M/XDR-TB的快速分子检测和耐药特征分析

目的 使用分子线性探针杂交技术结合仪器法液体快速培养分析耐多药( multidrug resistant,MDR)及广泛耐药(extensively drug resistant,XDR)结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)的耐药基因和表型特征.方法 运用GenoType MTBDR试剂盒检测M/XDR-TB菌株中各耐药基因的突变位点及类型,平行用BD MGIT960系统检测所选菌株对一线及二线抗结核药物的敏感性.结果 (1)94株MDR-TB经MGIT960检测,乙胺丁醇(ethambutol,EMB)、阿米卡星(amikacin,AMK)、氧氟沙星(ofloxacin,OFX)及莫西沙星(moxifloxacin,MFX)的耐药率分别为36.2%、17.0%、54.3%和55.3%.XDR-TB检出率为13.8%.(2)以MGIT960药敏结果作为参考标准,94株MDR-TB中,GenoType MTBDRplus检测MTB对异烟肼(isoniazid,INH)、利福平(rifampin,RFP)耐药的符合率分别为86.2%和95.7%;GenoType MTBDRsl检测MTB对EMB、AMK、OFX及MFX耐药的敏感性分别为47.1%、81.3%、94.1%、94.2%;特异性分别为75.0%、98.7%、90.7%、92.9%.(3)rpoB基因突变中以S531L最多;INH耐药主要由katG基因发生突变导致,以S315T1类型居多;gyrA突变位点主要集中在第94位密码子.所测菌株中有23例为复合耐药,7例为未知突变.结论 M/XDR-TB中,INH、RFP、AMK、OFX及MFX耐药株大多分别是由katG、rpoB、rrs及gyrA突变导致,乙胺丁醇与embB之间的耐药关联性相对较低.GenoType MTBDR试剂盒检测M/XDR-TB敏感性和特异性较好,可以在未获得传统细菌表型药敏结果前指导临床用药治疗.     

一种新型结核分枝杆菌快速药敏系统的临床应用评价

目的 应用一种自主研发的新型结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)快速药敏系统(MB FS-1型)检测MTB对利福平(RIF)和异烟肼(INH)的耐药性,并对该系统的临床应用效果进行评价.方法 采用新型药敏系统对115株MTB临床分离株进行药敏试验,异烟肼以及利福平分别设置三个浓度梯度,与BECTEC MGIT 960法对比分析药敏结果,评估该系统检测多药耐药结核( Multidrug-resistant tuberculosis,MDR-TB)的应用性价值.结果 以BECTEC MGIT 960法为参考标准,MB-FS-1型快速药敏系统检测INH的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为93.43％,94.88％,97.26％和88.10％,检测RIF分别为96.50％,94.83％,94.83％和96.50％.异烟肼浓度为0.2μg/ml或0.1 μg/ml,利福平浓度为1.0 μg/ml时两种药敏方法等效性最高,符合率分别为93.97％和95.69％.Kappa值分别为0.867和0.913,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 该新型MTB快速药敏系统检测MTB对异烟肼和利福平的耐药性与BACTEC MGIT 960符合率高,具有快速、价廉、操作简便的优点,可作为临床检测MDR-TB的快速检测方法之一.     

检测结核分枝杆菌的BSL-2实验室污染状况的实验评价

目的通过检测生物安全二级（BSL-2）实验室结核分枝杆菌（MTB）的污染情况,对BSL-2实验室安全性进行评估。方法用FA-2型撞击式空气微生物采样器采集MTB检验前、中、后的空气样本收集于血平板和生理盐水采样介质;用物表采样规格板和棉拭子采集物体表面样本。血平板采集的空气样本孵育后,挑取菌落行革兰染色镜检和16S rRNA菌种鉴定。物表样本和以生理盐水为介质的空气样本经N-乙酰-L-半胱氨酸（NALC）/NaOH前处理,采用MTB特异性荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测MTB;同时接种改良罗氏中性培养基和MTB液体培养基培养MTB。结果改良罗氏中性培养基未见分枝杆菌生长,液体培养基检出的2例分枝杆菌经测序证实分别属于MTB复合群和脓肿分枝杆菌;有2%（15/779）的样本MTB核酸阳性,且均来自进行药敏试验的2个BSL-2实验室;有26.7%（8/30）的来自生物安全柜的血平板采样的样本平皿菌落量达2＋或以上,测序分析显示主要为葡萄球菌属、芽孢杆菌属、不动杆菌属。结论受检医院BSL-2实验室MTB污染状况总体可控,但进行MTB药敏试验的实验室应重点加强生物安全防护。     

结核分枝杆菌动物建模试验中ABSL-3实验室内生物安全评估

目的通过在动物生物安全三级(ABSL-3)实验室内对结核分枝杆菌(MTB)动物建模过程采样监测,为实验室生物安全评估提供依据。方法在经中国合格评定国家认可委员会(CNAS)认可并由卫生部批准的,可从事MTB等高致病性病原微生物实验动物研究工作的ABSL-3实验室内实施MTB动物建模,在实验过程中进行空气和物体表面采样。用快速分子诊断和常规病原学方法对样本进行特异性检测分析。结果生物安全三级(BSL-3)实验室使用后的清场工作可以大大减少实验室环境的细菌量,BSL-3实验室在日常使用中也会存在少量的环境微生物,由于负压强度和使用频率的差异,核心区的环境洁净度明显高于准备间。70%乙醇喷洒消毒及擦拭可以使准备间物体表面的细菌量检出率从59.26%下降到9.38%;核心区物体表面的环境细菌检出率从6.59%下降到1.52%,核心区MTB检出率从10.99%下降到0。在ABSL-3实验室和生物安全柜双重负压环境下,可避免空气中MTB气溶胶污染。结论 ABSL-3实验室的负压环境和正确的防护及消毒措施对实验室操作人员的生物安全有重要的防护作用。     

2例输入性卵形疟散点图异常对疟原虫的筛查作用

目的 该文报道上海市公共卫生临床中心2014年9月份收治的两例境外输入性卵形疟患者的实验室诊断,并简单探讨自动血细胞分析仪散点图异常信息对疟疾筛查的意义。方法 2例患者抗凝外周血标本采用SYSMEX XT-4000i血细胞分析仪进行血细胞分析,同时制备厚薄血片显微镜镜检查找疟原虫虫体。结果 2例患者的外周血中找到卵形疟疟原虫虫体,血细胞分析的散点图出现异常,中性粒细胞与嗜酸性粒细胞散点图之间的间距缩小或消失。结论 血细胞分析仪特征性的散点图异常在筛查卵形疟原虫上有一定的提示价值,与显微镜镜检相结合更可促进疟原虫形态学的诊断。     

H7N9禽流感患者外周血常规和C反应蛋白的变化及其临床意义

目的探讨H7N9禽流感患者外周血常规和C反应蛋白（CRP）的变化,为临床诊断、治疗及病情监测提供依据。方法选取18例H7N9禽流感患者（H7N9组）,以2009年的20例甲型H1N1流感患者（H1N1组）及20名健康体检者（正常对照组）作为对照。根据患者康复情况将H7N9组再分为轻症组12例、重症组6例。分析各组血常规,同时测定H7N9组外周血CRP水平。结果与正常对照组比较,H7N9组患病初期白细胞（WBC）总数无明显变化,淋巴细胞（Lym）计数明显降低（P〈0．05）,同时伴有血小板（PLT）和嗜酸性粒细胞（Eos）下降（P〈0．05）;重症组中性粒细胞（Neu）计数明显增高（P〈0．05）,轻症组和重症组之间各项指标均无差异（P〉0．05）。与H1N1组比较,H7N9组入院时的血象特点相似,但Lym计数下降更为明显（P〈0．05）。与治疗前比较,轻症组治疗后PLT、Lym及Eos计数明显上升（P〈0．05）。H7N9组入院时CRP明显升高,重症较轻症组升高更为明显（P〈0．05）。轻症组治疗后CRP明显下降,与治疗前比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论外周血CRP水平对区分H7N9禽流感患者轻、重症及判断预后有一定的提示作用。H7N9禽流感患者外周血常规的变化与甲型H1N1流感存在相似之处,特点并不明显,应充分结合多方面信息以明确诊断和判断预后,以防出现严重的疫情后果。