钙调神经磷酸酶对前B淋巴细胞及其转化的白血病细胞凋亡影响的研究

本研究比较钙调神经磷酸酶（calcineurin,PP2B,PP3）在小鼠前B淋巴细胞系（S9）及其转化的白血病细胞系（S4C2）中的差异表达,并探讨其参与白血病细胞凋亡的可能机制.用实时定量PCR技术检测H2AX磷酸化酶ATM、ATR、DNA-PKs、JNK1、P38和γ-H2AX磷酸酶PP1、PP2A、calcineurin、PP4、PP6、PP5 γ-PP2c、WIP-1在S9细胞和S4C2细胞之间的表达差异.用CCK-8法和流式细胞术检测伊马替尼（IM）和环孢霉素A（CsA）对细胞的毒性作用和凋亡的影响.利用Western blot技术检测药物对S9细胞和S4C2细胞凋亡的影响.结果发现,钙调神经磷酸酶基因在白血病细胞S4C2中的表达约为S9细胞的3.5倍,而其余基因的表达在两种细胞间无明显差异.IM和CsA对S4C2细胞的促凋亡作用明显强于S9细胞,同时两种药物对S4C2细胞毒性作用高于对S9细胞的毒性作用.钙调神经磷酸酶蛋白在S4C2细胞中的表达高于S9细胞.CsA特异性抑制钙调神经磷酸酶活性后,DNA损伤标记物γ-H2AX在S9细胞的表达明显低于S4C2细胞,而伊马替尼对其表达的影响在两细胞系之间无明显差异,联合应用两种药物时γ-H2AX在S9细胞的表达也低于S4C2细胞.结论：钙调神经磷酸酶在B淋巴细胞白血病细胞中发挥一定的抗凋亡作用,环孢素A抑制钙调神经磷酸酶活性促进了白血病细胞的凋亡.     

非清髓性单倍体骨髓移植后输注供体免疫细胞治疗白血病的研究

本研究在小鼠非清髓性单倍体骨髓移植模型上,观察移植后早期输注供体免疫细胞对促进植入及改善疗效的作用。以CB6F1雌性小鼠为受鼠,C57BL/6雄性小鼠为供鼠,移植前4 d经尾静脉注射小鼠红白血病细胞1×106个/只,移植前2 d和1 d分别通过腹腔注射阿糖胞苷0.015 g/只,移植前1d予450 cGy全身照射（TBI）,移植当天给予供鼠骨髓及脾细胞混合物6×107个/只,移植后15 d输注供体免疫淋巴细胞6×107个/只,移植后定期监测受鼠外周血供鼠CD3＋细胞嵌合状态和供鼠性别决定基因（SRY）,观察小鼠急性移植物抗宿主病（aGVHD）、疾病复发及生存情况。结果表明：经尾静脉注射小鼠红白血病细胞1×106个/只,不予治疗,小鼠平均生存期为15±1 d;混合骨髓移植组移植后供者细胞获得植入,SRY基因在移植后30和60 d时检测PCR结果均阳性,移植后14、30、60 d外周血供鼠CD3＋细胞嵌合率分别为（17.95±12.03）%、（37.34±2.78）%,（47.06±6.1）%;DLI组移植后30、45、60 d嵌合率为（69.78±12.62）%、（75±15.97）%、（83.41±16.07）%;小鼠移植后平均生存期分别为66.66±1.47 d、78.2±7.82 d。结论：移植前高肿瘤负荷影响供体细胞植入及预后,移植后早期行供体免疫淋巴细胞输注可以进一步改善治疗效果,延长生存期。     

非清髓单倍体相合骨髓移植后自然杀伤细胞参与急性移植物抗宿主病的免疫病理学研究

目的研究自然杀伤（natural killer,NK）细胞在非清髓单倍体相合骨髓移植中参与急性移植物抗宿主病（acute graft vs host disease,aGVHD）过程的免疫病理。方法本实验建立了以C57BL／6小鼠为供鼠、CB6F1小鼠为受鼠的急性移植物抗宿主病模型。观察小鼠发生aGVHD的症状体征,流式细胞术检测小鼠移植后嵌合率及NK细胞活化受体NKp46表达强度,免疫荧光染色观察aGVHD靶器官部位NK细胞分布。结果移植鼠aGVHD发生率80％,移植＋15d达到完全嵌合,移植＋25d左右小鼠出现体质量减轻、耸毛、弓背等典型aGVHD症状。发生aGVHD小鼠外周血NK细胞NKp46表达强度低于未发生aGVHD小鼠,受鼠肝汇管区有供鼠源NK细胞浸润。结论在非清髓单倍体相合骨髓移植中NK细胞参与了肝处移植物抗宿主病的病理反应,NK细胞活化受体NKp46表达强弱与aGVHD的发生相关,NKp46表达强度可能为aGVHD诊断提供依据。