M/XDR-TB的快速分子检测和耐药特征分析

目的 使用分子线性探针杂交技术结合仪器法液体快速培养分析耐多药( multidrug resistant,MDR)及广泛耐药(extensively drug resistant,XDR)结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的耐药基因和表型特征.方法 运用GenoType MTBDR试剂盒检测M/XDR-TB菌株中各耐药基因的突变位点及类型,平行用BD MGIT960系统检测所选菌株对一线及二线抗结核药物的敏感性.结果 (1)94株MDR-TB经MGIT960检测,乙胺丁醇(ethambutol,EMB)、阿米卡星(amikacin,AMK)、氧氟沙星(ofloxacin,OFX)及莫西沙星(moxifloxacin,MFX)的耐药率分别为36.2%、17.0%、54.3%和55.3%.XDR-TB检出率为13.8%.(2)以MGIT960药敏结果作为参考标准,94株MDR-TB中,GenoType MTBDRplus检测MTB对异烟肼(isoniazid,INH)、利福平(rifampin,RFP)耐药的符合率分别为86.2%和95.7%;GenoType MTBDRsl检测MTB对EMB、AMK、OFX及MFX耐药的敏感性分别为47.1%、81.3%、94.1%、94.2%;特异性分别为75.0%、98.7%、90.7%、92.9%.(3)rpoB基因突变中以S531L最多;INH耐药主要由katG基因发生突变导致,以S315T1类型居多;gyrA突变位点主要集中在第94位密码子.所测菌株中有23例为复合耐药,7例为未知突变.结论 M/XDR-TB中,INH、RFP、AMK、OFX及MFX耐药株大多分别是由katG、rpoB、rrs及gyrA突变导致,乙胺丁醇与embB之间的耐药关联性相对较低.GenoType MTBDR试剂盒检测M/XDR-TB敏感性和特异性较好,可以在未获得传统细菌表型药敏结果前指导临床用药治疗.     

以共济失调为首发症状的Miller-Fisher综合征一例并文献复习

1932年,Colher首先报道了眼外肌麻痹、腱反射消失和共济失调形成的三联征,并认为其是吉兰一巴雷综合征(Guillain-Barre综合征,GBS)的一种变异型;1956年,Miller-Fisher再次报道了3例类似的病例,此后的文献中将此三联征定义为Miller Fisher Syndrome (MFS).目前,大多数学者认为MFS为急性炎性脱髓鞘性多发性神经根神经炎(GBS)的变异型类型或特殊类型,临床诊疗工作中较为少见.2017年1月我科收治1例以共济失调为首发症状的MFS患者,现对其临床资料进行回顾性分析并结合文献复习,以提高对本病的认识和诊治水平.     

超声引导下穿刺活检对肺外结核的诊断价值

 目的 探讨如何提高超声引导下穿刺活检对肺外结核（extrapulmonary tuberculosis,EPTB）的诊断价值。方法 对152例临床疑诊结核或诊断不明病灶的患者进行超声引导下穿刺活检,综合分析组织切片加特殊染色（病理组）、基因X-Pert MTB/RIF检测（基因组）、结核菌培养（菌培组）及涂片这4种方法的诊断效能。结果 明确诊断结核108例,临床最终诊断结核112例。4种检查方法检测结核的阳性率（检出率）分别为：病理组诊断率70.4%（88/125）,可疑诊断率5.6%（7/125）;基因组71.2%（74/104）;菌培组43.7%（45/103）;涂片组46.4%（52/112）。联合诊断检出率达96.4%（108/112）。本组无假阳性。结论 超声引导下穿刺活检对EPTB的诊断安全、简便、有效,联合基因及相关实验室检查能提高诊断率,病理及基因X-Pert MTB/RIF检测的诊断效能明显高于菌培及涂片。     

结核性胸膜炎患者胸腔积液分枝杆菌检测结果分析

目的 :通过分析结核性胸膜炎患者胸腔积液分枝杆菌检测结果,探讨提高其阳性检出率的方法。方法 :采集267例临床诊断为结核性胸膜炎患者的胸腔积液,离心后弃上清,用氢氧化钠(Na OH)消化处理,磷酸盐缓冲液(PBS)中和离心,取沉淀涂片抗酸染色镜检,接种MGIT960系统培养管和罗氏培养基,分析培养和涂片镜检结果 ,采用χ~2检验比较抗酸杆菌涂片与分枝杆菌培养阳性率的差异,BACTEC MGIT 960系统与罗氏培养阳性率的差异。结果:267例结核性胸膜炎患者胸腔积液经消化处理后,抗酸杆菌涂片阳性者81例,阳性率为30.6%,涂片1~8条/300个视野至1+以下者占涂片阳性的97.5%。罗氏培养233例,培养阳性39例,阳性率为16.7%,培养1+以下者为97.4%。MGIT960系统培养221例,培养阳性72例,阳性率为32.6%。消化后涂片法阳性率高于罗氏培养法(χ~2=7.92,P0.05)。结论:结核性胸膜炎患者胸腔积液中抗酸杆菌菌量少。胸腔积液经消化集菌可显著提高抗酸杆菌涂片阳性率。相比罗氏培养,MGIT 960系统能显著提高分枝杆菌培养的阳性率。     

人类免疫缺陷病毒/结核分枝杆菌双重感染者结核分枝杆菌分离株一线药物耐药特征

目的分析人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者的结核分枝杆菌(MTB)分离株对一线抗结核分枝杆菌药物的耐药特征,为临床治疗HIV/MTB双重感染提供参考依据。 方法选取上海市公共卫生临床中心2012年1月至2016年12月收治的HIV合并MTB感染者154例(实验组)和单纯结核分枝杆菌感染者357例(对照组),进行异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、链霉素(STR)4种一线药物耐药性检测,比较两组患者MTB的总耐药率和总耐多药率,初始及获得性耐药、耐多药率。 结果HIV/MTB双重感染组患者总耐药率(44.2%,68/154)、初始耐药率(42.2%,19/45)、初始耐多药率(13.3%,6/45)、STR总耐药率(31.8%,49/154)和初始耐药率(28.9%,13/45)显著高于单纯结核分枝杆菌感染组(33.9%、25.0%、3.8%、22.7%、11.4%)(P均<0.05)。INH、RFP、EMB耐药率与单纯结核分枝杆菌感染组差异无统计学意义(P均> 0.05)。单纯结核分枝杆菌感染组患者获得性耐药率(39.1%,88/225)和获得性耐多药率(19.1%,43/225)分别高于初始耐药率(25.0%,33/132)和初始耐多药率(3.8%,5/132)(χ²= 16.785、P < 0.001;χ²= 7.393、P = 0.004)。 结论HIV/MTB感染者分离的MTB对一线抗结核分枝杆菌药物耐药率和耐多药率高,其中STR耐药最为严重,提示临床治疗应重视HIV/MTB双重感染者的结核耐药问题,及时采取预防措施和制定个体化治疗方案。     

原发性鼻结核一例并文献复习

患者女，59岁。因鼻塞、流涕、鼻咽部异物感10年余于2009年1月12日在我院就诊。患者10年来反复鼻塞、流涕，鼻咽部异物感，偶有涕中带血丝及血块，辗转就诊于多家医院诊治，并多次行纤维鼻咽喉镜检查，均提示鼻咽部粘连、鼻中隔偏曲，诊断为“慢性鼻炎”、“慢性鼻窦炎”，     

福氏志贺菌感染豚鼠和HeLa细胞的毒力

目的 研究福氏志贺菌感染豚鼠和HeLa细胞后细菌致病能力的差异，探讨痢疾的防治。方法 选用28株福氏志贺菌感染豚鼠眼角膜，观察角膜结膜病变反应，并进行细胞学、细菌学、病理组织切片检查。然后再选出12株福氏志贺菌强毒株和两株弱毒株，通过噬斑形成实验，观察对HeLa细胞的侵袭能力。结果 28株福氏志贺菌均在3d之内引起豚鼠发病，但症状表现有差异，除2株福氏志贺菌感染豚鼠后发病时间延长、症状轻微外。其余菌株则引起较为严重的角膜结膜炎，尤其在感染第3天，出现最为典型的临床表现。噬斑形成试验结果与豚鼠感染试验基本相符。结论 检测福氏志贺菌的毒力可用HeLa细胞噬斑形成试验替代Sereny试验。利用Sereny试验和HeLa细胞噬斑形成试验鉴定出26株福氏志贺菌的强毒株和2株弱毒株，用于毒力基因的进一步分析。     

Chelex-100法和碱性裂解法提取细菌DNA的比较

目的:通过对两种DNA提取方法的比较,寻找一种灵敏、快速、经济实用的提取方法.方法:采用Chelex-10{3法和碱性裂解法分别提取不同浓度大肠杆菌ATCC25922和金黄色葡萄球菌ATCC25923的DNA,利用通用引物扩增16SrDNA片段检测两种方法的灵敏度.结果:碱性裂解法提取的不同浓度的两种细菌DNA,经PCR扩增均未显出目的条带;chelex-100法提取不同浓度的两种细菌DNA均扩增出目的条带,PCR检测大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌的灵敏度均为1.2×101cfu/ml,电泳结果提示相同浓度的大肠杆菌被提取到的DNA含量比金黄色葡萄球菌的含量高.结论:Chelex-100法操作简便,可用于细菌DNA的快速提取.     

快速离心沉淀集菌涂片法与罗氏培养法检测痰内结核杆菌

直接镜检抗酸杆菌阳性可作为结核病的确诊方法之一,但痰直接涂片敏感性低,已知离心沉淀集菌涂片法可提高痰液抗酸杆菌的检出率。本研究采用快速离心沉淀集菌涂片法检测痰液抗酸杆菌,同时以罗氏培养法为对照,其结果便于其他实验室借鉴与改进。     

HIV患者分枝杆菌感染的快速鉴定和药敏分析

目的 建立HIV患者分枝杆菌感染的快速病原鉴定和药敏分析方法 .方法 运用Geneprobe探针杂交和16S rDNA序列分析技术鉴定分枝杆菌菌种,运用改良MODS方法 检测分枝杆菌对一线抗结核药物的敏感性,并与传统的抗酸染色、L-J培养及比例法药物敏感试验比较.结果 (1)来自68名HIV感染者的112份标本经液体培养后Geneprobe和16S rDNA序列分析显示分离的34株分枝杆菌中结核分枝杆菌复合群21例,非结核分枝杆菌(NTM)10例,结核与非结核分枝杆菌混合感染3例.10例非结核分枝杆菌中鸟胞内分枝杆菌复合体(M.avium complex)5例、戈登分枝杆菌(M.gordonae)2例、堪萨斯分枝杆菌(M.kansasii)2例和1例M.colombiense.(2)改良MODS方法 检测21株结核分枝杆菌对利福平和乙胺丁醇的敏感性为100%,对异烟肼的敏感性为76.2%,链霉素敏感性为90.5%;但10株NTM对利福平的敏感性为40%,乙胺丁醇、链霉素敏感性分别为60%、30%,异烟肼全部耐药.改良MODS方法 与比例法药敏试验结果 无显著差异.(3)传统分枝杆菌菌型鉴定和药敏试验需6～8周,本研究采用液体培养结合Geneprobe鉴定需5～14 d,16S rDNA序列分析需6～15 d,改良MODS试验需10～14 d,显著缩短了检验周期.结论 结合Geneprobe、16S rDNA序列分析和改良MODS技术,可在15 d之内对临床标本中分枝杆菌进行快速鉴定和药敏分析,可用于HIV合并分枝杆菌感染者的病原学特征和耐药状况分析.