联合应用反义bcl-2和反义IL-6寡核苷酸对小细胞肺癌细胞株NCI-H446的作用

目的　观察联合应用反义 bcl- 2硫代磷酸寡脱氧核苷酸 (bcl- 2 AS- PS- ODN)和白细胞介素 6 (IL - 6 )AS- PS- ODN对小细胞肺癌细胞株 NCI- H4 4 6增殖和活力的影响。　方法　以 bcl- 2 AS- PS- ODN和 IL- 6 AS- PS-ODN单独及联合作用于 NCI- H4 4 6 ,经细胞克隆形成实验、细胞增殖实验观察其对细胞增殖和活力的影响 ,经细胞凋亡线粒体流式检测试剂盒检测细胞凋亡的变化 ,经半定量 RT- PCR检测 IL - 6 m RNA表达水平的变化。　结果　细胞增殖曲线、细胞克隆形成实验及细胞凋亡实验显示联合用药能更强地抑制细胞活力 ,促进细胞凋亡。 bcl- 2 AS-PS- ODN单独作用时 ,IL- 6 m RNA表达上升 74 .3% ,IL- 6 AS- PS- ODN单独作用以及与 bcl- 2 AS- PS- ODN联合作用时 ,IL- 6分别下调 6 7.7%和 5 2 .4 %。　结论　联合用药较单独用药对 NCI- H4 4 6细胞株显示出更好的抑制效果     

联合应用反义bcl-2和反义IL-6寡核苷酸对小细胞肺癌细胞株NC1-H446的作用

目的 观察联合应用反义bcl-2硫代磷酸寡脱氧核苷酸(bcl-2AS-PS-ODN)和白细胞介素6(IL-6)AS-PS-ODN对小细胞肺癌细胞株NCI-H446增殖和活力的影响。方法 以bc1-2AS-PS-ODN和IL-6AS-PS-ODN单独及联合作用于NCI-H446，经细胞克隆形成实验、细胞增殖实验观察其对细胞增殖和活力的影响，经细胞凋亡线粒体流式检测试剂盒检测细胞凋亡的变化，经半定量RT-PCR检测IL-6 mRNA表达水平的变化。结果 细胞增殖曲线、细胞克隆形成实验及细胞凋亡实验显示联合用药能更强地抑制细胞活力，促进细胞凋亡。bc1-2AS-PS-ODN单独作用时，IL-6mRNA表达上升74．3％，IL-6AS-PS-ODN单独作用以及与bcl-2AS-PS-ODN联合作用时，IL-6分别下调67．7％和52．4％。结论 联合用药较单独用药对NCI-H446细胞株显示出更好的抑制效果。     

Daxx基因在急性淋巴细胞白血病中表达的初步研究

目的检测急性淋巴细胞白血病(ALL)患者Daxx基因的表达情况。方法采用半定量反转录蛳聚合酶链式反应(RT蛳PCR)技术检测了83例ALL患者(初治41例,复发42例)及36名正常对照Daxx基因的表达。结果41例初治和42例复发患者DaxxmRNA表达阳性率分别为75.61%及71.43%,均高于正常对照组36.11%(P<0.01)。半定量分析结果示,ALL初治和复发组患者的DaxxmRNA表达水平分别为0.43±0.029和0.38±0.025,也高于正常对照组0.27±0.04(P<0.05)。结论Daxx基因在ALL患者中高表达,是否可能与急性淋巴细胞白血病的发病有某种关系值得探讨。     

bcl-2、IL-6、IL-6R反义寡脱氧核苷酸对小细胞肺癌细胞作用的比较

目的:比较bcl-2、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、白介素-6受体(interleukin-6 receptor,IL-6R)反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸(antisense phosphorothiate oligodeoxynucleotide, AS-PS-ODN)对小细胞肺癌细胞株NCI-H446细胞增殖及诱导凋亡的作用,初步探讨反义核苷酸技术治疗中靶基因的选择策略.方法:合成反义寡脱氧核苷酸bcl-2 AS-PS-ODN、IL-6 AS-PS-ODN、IL-6R AS-PS-ODN,分别作用于NCI-H446细胞株,通过细胞克隆形成实验检测细胞增殖活性的变化,细胞凋亡线粒体流式检测及DNA倍体分析检测细胞凋亡,半定量RT-PCR检测相关基因表达水平的变化.结果:(1)bcl-2 AS-PS-ODN、IL-6 AS-PS-ODN、IL-6R AS-PS-ODN均能够抑制肺癌细胞增殖活性和诱导细胞凋亡,其中以IL-6 AS-PS-ODN抑制作用最强, bcl-2 AS-PS-ODN次之, IL-6R AS-PS-ODN作用最弱.(2)3种反义寡脱氧核苷酸均能下调肺癌细胞相应基因的表达水平,其中以IL-6下调幅度最大,达(84.1±5.01)%; bcl-2和IL-6R基因下调幅度相近,分别为(62.6±3.42)%和(60.3±4.45)%.(3)反义核苷酸作用后除了引起自身基因表达下调外,还伴对其他基因表达的调节作用,如IL-6 AS-PS-ODN作用使bcl-2基因表达下调(32.2±0.20)%;而bcl-2 AS-PS-ODN作用使IL-6基因表达上调(74.3±4.13)%. 结论:IL-6 AS-PS-ODN较bcl-2 AS-PS-ODN和IL-6R AS-PS-ODN能更有效地诱导小细胞肺癌细胞凋亡,IL-6是NCI-H446小细胞肺癌反义核苷酸治疗较为合适的靶基因.     

两性霉素B治疗49例血液恶性肿瘤患者深部真菌感染分析

目的观察两性霉素B对血液恶性肿瘤患者深部真菌感染的临床疗效及安全性。方法49例血液恶性肿瘤患者合并真菌感染使用两性霉素B,剂量为每日0．5～1 mg/kg,用药10～61 d,中位数26 d,观察用药前及用药后1周患者症状、体征,血电解质及肝、肾功能的变化。结果两性霉素B临床总有效率为56．9%,真菌清除率42．4%,各种不良反应发生率在3．6%～24．5%,常见的不良反应依次为两性霉素B输注的畏寒、寒战、发热等全身反应,低钾血症,消化道反应,肾功能损害,肝功能损害,静脉炎。结论两性霉素B抗菌谱广,抗菌作用强,虽不良反应较为多见,只要合理用药及不良反应处理得当,大多数患者仍可耐受。     

bcl-2、IL-6、IL-6R反义寡脱氧核苷酸对小细胞肺癌细胞作用的比较

目的: 探讨一种新型抗ATPase F1α抗体,人血管抑制和肿瘤转移相关蛋白（human angiostatin interacting and tumor metastasis involving protein,HAITMIP）抗体MAb3D5AB1（简称GX）对A549肺腺癌小鼠移植瘤的抑制作用。 方法：在C57BL/6小鼠右前腋窝接种A549肺腺癌细胞,制备小鼠荷瘤模型,32只荷瘤小鼠随机分为对照组（无任何处理）及A、B、C治疗组（分别腹腔注射125、250、500 ng/ml GX）。观察各组移植瘤小鼠肿瘤体积、生长延迟时间（tumor growth delay, TGD）及小鼠生存期。免疫组织化学法检测瘤组织内微血管密度。TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡。结果：成功建立了荷A549肺癌小鼠模型,治疗组小鼠移植瘤的体积明显减小（P<0.05）、TGD随GX剂量增加而显著延长（P<0.01）、瘤组织内微血管密度明显减少（P<0.05）,TUNEL法检测发现各治疗组瘤细胞凋亡率均显著高于对照组（均P<0.01）。结论：GX可以抑制肿瘤新生血管生成,促进肿瘤细胞调亡,使A549肺腺癌小鼠移植瘤生长减慢,并延长小鼠生存期。     

eIF4E在白血病中的表达及其临床意义

本研究旨在比较eIF4E在正常人和白血病患者中的表达水平,了解eIF4E是否在白血病的发生和发展中起到一定的作用。收集10例正常人和76例白血病患者的外周血细胞标本,76例患者包括39例急性髓系白血病,15例慢性髓系白血病和22例急性淋巴细胞白血病,分离标本中的白细胞,分别通过实时定量PCR和Western blot检测eIF4E在mRNA和蛋白质水平的表达变化。结果表明,就eIF4E mRNA绝对表达水平而言,在急性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病及慢性髓系白血病急变期,其表达增高,与正常对照比较有显著性差异(P<0.05);在慢性髓系白血病慢性期,其表达水平无明显改变,在慢性髓系白血病加速期,其表达水平虽有所上调,但与正常对照无显著性差异。就eIF4E mRNA相对表达水平而言,在慢性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病及除M4、M5之外的急性髓系白血病中,其表达均无显著性变化。eIF4E蛋白质表达在急性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性髓系白血病加速期和急变期中均有不同程度的增高,与正常对照比较有显著性差异(P<0.05)。结论:虽然eIF4EmRNA相对表达水平在大多数白血病中并无显著性改变,但是eIF4E mRNA绝对表达水平及其蛋白质水平在大多数白血病中均显著性上调。因此推测,eIF4E可能对白血病的发生和发展起到一定的作用,以它为靶点治疗白血病,尤其是复发和难治性白血病,可能是一条有希望的途径。     

c-myc在大黄素抑制HL-60细胞增殖及诱导凋亡中的作用

目的研究中药大黄素(emodin)对人髓系白血病细胞株HL-60细胞的影响及探讨c—myc基因在其中的作用。方法应用MTT法绘制细胞生长曲线；细胞集落培养观察大黄素对HL-60细胞增殖的影响；DNA倍体分析、线粒体细胞凋亡检测法、末端缺失原位标记(TUNEL)法及DNA凝胶电泳分析细胞凋亡；RT—PCR及Western blot检测大黄素作用前后c—myc基因mRNA及蛋白表达水平的变化。结果大黄素能明显抑制HL-60细胞增殖，半数抑制浓度(IC50)约为20μmol／L；DNA片段化、亚G1峰(凋亡峰)的检出及线粒体细胞凋亡检测等证实大黄素能有效诱导HL-60细胞凋亡，细胞凋亡率与药物作用浓度呈正相关。大黄素与HL-60细胞作用后c—myc基因mRNA及蛋白的表达水平与作用时间呈负相关。结论大黄素能有效抑制HL-60细胞增殖，诱导其凋亡；c—myc基因可能参与了大黄素抑制HL-60细胞增殖和诱导凋亡的过程。     

大黄素对HL-60／ADR耐药细胞多药耐药逆转作用的研究

本研究旨在探讨大黄素（emodin）对人急性白血病HL-60／ADR耐药细胞多药耐药（mulfidrugresistance,MDR）逆转作用及其相应的作用机制。采用MTT法检测HL-60／ADR细胞对大黄素以及8种临床常用化疗药物的耐药性,比较大黄素联合化疗药物后对HL-60／ADR细胞耐药逆转效果,应用DNA倍体和DNALadder分析检测大黄素与阿霉素联合用药后细胞凋亡改变,RT-PCR和Westernblot分别检测耐药相关基因和蛋白表达变化,流式细胞术检测大黄素处理后HL-60／ADR细胞内阿霉素荧光阳性率和柔红霉素平均荧光强度（MFI）,激光共聚焦显微镜检测细胞内柔红霉素分布变化。结果表明：大黄素对HL-60／ADR耐药株和相应HL-60细胞敏感株的IC5值接近,分别为24．09±1.72μmol/L和23．18±0．87μmol／L,对阿霉素（ADR）、柔红霉素（DNR）、依托泊苷（VP16）、长春新碱（VCR）、阿糖胞苷（Ara-C）、高三尖杉酯碱（HHT）、米托蒽醌（MTZ）和吡柔比星（THP）呈现不同程度耐药。小剂量大黄素对8种药物耐药逆转倍数介于1．58-4．12之间,其中对ADR的耐药细胞逆转效果最好。大黄素与ADR联合用药组可见明显的亚二倍体凋亡峰和典型的DNA降解梯状带形成。与单药组比较,联合用药组MRP1、TOPOⅡB、GSTπ、BcL-2耐药相关基因mRNA和蛋白表达水平下调明显,细胞内ADR和DNR蓄积水平增加,胞浆和胞核DNR分布增加,该作用与大黄素呈浓度依赖性。结论：大黄素具有逆转HL-60／ADR细胞多药耐药作用,其作用机制可能与下调耐药相关基因表达水平、增加细胞内化疗药物蓄积和促进细胞凋亡作用有关。     

抑制性消减杂交法研究初治和复发急性淋巴细胞白血病基因的差异表达

目的 比较初治与复发急性淋巴细胞白血病基因的差异表达。方法 应用抑制性消减杂交法(SSH)成功地构建消减效率高的一对来自同一个体复发与初治时的急性淋巴细胞自血病基因差异表达的cDNA文库，对含有插入片段的质粒DNA进行测序分析，将差异表达的表达序列标签(EST)与GenBank核酸数据库中的已知序列进行同源性比较。结果 在挑选80个白色克隆中有70个含有(400～1000bp)长短不等的插入片段，测序结果经检索显示20个片段为未知序列EST，提示这些片段可能来自20个新基因，其中7个EST片段已在Gen Bank dbEST。数据库注册登记。结论 复发急性淋巴细胞白血病消减文库的建立为进一步克隆、分离、鉴定急淋白血病复发相关基因奠定了良好的基础。