酵母双杂交筛选NGAL相互作用蛋白

目的:中性粒细胞明胶酶相关脂萼蛋 白(neutrophilgelatinase assiociatedlipocalin, NGAL)功能不明,籍筛选与之相互作用蛋白, 构筑相互作用图谱,为揭示其功能提供新途径。 方法:利用蛋白质相互作用原理,应用酵母双杂 交技术,构建pGBKT7 NGAL载体,以NGAL 为诱饵,在人类骨髓cDNA文库中筛选与之相 互作用蛋白的基因。结果:通过酵母交配筛库、 一对一验证和β gal分析筛选出40个阳性克 隆;测序,利用网上数据库(http://www.ncbi. nlm.nih.gov)对序列进行比对,初步确定了31 种基因,其中11种为未知基因,20种为已知基 因。已知基因中含有编码区的有LGALS1、 MT2A、COX1、RNP24、ATP1B3、IGL、IGH VDJ、RARRES2、GYPA、NEB和NPC2。结论: 筛选得到31种可能与NGAL相互作用蛋白的 基因,这为研究NGAL功能及作用机制提供了 新途径。     

新辅助化疗对口腔癌生存率影响的Meta分析

目的：评价新辅助化疗对口腔癌生存率的影响。方法：检索PubMed、中国学术期刊全文数据库中口腔癌新辅助化疗与单纯手术或手术后放疗的临床随机对照试验研究;用Comprehensive Meta Analysis（Version 2.0）软件比较新辅助化疗（755例）与单纯手术或手术后放疗组（719例）在总体、3、5年生存率的差异。结果：15项研究纳入Meta分析。新辅助化疗与单纯手术或手术后放疗组在总体、3、5年生存率均无统计学意义,其中对Ⅲ、Ⅳ期口腔癌患者生存率差异也无统计学意义。结论：在口腔癌综合治疗中,新辅助化疗在提高口腔癌患者生存率无明显优势。     

血红素氧化酶-1基因启动子区（GT）n重复序列多态性与原发性高血压及冠心病易感性的关联研究

目的：探讨HO-1基因启动子区（GT）n重复序列多态性与原发性高血压、冠心病以及原发性高血压合并冠心病易感性间的关联。方法：采用荧光标记PCR以及毛细管电泳相结合技术,检测HO-1基因启动子区（GT）n重复序列多态性在91例原发性高血压、111例冠心病、189例原发性高血压合并冠心病患者,以及性别、年龄相匹配的91例对照个体中等位基因和基因型频率分布差异。多因素降维法分析基因型与吸烟、糖尿病、高血脂等危险因素间的交互作用。结果：与对照组比,等位基因频率仅在冠心病组中分布有统计学意义（P〈0.05）,SL＋LL基因型频率在原发性高血压（P〈0.05）和冠心病组（P〈0.01）中有统计学意义（P〈0.05）,而在原发性高血压合并冠心病组中无统计学意义。SL＋LL基因型与吸烟交互作用增加了原发性高血压和冠心病的发病风险,而对于原发性高血压合并冠心病发病风险无影响。结论：HO-1基因启动子区（GT）n重复序列多态性可作为原发性高血压、冠心病发病风险评估的分子遗传标记。     

血红素氧化酶．1启动子区STR．SNP联合多态性与原发性高血压易感性间的关联研究

[目的：探讨血红素氧化酶（HO）-1启动子区STR．SNP联合多态性与原发性高血压易感性间的关联。方法：用毛细管电泳与直接测序法对139例原发性高血压者（病例组）及101例对照个体（对照组）的HO-1基因启动子区（GT）nSTR与．413SNP位点进行分型。利用分类树模型解析多态性对两组的区分能力；多因素Logistic回归分析多态性与原发性高血压易感性的关联；多因素降维法分析多态性与吸烟的交互作用。结果：STR．SNP标记分类树模型对两组分类正确率为73．8％（P〈O．01）。校正年龄、性别、吸烟混杂因素后，STR-SNP单体型仍是原发性高血压独立危险因素（OR：1．799，95％CI：1．027-3．154，P〈0．05）。STR．SNP多态性与吸烟交互作用明显增加原发性高血压患病风险（OR：9．583，95％CI：5．116～17．952，P〈0．01）。结论：联合HO．1基因启动子STR、SNP多态性可作为原发性高血压易感风险个体筛选的分子标记。     

酵母双杂交筛选NGAL相互作用蛋白

目的：中性粒细胞明胶酶相关脂萼蛋白（neutrophil gelatinase-assiociated lipocalin，NGAL）功能不明，籍筛选与之相互作用蛋白，构筑相互作用图谱，为揭示其功能提供新途径。方法：利用蛋白质相互作用原理，应用酵母双杂交技术，构建pGBKT7-NGAL载体，以NGAL为诱饵，在人类骨髓cDNA文库中筛选与之相互作用蛋白的基因。结果：通过酵母交配筛库、一对一验证和β-gal分析筛选出40个阳性克隆；测序．利用网上数据库（http：//www．ncbi．nlm．nih．gov）对序列进行比对．初步确定了31种基因．其中11种为未知基因，20种为已知基因。已知基因中舍有编码区的有LGALS1、MT2A、COX1、RNP24、ATP1R3、IGL、IGH、VDJ、RARRES2、GYPA、NEB和NPC2。结论：筛选得到31种可能与NGAL相互作用蛋白的基因．这为研究NGAL功能及作用机制提供了新途径。     

酵母双杂交技术的影响因素及其实验策略

目的　为了研究蛋白质分子间的相互作用 ,以大T抗原和P5 3为阳性对照 ,建立酵母双杂交实验系统。方法　通过比较共转化、顺序转化和交配实验三种方法的优劣 ,分析了影响酵母转化效率的因素 ,与此同时还分析了酵母体内 β 半乳糖苷酶的活性。 结果　①顺序转化比共转化转化效率高 ;②质粒纯度是影响酵母转化效率的一个主要因素 ,与经典碱裂解法提取质粒相比 ,试剂盒提取质粒的转化效率明显高 ;③PEG浓度对转化效率也有一定影响 ;④β 半乳糖苷酶定量分析能够区分蛋白质分子间的强相互作用与弱相互作用 ,实验结果更可靠。结论　在此基础上 ,我们提出了一种共转化与交配实验有机结合的有效的酵母双杂交新实验策略 ,并将之成功运用于筛选NGAL(neutrophilgelatinaseassociatedlipocalin ,NGAL)相互作用蛋白实验。     

血红素氧化酶-1基因启动子区（GT）n重复序列多态性与潮汕人群2型糖尿病易感性间的关联研究

目的：探讨HO-1基因启动子区（GT）n重复序列多态性与潮汕人群2型糖尿病（T2DM）易感性间的关联。方法：采用荧光标记PCR以及毛细管电泳相结合技术检测97例糖尿病患者以及156例正常对照个体HO-1基因启动子区（GT）n重复序列多态性及其频率分布差异。重复次数n≤25,为S型等位基因,n〉25为L型等位基因。结果：等位基因、基因型频率在病例与对照组中分布差异无统计学意义。在显性遗传模型下,SL＋LL与SS基因型比（OR=0.8,95CI：0.5-1.4）,以及隐性模型,LL与SL＋SS基因型比（OR=0.8,95CI：0.5-1.5）,未发现增加个体2型糖尿病发病风险的基因型。结论：HO-1基因启动子区（GT）n重复序列多态性与潮汕人群T2DM易感性无关。     

血红素氧化酶1启动子区功能性多态位点与冠心病易感性的关联

目的　血红素氧化酶1（HO-1）是诱导型血红素代谢限速酶,具有抗氧化与抗炎作用。该基因启动子区（GT）n重复序列与单核苷酸多态性（SNP）影响HO-1蛋白的表达。本研究探讨HO-1启动子区联合STR-SNP多态性与冠心病易感性间的关联。方法　毛细管电泳与Sanger测序分析171例冠心病及70例对照个体HO-1基因启动子区（GT）n重复序列与SNP分型。分类树模型预测多态性对冠心病患者与对照者的辨析能力,多因素Logistic回归分析多态性与冠心病易感性的关联,多因素降维法分析多态性与危险因素间的交互作用。结果　STR、SNP标记分类树模型对冠心病患者、对照个体的正确分类比例为71.0%（P<0.001）。STR-SNP单体型是冠心病独立危险因素（OR：1.890,95%CI：1.162～3.076,P0.010）,与吸烟存在交互作用（P0.008）。STR-SNP与吸烟交互作用明显增加冠心病患病风险（OR：6.994,95%CI：3.428～14.272,P0.001）。结论　HO-1基因启动子区功能性STR、SNP可作为冠心病易感风险评估的分子标记。     

血红素氧合酶1基因启动子区(GT)n重复序列多态性与广东潮汕人群冠心病易感性的关系

目的 探讨血红素氧合酶1基因启动子区(GT)n重复序列多态性与广东潮汕人群冠心病易感性的关系.方法 采用荧光标记PCR和毛细管电泳相结合技术检测血红素氧合酶1基因启动子区(GT)n重复序列多态性在300例冠心病患者以及性别、年龄相匹配的182例对照者中等位基因和基因型频率分布差异,重复次数n≤25为S型等位基因,n＞25为L型等位基因.Logistics回归分析基因型与吸烟、高血压、糖尿病、高血脂、家族史等冠心病危险因素间的交互作用.结果 等位基因和基因型频率在冠心病组与对照组中分布差异无显著性,基因型与吸烟(OR为1.790,95%CI为1.110-2.886)、高血压(OR为1.552,95%CI为1.045-2.304)、糖尿病(OR为1.727,95%CI为1.018-2.928)交互作用增加个体冠心病患病风险,SL+LL基因型与吸烟作用最为显著(OR为2.517, 95%CI为1.206-5.253).结论 血红素氧合酶1基因启动子区(GT)n重复序列多态性可作为潮汕人群伴危险因素个体冠心病易感风险评估的分子标记.