s、Fy~a、OK~a阴性稀有血型的多重PCR筛选技术应用

目的采用多重PCR筛选技术(PCR-ssp反应体系)同时扩增s、Fya、OKa阴性稀有血型。方法根据s、Fya、OKa血型基因核心序列设计相应引物,采用序列特异引物引导的PCR反应(PCR-SSP)体系对模版DNA进行扩增,对扩增产物进行电泳分析,根据扩增出目标片段图谱判断该稀有血型基因的存在与否,以此判断是否阴性稀有血型。结果随机抽取本站2010年6～8月参加献血的650名献血者进行筛选鉴定,未发现s、Fya、OKa阴性的稀有血型。结论该方法能在一个反应体系内同时扩增3个稀有血型,具有准确、高效的优点,可以用来进行献血人群s、Fya、OKa阴性稀有血型的筛选与建库工作。     

温度与时间对HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗梅毒抗体的影响

严格的血液检测是保证输血安全的重要手段，日常的检测工作中常会遇到阳性或可疑标本、质控品放置不同温度和时间时出现测定值明显差异现象，严重影响血液标本检测结果的正确性，导致室内质控图曲线的失控。为此，笔者对12份阳性标本、4份质控品分别在室温、2～6℃冰箱及-20℃冰箱中贮存，在不同时间用ELISA法分别进行HBsAg、抗HCV、抗HIV、抗梅毒抗体检测，结果如下。     

番禺地区RhD阴性献血者Del表型的基因分型研究

目的 研究分析番禺地区RhD阴性献血者Del表型的基因分型特征.方法 采用120孔微量板法对参加无偿献血的样本进行RhD阴性筛查;采用抗人球蛋白法进行确认,采用吸收放散实验进行Del表型筛选;采用RH基因变异体基因分型检测试剂盒(PCR-SSP法)对确认阴性样本进行RH DEL基因分型.结果 在26 172例献血者中筛选出60例RhD阴性,经确认59例为RhD阴性,阴性频率为0.23％;吸收放散实验检出10例Del表型;基因分型检测出10例RHD 1227A DEL基因型.结论 番禺地区RH DEL发生频率约为16.9％(10/59),以RHD 1227A DEL为主.吸收放散实验联合PCR-SSP法检测,能进一步提高RH DEL鉴定的准确性.     

新生儿血小板抗体阳性结果分析

目的 :探讨新生婴儿的血小板抗体阳性是否与临床患者有关系。方法 :用简易致敏红细胞血小板血清学检测技术(SEPSA)对 2 6 6例住院的年龄为 1- 2 0 d的新生儿进行了血小板抗体检测 ,并与同期的 2 782例围产孕妇血小板抗体检测结果进行了对比研究。结果 :显示患病新生儿的血小板抗体阳性率为 11.3% ,显著高于同期围产孕妇的阳性率 (2 .6 % ) ,进而推测高于正常新生儿。新生儿血小板抗体免疫球蛋白类型为 Ig G型。抗体阳性率分布为 :黄疸儿10 .3% ,感染等 16 .7% ,有出血症状的 30 % ,而早产儿是 5 .4 %。结论 :调查的新生婴儿血小板抗体的发生率高与患病有关系孕妇产期作血小板检测具有优生意义 ,能有效地帮助产前诊治 ,减少引发新生儿血小板减少性紫癜及新生儿患病率。     

核酸检测技术在献血者HBsAg筛查中的意义

目的:回顾性分析献血者HBsAg项目的筛查结果,探讨核酸检测技术(NAT)在献血者血液筛查中的应用价值。方法:采用两个厂家的酶联免疫吸附实验(ELISA)检测试剂盒对献血者开展HBsAg筛查;ELISA检测阴性的献血者标本,采用罗氏诊断cobass201系统进行HBV-DNA检测。结果:在14 642份经过两遍ELISA检测HBsAg阴性标本中,检出13份HBV-DNA阳性,阳性检出率约为0.089%。结论:在经过两次ELISA检测HBsAg阴性的献血者中,仍然存在一定比例的HBV-DNA阳性,给临床输血安全带来较大的风险;血站应用ELISA联合NAT的血液筛查策略,能有效降低临床输血传播HBV的风险。     

番禺地区无偿献血人群中Jk(a-b-)表型的筛选与研究

目的研究番禺地区献血人群中Jk(a-b-)表型的分布特点。方法用2mol/L尿素攻膜试验(96孔微量板法)筛选出阴性(不溶血)样本,然后作血清学表型鉴定,对Jk(a-b-)表型进行基因分型及基因组DNA编码区外显子4-11及其侧翼区的分段扩增和测序。结果从本站2004年6月-2006年8月献血的50034名汉族人中筛选出10例Jk(a-b-)表型,频率为0.02%;发现3种突变序列:1)Intron5:3'剪切位点AG>AA,Exon7:nt588A>G、AA196CCA(Pro)>CCG(Pro),推测基因型为JKb(△6)/JKb(△6);2)Exon5:nt222C>A、AA74AAC(Asn)>AAA(Lys),Exon7:nt536C>G、AA179CCT(Pro)>CGT(Arg),Exon7:nt588A>G、AA196CCA(Pro)>CCG(Pro),推测基因型为JKb(222A)/JKb(536G);3)Intron5:3'剪切位点AG>AA,Exon7:nt499A>G,AA167ATG(Met)>GTG(Val),Exon7:nt588A>G、AA196CCA(Pro)>CCG(Pro),推测基因型为JKb(△6)/JKb(499G)。结论在番禺地区献血人群Jk(a-b-)表型查中发现的Exon7:nt499A>G和Exon7:nt536C>G2种突变为首次报道。     

番禺地区A型人群中A2亚型的初探

目的 调查分析番禺地区A型人群中A2亚型的分布频率和基因分型的特征.方法 使用抗-A1试剂(植物凝集素),对经单克隆ABO正定型试剂确定为A型的样本进行96孔微量板法快速筛查;筛查阴性的样本采用人源抗-A1试剂进行试管法血清学鉴定;采用PCR-SSP法(A2基因分型检测试剂盒)对抗-A1阴性样本的基因组DNA进行扩增,对扩增产物进行电泳分析,根据电泳图谱判断A2基因分型.结果 在1 656例A型样本中筛查和鉴定检出5例抗-A1阴性,发生频率约为0.3％.基因分型:2例A201,2例A205,1例为不确定,需进一步测序分析.结论 本地区A型人群中A2亚型发生频率约为0.3％;A2亚型中存在A201和A205等基因型;使用血清学结合PCR-SSP方法能快速鉴定A2亚型.     

番禺地区RHD变异体基因分型研究

目的研究分析番禺地区RHD变异体基因分型特征。方法采用微量板法对2010年11月～2011年8月到本站参加献血的26 172名次献血者进行RhD阴性筛查;采用抗球蛋白法对初筛RhD阴性的标本进行确认,采用吸收放散试验对经抗球蛋白法确认为RhD阴性的标本进行Del表型筛选;采用RH基因变异体基因分型检测试剂盒(PCR-SSP法)对献血者模板DNA进行扩增,对扩增产物进行电泳分析,根据电泳图谱判断RHD基因分型。对血清学与基因分型结果不符的标本进行测序分析。结果初筛检出60名RhD阴性,经抗球蛋白法确认59例为RhD阴性,阴性频率为0.23%;吸收放散试验检出10例Del表型。60例初筛阴性的基因分型检测发现40例RHDEXON1～10全缺失基因型,发生频率约为67.8%;10例RHD 1227A DEL基因型,发生频率约为16.9%;7例部分D,发生频率约为11.9%;1例RHD弱D15基因型,发生频率约为1.2%;2例RHD基因分型阳性需作进一步碱基测序分析。结论本地区血清学RhD阴性献血者中,存在RHD 1227A DEL、RHD-CE(2-9)-D,RHD-CE(5)-D、RHD-CE(6-9)-D和RHD弱D15等基因型,血清学结合基因分型能更准确鉴定RhD血型。     

Polybrene微孔板法测不规则抗体初探

为提高血液质量,保证献血员和受血者的安全,献血员不规则抗体的筛选是一项亟待解决的问题,经典的Polybrene试管法对大批量标本的检测难以适应,为此笔者对polybrene微孔板法进行探讨,取得满意效果,观察报告如下:     

番禺区无偿献血人群中Rh血型系统分布情况及应用研究

Rh血型系统在临床上的重要性仅次于ABO血型系统,可引起严重的新生儿溶血病和溶血性输血反应.在中国汉族人群中,RhD阴性者很少,需要输血时,难以找到合适的供血者,所以建立本地区Rh血型系统检索库可有效的解决上述问题.笔者对番禺区人群中Rh血型系统进行调查,并在解决临床输血难题中得到很好的应用,现报告如下.