穿膜肽-凋亡蛋白融合蛋白导入人脐静脉内皮细胞和人肺腺癌Anip973细胞的生物学特性

目的：在大肠杆菌内表达穿膜肽与凋亡蛋白的融合蛋白，观察其诱导肺腺癌Anip973细胞凋亡的活性，并了解其是否有剂量依赖性。 方法：实验于2005-08／2006-01在哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室完成。①在大肠杆菌中表达穿膜肽-凋亡蛋白并用IDA-Ni^2＋亲和层析纯化。②细胞增殖抑制实验：取对数生长期人脐静脉内皮细胞和Anip973细胞接种于96孔培养板中，培养12h后加入终浓度分别为0，10，20，30，40，50mg／L融合蛋白培养48h，弃上清，每孔中加入四甲基偶氮唑盐溶液（5g／L）20μL，继续孵育4h，检测吸光度，计算肿瘤生长抑制率。③取对数生长期人脐静脉内皮细胞、Anip973细胞，每种细胞分成两组：给药组加入终浓度为30mg／L穿膜肽-凋亡蛋白，对照组加入相同体积的磷酸盐缓冲液，继续培养48h。苏木精-伊红染色，光镜下观察细胞形态；溴乙啶／丫啶橙荧光染色观察细胞凋亡率。 结果：①细胞增殖抑制实验结果表明浓度为10～50mg／L穿膜肽-凋亡蛋白对人脐静脉内皮细胞没有明显抑制作用，对Anip973细胞呈剂量依赖性抑制作用，半数抑制浓度为27mg／L。②30mg／L穿膜肽-凋亡蛋白作用48h后，人脐静脉内皮细胞形态没有显著改变，对照组和给药组的凋亡率分别为（2．9&;#177;0．4）％和（3．1&;#177;0．6）％，没有显著差异（P〉0．05）；Anip973细胞可见到细胞皱缩，染色质浓缩和出现凋亡小体等凋亡特征性形态变化，给药组和对照组凋亡率分别为（36．8&;#177;1．7）％和（6．7&;#177;0．5）％，差异显著（P〈0．01）。 结论：穿膜肽-凋亡蛋白能诱导肿瘤细胞凋亡，这种作用呈剂量依赖性，而对正常细胞没有毒性作用。     

TAT-凋亡素基因重组质粒的构建、蛋白的表达纯化及体内活性实验

目的 克隆构建TAT-凋亡素质粒并提取融合蛋白，为进一步研究该蛋白功能奠定基础。方法 PCR合成TAT-凋亡素基因，与pTYB2质粒连接后转入Rosetta菌，经IPTG诱导表达，几丁质亲和层析一步纯化目的蛋白，用昆明小鼠H22动物模型检测活性。结果 克隆载体经过PCR筛选、测序鉴定，其大小和核苷酸序列正确，诱导后融合蛋白出现在上清，纯化出的TAT-凋亡素蛋白具有明显的抗肿瘤活性。结论 本实验所构建的重组质粒pTYB2/TAT-apoptin经诱导表达出了可溶性目的蛋白TAT-凋亡素，纯化后具有明显的生物活性，为研究TAT-凋亡素蛋白的进一步研究奠定了基础。     

大环内酯类抗生素研究进展

大环内酯类抗生素(macrolides)是一类化学结构和抗菌作用相近的抗菌药物。按其大环结构含碳母核的不同,分为14、15和16元环大环内酯类抗生素。50年代14元环的红霉素因对革兰阳性菌抗菌作用强,对治疗院外获得性呼吸道感染,皮肤软组织感染等具有良好疗效,而广泛用于临床。但其也有     

麦冬对D半乳糖衰老模型大鼠的抗衰老作用研究

本实验采用Ｄ半乳糖衰老模型,通过测定表年对照组,模型给药组大鼠脑组织ＳＯＤ,肝组织ＧＳＨ－Ｐｘ、肝组织ＭＤ含量,研究了补益中药麦冬的抗衰老作用。结果表明与青年对照组相比,Ｄ半乳糖模型组ＳＯＤ、ＧＳＨ－Ｐｘ活性显著降低,     

红外光谱结合化学计量学评价不同产地何首乌

目的建立快速评价不同产地何首乌的方法。方法运用化学计量预处理方法处理4个产地何首乌样品的红外光谱,分析各产地样本的平均光谱,建立主成分分析鉴别和SIMCA预测模型。结果 ①何首乌含有蒽醌类、二苯乙烯类、磷脂类、多糖和苷类等化学成分。②主成分分析模型能基本鉴别不同产地何首乌。③不同产地何首乌的差异主要体现在芳香族化合物、草酸钙、磷脂、糖蛋白、多糖和苷类共6种化学成分上。④SIMCA模型预测未知样品的准确率达到100%。结论 红外光谱结合化学计量学是一种快速、无损地评价何首乌的有效方法。     

穿膜肽-凋亡蛋白融合蛋白导入人脐静脉内皮细胞和人肺腺癌Anip973细胞的生物学特性

目的:在大肠杆菌内表达穿膜肽与凋亡蛋白的融合蛋白,观察其诱导肺腺癌Anip973细胞凋亡的活性,并了解其是否有剂量依赖性。方法:实验于2005-08/2006-01在哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室完成。①在大肠杆菌中表达穿膜肽-凋亡蛋白并用IDA-Ni2 亲和层析纯化。②细胞增殖抑制实验:取对数生长期人脐静脉内皮细胞和Anip973细胞接种于96孔培养板中,培养12h后加入终浓度分别为0,10,20,30,40,50mg/L融合蛋白培养48h,弃上清,每孔中加入四甲基偶氮唑盐溶液穴5g/L雪20μL,继续孵育4h,检测吸光度,计算肿瘤生长抑制率。③取对数生长期人脐静脉内皮细胞、Anip973细胞,每种细胞分成两组:给药组加入终浓度为30mg/L穿膜肽-凋亡蛋白,对照组加入相同体积的磷酸盐缓冲液,继续培养48h。苏木精-伊红染色,光镜下观察细胞形态;溴乙啶/丫啶橙荧光染色观察细胞凋亡率。结果:①细胞增殖抑制实验结果表明浓度为10～50mg/L穿膜肽-凋亡蛋白对人脐静脉内皮细胞没有明显抑制作用,对Anip973细胞呈剂量依赖性抑制作用,半数抑制浓度为27mg/L。②30mg/L穿膜肽-凋亡蛋白作用48h后,人脐静脉内皮细胞形态没有显著改变,对照组和给药组的凋亡率分别为穴2.9±0.4雪%和穴3.1±0.6雪%,没有显著差异(P>0.05);Anip973细胞可见到细胞皱缩,染色质浓缩和出现凋亡小体等凋亡特征性形态变化,给药组和对照组凋亡率分别为穴36.8±1.7雪%和穴6.7±0.5雪%,差异显著(P<0.01)。结论:穿膜肽-凋亡蛋白能诱导肿瘤细胞凋亡,这种作用呈剂量依赖性,而对正常细胞没有毒性作用。     

中药知母对小鼠免疫功能的影响

目的：研究中药知母中知母宁的滋阴和调节免疫作用。方法：制备小鼠阴虚模型，观察知母宁对cAMP系统的影响；制备小鼠免疫功能低下模型，观察小鼠对血清溶血素、迟发性变态反应和腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。结果：知母宁可使小鼠体重明显增加，血浆cAMP含量和cAMP/cGMP值明显降低；知母宁能明显提高小鼠血清溶血素水平，增强小鼠迟发性变态反应，而对腹腔巨噬细胞吞噬指数和吞噬系数无明显影响。结论：知母宁具有滋阴作用，增强体液免疫和细胞免疫功能，对非特异性免疫无明显作用。     

蛋白质转导技术及其应用

蛋白质转导结构域(protein transduction domain,PTD)是指一类能将其他生物大分子导入多种哺乳动物细胞的小分子阳离子多肽,它可以用于研究细胞内某些蛋白质的功能,还可以与具有治疗作用的蛋白质、多肽等生物大分子偶联,在缺血、肿瘤等多种疾病的治疗中有潜在的应用价值。