53例细菌性痢疾局部爆发流行的病原菌分离及药敏分析

1994年我院曾于两天内收治100多名幼儿园内中毒性腹泻的患儿，根据临床症状，我们对这些患儿全部进行大便培养，其中有53名患儿检出福氏Ⅱa型志贺氏菌，并做了药敏试验，现报告如下。1资料与方法1．1一般资料；患儿年龄2～6岁，初入院时以发热为主，消化道症状不明显。80％患儿有高热症状，20％有低热，10％有呕吐腹泻，部分患儿有早期休克症状。腹泻有脓血便和水样便两种。经24小时治疗后，大部分患儿热退，但呕吐腹泻病人剧增，80％患儿出现腹泻，并有33例患儿出现心肌损害。1．2细菌学鉴定及药敏试验1．2．正材料和方法：盐水肛管采集大…     

MALDI-TOF MS在儿童血培养阳性病原菌快速鉴定中的应用

目的建立快速、准确的儿童血培养阳性病原菌鉴定方法,缩短血流感染鉴定时间,评估临床试验可行性。方法运用分离胶法提取阳性血培养瓶中富集的菌落,利用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析(MALDI-TOF MS)对经过一系列前处理后的血培养阳性标本进行鉴定,并与病原菌纯培养鉴定后的结果对比,比较MALDI-TOF MS快速鉴定方法的符合率。结果100例血培养阳性样本中,除3例假阳性标本及3例混合感染标本外,以快速鉴定修正后的评分标准,MALDI-TOF MS快速鉴定方法与病原菌纯培养鉴定方法符合率达89.0%(81/91)。革兰阳性球菌、革兰阴性杆菌鉴定符合率分别为96.2%(50/52)、92.6%(25/27);而真菌的符合率不够理想,7株真菌中仅3株鉴定相符、符合率为42.9%。结论儿童血培养阳性标本的MALDI-TOF MS快速鉴定方法,对血流感染中致病菌的鉴定准确率高、耗时短,具有临床应用可行性,可满足临床早期、快速诊断血流感染致病菌的需求,但是对于真菌样本的前处理方法有待提高。     

嗜麦芽窄食单胞菌Smqnr耐药基因的序列分析及原核表达

目的:对嗜麦芽窄食单胞菌临床分离株gzch770(SMgzch770)携带的喹诺酮耐药基因Smqnr进行扩增、测序及原核表达,为研究Smqnr蛋白的功能奠定基础。方法:提取SMgzch770基因组染色体,PCR扩增Smqnr全基因并克隆入pMD18-T载体进行核苷酸序列分析;将Smqnr基因克隆至表达载体pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21,SDS-PAGE分析融合蛋白表达情况。结果:以染色体DNA为模板,成功扩增660bpSmqnr基因;序列比对分析显示其与相关报道序列核苷酸和氨基酸一致性达98%以上;SMgzch770Smqnr序列已登录GenBank(登录号:HQ315851);SDS-PAGE显示,融合基因表达的蛋白约为50kDa,其中Smqnr蛋白约为24kDa。结论:从SMgzch770中成功克隆及表达了Smqnr基因,为进一步进行Smqnr蛋白高级结构测定的结晶试验提供了必须材料。     

婴儿感染B族链球菌的喹诺酮耐药突变调查

目的 调查B族链球菌(GBS)的喹诺酮耐药情况,探讨耐药株的突变位点与血清学分型之间的关系.方法 选取从2014年1月至2019年12月于该中心确诊为GBS感染的婴儿临床标本中分离出的非重复菌株共120株作为研究对象.对纳入研究的GBS进行药敏试验.PCR扩增喹诺酮耐药菌株的喹诺酮耐药决定区(QRDR)靶基因GyrA和ParC,乳胶凝集法检测上述菌株的血清学分型,分析不同位点突变与血清学分型之间的关系.结果 2014-2019年共收集来自婴儿的GBS临床分离株120株,其中喹诺酮耐药株14株,喹诺酮耐药率为11.7％.将喹诺酮耐药株中的11株用于后续实验,这些耐药株100％存在GyrA的碱基突变,表现为81位丝氨酸变为亮氨酸,219位丙氨酸变为脯氨酸或缬氨酸.仅1株同时出现ParC和GyrA的有义突变.共检测出2种血清学分型,分别为Ⅲ型(90.9％)和Ⅰb型(9.1％).结论 2014-2019年,该中心喹诺酮耐药GBS临床分离株以GyrA基因耐药突变为主,表现为81位和(或)219位的氨基酸改变,血清学分型以Ⅲ型为主.     

孕晚期女性血浆D-二聚体参考区间的建立

目的建立孕晚期女性血浆D-二聚体水平参考区间。方法选取2018年1月至2019年5月广州医科大学附属广州市妇女儿童医疗中心健康孕晚期女性(35～37孕周)408例纳入孕晚期组,同期在体检中心检查的387例健康非孕期女性纳入对照组,两组均按年龄分为18～30、30～35、35～40、40～≤45岁共4个年龄段。采用全自动血凝仪检测其血浆D-二聚体水平,计算第95百分位数值(P95)以建立其单侧参考区间。结果孕晚期各年龄段组血浆D-二聚体水平均显著高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。孕晚期组各年龄段血浆D-二聚体水平差异无统计学意义(P0.05)。孕晚期女性血浆D-二聚体参考区间为≤3.42mg/L。结论初步建立了适用于该实验室的孕晚期女性血浆D-二聚体参考区间,对于孕晚期女性相关疾病确诊和排除诊断具有一定的临床意义。     

枯草杆菌芽孢抵抗胃肠道环境的耐性评估

目的 对益生菌一枯草杆菌芽孢进行耐性评估,为研制口服枯草杆菌芽孢载体疫苗奠定基础.方法 采用耗竭法,DSM培养基长时间振荡培养(24 h)获得芽孢,使用pH 2.0盐酸胃蛋白酶液模拟胃液,胆酸盐、胰液素混合液模拟肠液,对枯草杆菌芽孢进行体外耐受实验.结果 在DSM培养基中,80%～90%的枯草杆菌WB600可形成芽孢,每升DSM液所生成芽孢约1×1011.在模拟胃液中1 h后,仅0.0024%枯草杆菌WB600繁殖体细菌仍成活,大肠杆菌JM109活力完全丧失,而枯草杆菌芽孢基本不受影响,93.3%仍成活.在模拟小肠环境中3 h后,枯草杆菌WB600繁殖体细菌活力显著降低(仅0.0013%存活),枯草杆菌芽孢基本不受影响(92%仍存活),而大肠杆菌JM109有一定量的增殖.结论 枯草杆菌芽孢能耐受模拟胃肠道环境,有望成为新型的口服疫苗载体.     

广州地区儿童感染A群链球菌87株的emm基因分型

目的了解广州地区儿童感染A群链球菌(GAS)emm基因型的分布状况。方法收集本院门诊和住院的呼吸道感染、皮肤化脓感染、猩红热患儿咽拭子和皮肤感染伤口分泌物进行培养,并采用PCR法扩增GAS的M蛋白N末端,进行测序,确定GAS的emm基因分型。结果共分离鉴定出GAS87株,GAS感染引起的咽炎、扁桃体炎、脓皮病在婴幼儿和学龄前儿童中发病率较高;87株GAS的emm基因型以emm1(37.9%)、emm18(13.8%)、emm12(11.5%)多见。结论3岁以下婴幼儿和学龄前儿童感染GAS发病率无年龄差异,87株广州地区儿童感染GAS的emm基因型主要为emm1、emm18,选择主要流行菌株,可以作为本地合适的基因疫苗的基础。     

儿童外阴炎、阴道炎病原菌探讨及耐药性分析

目的：了解儿童外阴炎、阴道炎的病原菌分布及耐药性。方法：取我院2001～2002年门诊及住院外阴炎、阴道炎患儿外阴分泌物标本424份进行细菌培养。K-B法做药敏试验，对各种细菌的分布特征及耐药性进行分析。结果：检出阳性标本252份(59．4％)，共16种细菌，其中金黄色葡萄球菌18株(7．1％)，表皮葡萄球菌60株(23．8％)，大肠杆菌44株(17．4％)，流感嗜血杆菌38株(15．2％)，奇异变形杆菌21株(8．3％)，粪肠球菌19株(7．5％)，肺炎克雷伯氏菌13株(5．2％)，无乳链球菌5株(2．0％)，B群链球菌3株(1．2％)，产气肠杆菌3株(1．2％)，洋葱伯克霍氏菌5株(2．0％)，弗劳地枸橼酸杆菌3株(1．2％)，肺炎链球菌4株(1．6％)，真菌12株(4．8％)。除葡萄球菌对红霉素、青霉素、氨苄青霉素耐药率较高外，其他检出菌的耐药率都不高，耐甲氧西林葡萄球菌占38．5％，大肠杆菌产ESBL株仅占11．4％，肺炎克雷伯氏菌有1株产ESBL，无耐万古霉素肠球菌。结论：检出的细菌大多数为儿童阴道内具有的正常茵群，为条件致病菌，其耐药性均较低，治疗并不困难，应以预防为主，注意孩子的卫生习惯，尽量减少交叉感染的机会。     

健康儿童鼻咽部金黄色葡萄球菌带菌及耐药性分析

目的 为了解广州地区健康儿童鼻咽部金黄色葡萄球菌的带菌情况及耐药性.方法 用鼻咽拭子法采集1 052名3～5岁广州市幼儿园健康儿童鼻咽分泌物进行金黄色葡萄球菌分离培养,采用K-B法检测178株金黄色葡萄菌对替考拉宁、头孢西丁、阿米卡星、环丙沙星、头孢唑啉、氨苄/舒巴坦、青霉素、红霉素、克林霉素、庆大霉素、头孢他啶、四环素、复方新诺明等13种抗菌药物的耐药性;用E-Test法检测178株金黄色葡萄菌对万古酶素的耐药性.结果 健康儿童鼻咽部金黄色葡萄球菌带菌率为16.9%,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为0%,对万古霉素、替考拉宁、头孢西丁、氨苄/舒巴坦、阿米卡星、头孢唑啉和复方新诺明的耐药率均为0%,对青霉素、红霉素、克林霉素、头孢他啶、四环素、庆大霉素的耐药率分别为91.1%,74.3%,25.7%,25.7%,4.3%和2.9%.结论 健康儿童鼻咽部金黄色葡萄球菌带菌率不高,其中MRSA比例及对14种药物的耐药性明显低于上呼吸道感染患儿所带金黄色葡萄球菌.     

儿童患者嗜血杆菌的感染源分布与耐药性调查

嗜血杆菌(Haemophilus)可引起多种儿童感染性疾病,除常见的呼吸道感染外,还可引起阴道炎、中耳炎、脓肿及外科感染等.嗜血杆菌生长条件要求较高,需要X和/或V因子,而且临床标本通常含有大量杂菌,传统的巧克力培养基影响嗜血杆菌生长.我们在巧克力培养基中加入了杆菌肽,提高了嗜血杆菌的分离率.为了了解近年我院儿童患者嗜血杆菌的感染情况及其耐药性,我们对2004～2005年从各类临床标本中分离出来的嗜血杆菌进行分析,总结如下.