两株鼠抗人GL50单克隆抗体的制备及其生物学特性的初步研究

目的　研制鼠抗人GL5 0分子单克隆抗体并对其生物学特性进行初步研究。方法　以天然高表达人GL5 0分子的Daudi细胞为免疫原 ,人GL5 0 L92 9转基因细胞为目的单克隆抗体(McAb)的筛选细胞 ,采用B淋巴细胞杂交瘤技术 ,获得分泌特异性鼠抗人GL5 0分子McAb的杂交瘤细胞株 ;免疫荧光标记和流式细胞术分析McAb识别GL5 0的表达 ;Westernblot检测抗体对特异性细胞膜蛋白的识别 ;台盼蓝 (Trypanblue)染色细胞计数法和MTT法检测McAb对Daudi细胞体外生长的抑制作用 ;3 H TdR法检测抗体对GL5 0 L转基因细胞介导的活化T细胞体外增殖的效应。结果　成功制备 2株分泌特异性抗人GL5 0抗体的杂交瘤细胞株 12B11和 11C4 ;两者皆为IgG2a亚型 ;腹水效价皆在 1∶10 0 0以上 ;12B11、11C4特异性地识别GL5 0分子。 11C4McAb可以明显抑制Daudi细胞在体外的生长 ,并可抑制GL5 0 L转基因细胞介导的活化T淋巴细胞的体外增殖效应。结论　成功获得了 2株特异性鼠抗人GL5 0抗体 ,其中 11C4McAb具有诱导表达GL5 0分子的B淋巴瘤细胞Daudi的体外生长抑制作用 ;在T淋巴细胞体外增殖反应中发挥了重要的调节作用。     

辐照垫料的实验研究

目的对垫料的辐照灭菌剂量进行探索,并研究其是否影响实验动物的生长繁殖。方法以不同剂量辐照垫料后保存不同时间,分别测定细菌污染情况,另用辐照垫料进行小鼠的生长,繁殖试验。结果大于20 kGy的剂量均为有效灭菌剂量,同时经保存期研究表明25 kGy是较为可靠、经济的灭菌剂量。动物试验表明,使用辐照垫料的小鼠生长、繁殖性能的各项指标与使用高压蒸汽灭菌垫料无显著差异(P>0.05)。结论辐照垫料可达到灭菌效果,对小鼠的生长、繁殖没有不利影响。     

白杨刨花作为实验动物垫料的实验研究

比较白杨刨花与普通刨花的吸水性能,再通过动物实验,记录生长繁殖情况和有关指标,研究白杨刨花是否可作为实验动物垫料。结果表明,白杨刨花的吸水性能明显好于普通刨花,可较好的吸附动物的异味,实验组和对照组小鼠生长、繁殖性能指标间均无显著差异(P>0.05)。白杨刨花较普通刨花更适合于实验动物,安全、可靠、可大范围推广使用。     

人GL50转基因细胞的建立

ICOS/GL5 0是CD2 8/B7家族的一对新成员 ,GL5 0组成性表达在B细胞、巨噬细胞上。GL5 0 Ig能显著上调IL 4、IL 10、IFN γ等细胞因子的表达 ,但对IL 2的产生没有影响 ,ICOS/GL5 0主要在T细胞的效应阶段发挥重要的调节作用。为了进一步研究其功能 ,我们利用逆转录病毒载体系统有效介导了基因转移。将人扁桃体剪碎后获得细胞悬液 ,用Ficoll法分离外周血单个核细胞 ,用Trizol提取RNA。根据人GL5 0全长基因序列设计并合成相应引物 ,上游 5′ TAGAATTCATGCGGCTGGGCAGT ,下游 3′ CGGGATCCTCACGAGAGCAGAAGGA。…     

日本血吸虫感染可诱导共刺激分子（ICOS）转基因小鼠的免疫应答及其病理反应

目的 观察ICOS转基因小鼠感染日本血吸虫后的免疫应答及其免疫病理反应。 方法 收集ICOS转基因小鼠及对照组野生型小鼠分别感染30条日本血吸虫尾蚴后4～8周的血清及脾淋巴细胞培养上清，用ELISA双抗体夹心法检测血清抗体IgG、IgG1、IgG2a的水平和培养上清中的Th1细胞因子γ干扰素（IFN-γ），Th2细胞因子白细胞介素-4（IL-4）水平。取小鼠感染后6、8周肝脏，常规石蜡连续切片，HE染色，在光镜观察单个虫卵肉芽肿病变。 结果 转基因小鼠IFN-γ的表达水平无显著变化，而6、8周时转基因小鼠的IL?鄄4水平呈显著上调表达，分别为（20.8±1.6）pg/ml和（25.3±3.4）pg/ml（P<0.01）。转基因小鼠血清IgG、IgG1表达水平也均高于对照组。在转基因小鼠，反映Th1/Th2免疫平衡的Th2分化指数和IgG1/IgG2a比值也明显呈Th2优势应答，分别为2.20±0.68和5.59±0.31。感染6、8周转基因小鼠肝虫卵肉芽肿反应比对照组更为显著。转基因小鼠肝虫卵肉芽肿体积显著大于同期对照组的肉芽肿，增大率分别为24.48%和26.37%（P<0.01）。 结论 ICOS转基因小鼠感染日本血吸虫后表现出Th2优势应答的免疫学特征，表明ICOS在血吸虫病免疫病理中具有重要作用。     

人ICOS基因转染细胞对抗体产生的影响

利用RT-PCR方法从扁桃体中激活的T细胞,mRNA中扩增出ICOS cDNA,继而将ICOS基因插入到逆转录病毒载体pGEZ-Term中,用脂质体法将重组逆转录病毒载体与两个辅助病毒载体共同转染包装细胞293T,用含有完整病毒颗粒的293T细胞的培养上清转染L929细胞,经Zeocin筛选获得稳定表达ICOS蛋白的L929细胞株;经RT-PCR、流式细胞仪表型检测证实L929基因转染细胞能稳定表达人ICOS蛋白。利用ICOS和CD40L基因转染细胞联合IL-10以及PWM驱动的B细胞体外培养系统,分析了ICOS在B细胞生长及抗体产生中的作用,实验结果表明,ICOS在PWM体外培养体系中,能有效地促进B细胞生长以及协同IL-10增加IgG的分泌。     

"采和Ⅰ号"、"采和Ⅱ号"治疗冻伤的实验和临床观察

目的：验证“采和Ⅰ号”、“采和Ⅱ号”治疗冻伤的效果。方法：以免为动物模型,-196℃2．5s致Ⅱ度冻伤后进行动物治疗试验。另对冻疮患者的201个冻疮面作治疗效果观察。结果：冻伤动物模型实验结果表明．经过用药4d,疮面可以痊愈,与对照组比较有明显差异。临床观察表明,其止痒、消肿作用明显,“采和Ⅰ号”、“采和Ⅱ号”治愈冻疮的平均时间为4．70d和3．04d．即使冻疮发生溃烂,也能在7～13d内治愈。结论：经过动物实验和临床观察,“采和Ⅰ号”、“采和Ⅱ号”确是治疗冻伤的较好药物。     

ICOS/GL50信号在T细胞依赖性体液免疫应答中的作用

研究ICOS/GL5 0信号在T细胞体外增殖、细胞因子分泌以及B细胞抗体分泌中的作用 ,进一步探讨该信号途径在机体体液免疫应答中的作用机制。采用3 H TdR检测GL5 0 L92 9转染细胞和特异性鼠抗人GL5 0单抗对T细胞体外增殖的作用 ;ELISA法检测GL5 0 L92 9转染细胞和抗人GL5 0单抗对T细胞分泌IL 2、IL 10以及ICOS L92 9转染细胞和特异性鼠抗人GL5 0单抗对PWM介导的B细胞分泌抗体的效应。结果提示GL5 0 L92 9转染细胞能够促进经抗CD3单抗活化的T细胞增值和分泌IL 10 ,而抗GL5 0单抗可以阻断这些效应。ICOS分子与B细胞上GL5 0分子的结合上调PWM介导的B细胞分泌抗体而抗GL5 0单抗则下调这一效应。这些表明 ,ICOS/GL5 0信号途径在机体T细胞依赖的体液免疫应答反应中发挥着重要的调节作用     

人可溶性4-1BBL在毕氏酵母中的表达及其协同刺激效应的研究

目的：通过甲醇营养型毕氏酵母蛋白质表达系统，表达出具有生物活性的人可溶性4－1BBL重组蛋白。方法：PCR方法从XG－4－1BBL转基因细胞中获得4－1BBL的胞外段基因；利用酵母表达载体pPICZαA构建重组质粒pPICZαA－s4-1BBL,经线性化后电转化导入毕氏酵母GS115中，甲醇诱导表达；SDS－PAGE蛋白电泳和Western blot分析发酵上清中hs4－1BBL蛋白表达水平及其特异性；体外T细胞增殖试验（^3H-TdR掺入法）观察rhs4－1BBL蛋白的生物学活性。结果：（1）成功地扩增到4－1BBL的胞外段基因，酶切鉴定及测序结果与已知的基因序列一致；（2）SDS－PAGE蛋白电泳和Western blot结果显示所获重组蛋白的分子量与预期分子量（21kD)相同，并可被4－1BBL特异性抗体识别；（3）重组蛋白在体外具有协同促进T细胞增殖的效应。结论：成功地在毕氏酵母表达系统中表达出具有生物学活性的人可溶性4－1BBL重组蛋白，为进一步研究其功能奠定了物质基础。