,实时定量PCR检测miR-23b-3p表达水平。结果生物信息学分析表明HNF4γ可作为miR-23b-3p的靶基因,荧光素酶报告系统转染miR-23b-3p处理组细胞裂解后荧光强度显著低于对照组,验证了HNF4γ可作为miR-23b-3p的靶基因。胆酸呈剂量和时间依赖性抑制Hep G2细胞Apo A的表达,以32 mg/L和24 h的作用最显著。胆酸抑制Apo A表达与活化MAPK和上调miR-23b-3p有关。结论胆酸呈剂量和时间依赖性地下调Hep G2细胞Apo A表达水平;胆酸降Apo A与上调miR-23b-3p有关。