酶双循环法测定血清中NOS的活性

一氧化氮合酶(NOS)催化精氨酸、NADPH H 和O2,生成胍氨酸、NADP 、NO。以往NOS活性测定的方法主要是测定胍氨酸和NO的含量,由于方法学的弊病使其应用范围受限。W ang[1]建立了生物组织中测定NOS的酶双循环方法,其放大倍数为1000~4000。目前尚未见用酶双循环法测定血清NOS活性的     

酶双循环法测定一氧化氮合酶活性实验条件探讨

目的运用Wang法与酶双循环法联合测定血清中一氧化氮合酶（NOS）活性。方法先改良Wang法测定NOS活性的实验条件，再探讨Wang法与酶双循环法偶联的实验条件，比较酶双循环前后检测物性质。结果总NOS（tNOS）测定试剂由20mmol／L L-精氨酸、25μmol／L还原型辅酶Ⅱ（NADPH＋H^＋）、50．0μmol／LCaCl2、45．0μmol／L二硫苏糖醇（DTT）、36．0μmol／L乙二胺四乙酸（EDTA）、1．8μmol／L苯甲磺酰氯（PMSF）、80μmol／L尼克酰胺、1μg／ml钙调蛋白（CalM）和10μg/ml蛋白酶抑制剂Antipain组成。以上试剂添加诱导性NOS（iNOS）抑制剂N^W-硝基-D-精氨酸用于测定结构型NOS（cNOS）。对NOS生成的氧化型辅酶Ⅱ（NADP^＋）采用酶双循环产物6-磷酸葡萄糖酸（6PG）脱氢生成的大量NADPH＋H^＋，其放大倍数约为70～80倍。结论酶双循环法提高了测定NOS的灵敏度。     

丙氨酸氨基转移酶质控物的研制及应用价值

目的　制备丙氨酸氨基转移酶 (ALT)质控物 ,评价其性能和应用前景。方法　大鼠肝组织经抽提、离心、热处理、(NH4) 2 SO4沉淀 ,透析处理制成 ALT质控材料 ,以荧光动力学法测定其活性。结果　每克组织制备的 ALT活性为 2～ 3.5单位 ,质控物参考定值为 (5 0 .4± 2 .0 7) U/L。精密度 :最佳条件的变异(OCV)为 4.7% ,常规条件的变异 (RCV)为 6.8%。- 2 0℃保存一年 ,ALT活性基本无变化。结论　AL T质控物稳定可靠 (一年 ) ,能用于临床室内质量控制 (IQC)。     

ACTH对组织浸液活性的反馈作用

按不同实验条件制备五组供样动物组织浸液,用放免法测定其受试组血浆皮质酮含量,观察各供样组组织浸液活性。结果提示:①组织浸液活性于注射后半小时达最高峰,至少可维持2小时;②无论在正常条件下或在付肾切除条件下,注射ACTH均可抑制组织浸液活性。推测组织浸液活性因子可能是一种天然存在的生理性物质。     

上生所质控血清中尿素氮标示值的探讨

卫生部上海生物制品研究所 (本文简称上生所 )制备的冻干质控血清作为质控材料已在全国广泛使用。其中的尿素 ( Urea)含量以尿素氮 ( UN) mmol/ L、mg/ dl标示 ,但两者之间的关系令人不解。本文按照上生所 UNmg/ dl标示值自配 Urea标准液 ,采用凯氏定氮法测定标准液中的 UNmmol/ L;再以 Urea标准液为标准用脲酶法测定上生所质控血清中的 UNmg/dl。比较 UNmmol/ L与 mg/ dl之间的关系 ,并根据理论推导 ,得到了 A( UNmg/ dl)、B( UNmmol/ L)、C( Urea mg/dl)、D( Urea mmol/ L)之间的新旧制单位换算关系。1　材料和方法1 .1　材料…     

鼻粘膜损伤对风疹病毒再感染的影响

目的研究鼻粘膜损伤对风疹病毒再感染的影响。方法把风疹病毒IgG抗体阳性的144只豚鼠分为A、B、C、D 4组，A组仅破坏鼻粘膜上纤毛和纤毛细胞及少部分粘液毡，B组则进而破坏1／3的鼻粘膜，c组则进而破坏1／2的鼻粘膜，D组为对照组。再把A、B、C、D组又各分为3亚组，分别用4．5×10^2、4．5×10^3、4．5×10^4 IU／mL的风疹病毒悬液进行鼻腔内感染，7～10天后各组豚鼠断头采血测风疹病毒以及CD4^＋、CD8^＋细胞以及CD4^＋／CD8^＋比值，风疹病毒IgM抗体阳性者定量测血清风疹病毒RNA含量；同时取鼻粘膜，观察纤毛及纤毛细胞的情况，以及对鼻粘膜进行免疫组化和HE染色，计数粘膜中CD4^＋／CD8^＋细胞以及CD4^＋／CD8^＋比值。结果同种浓度的病毒悬液感染的各组中风疹病毒IgM抗体阳性率以及血液中风疹病毒RNA含量随鼻粘膜损伤程度加大而升高，鼻粘膜损伤各组中血液及鼻粘膜组织中CD4^＋／CD8^＋细胞以及CD4^＋／CD8^＋比值明显低于非损伤组，且随鼻粘膜损伤程度加大而降低。结论鼻粘膜损伤易于风疹病毒的生长增殖和再感染发生，从而增大了病毒的再感染率，因此及时治疗修复患者损伤的鼻粘膜可降低风疹病毒的再次感染机会。     

1,5-脱水葡萄糖醇的测定与应用

1 ,5 脱水葡萄糖醇 (1,5 ａｎｈｙｄｒｏｇｌｕｃｉｔｏｌ,1,5 ＡＧ) ,又叫 2 脱氧葡萄糖 ,1,5 脱水山梨醇。 1975年Ｓｅｒｖｏ〔1〕在脑脊液及血清中观察 1,5 ＡＧ与糖尿病之间具有相关性。 1994年Ｆｕｋｕｍｕｒａ等〔2〕介绍全酶法测定体液中 1,5 ＡＧ含量。本研究探讨在临床常规中开展全酶法的实验条件 ,观察糖尿病患者和糖尿病动物模型血清中 1,5 ＡＧ与葡萄糖水平变化之间的相关性。一、材料和方法1.材料 :葡萄糖激酶 (ＧＫ) ,己糖激酶 (ＨＫ) ,丙酮酸激酶(ＰＫ) ,维生素Ｃ氧化酶 ,磷酸烯醇式丙酮酸 (ＰＥＰ) ,1,5 ＡＧ均购…     

加强医学检验人员敬业精神教育的思考

从职业道德的含义即从业人员与职业、职工与服务对象，职业与职业之间的关系，阐述了必须把握好三个方面的问题，充分认识医学检验专业工作的重要性；以病人为中心，开展循证检验医学研究；加强岗位责任，为临床科室提供正确的导向，由此才能敬业乐业，培养医学检验专业良好的敬业精神。     

酶双循环法测定一氧化氮合酶活性实验条件探讨

目的运用W ang法与酶双循环法联合测定血清中一氧化氮合酶(NOS)活性。方法先改良W ang法测定NOS活性的实验条件,再探讨W ang法与酶双循环法偶联的实验条件,比较酶双循环前后检测物性质。结果总NOS(tNOS)测定试剂由20 mmol/L L-精氨酸、25μmol/L还原型辅酶Ⅱ(NADPH H )、50.0μmol/LCaC l2、45.0μmol/L二硫苏糖醇(DTT)、36.0μmol/L乙二胺四乙酸(EDTA)、1.8μmol/L苯甲磺酰氯(PMSF)、80μmol/L尼克酰胺、1μg/m l钙调蛋白(CalM)和10μg/m l蛋白酶抑制剂Antipain组成。以上试剂添加诱导性NOS(iNOS)抑制剂NW-硝基-D-精氨酸用于测定结构型NOS(cNOS)。对NOS生成的氧化型辅酶Ⅱ(NADP )采用酶双循环产物6-磷酸葡萄糖酸(6PG)脱氢生成的大量NADPH H ,其放大倍数约为70~80倍。结论酶双循环法提高了测定NOS的灵敏度。     

酶循环法检测及其进展

1961年Lowry OH等应用两种工具酶建立循环酶测定方法。即6-磷酸葡萄糖脱氢酶、谷氨酸脱氢酶的催化特性及酶偶联反应的原理，使反应体系中NADP^ ←→NADPH循环变化，对循环中生成大量的6-磷酸葡萄糖酸，用指示酶6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶催化，检测终产物NADPH，从而提高检出能力。ChiMMY等改进Lowry OH酶循环法，即酶双循环法。其操作方法包括待测样品酶循环、工具酶灭活、加入指示酶双循环及对终产物检测。本文对酶循环动力学研究、临床生化检验及环境监测中的应用作一介绍。