CD133多克隆抗体制备及肿瘤干细胞鉴定

目的 制备肿瘤干细胞标志性蛋白CD133的多克隆抗体,为进一步研究肿瘤组织中肿瘤干细胞的生物学特性以及筛选肿瘤干细胞、制备肿瘤干细胞的小鼠模型奠定基础.方法 以人CD133蛋白细胞外膜表面肽段为抗原,免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,进而用其对肿瘤组织进行Western blot以及免疫组化染色.结果 Western blot证实该抗体可以识别过表达的myc-CD133以及内源性CD133,进一步免疫组化结果显示该抗体可以识别恶性胶质瘤中的肿瘤干细胞.结论 成功制备高效、特异的CD133多克隆抗体,该抗体可以用于肿瘤组织的免疫染色及肿瘤干细胞的筛选.     

利用酵母双杂交研究与Ca2+CRAC通道Orai1相互作用蛋白

目的:利用酵母双杂交等技术研究与CRAC通道蛋白Orai1发生相互作用的蛋白质,从而揭示CRAC通道分子作用机制.方法 :以Orai1-C端为诱饵蛋白筛选大鼠海马和皮质cDNA文库,寻找能与之相互作用的蛋白质, 运用营养缺陷型培养,X-β-Gal蓝斑筛选等实验去除假阳性克隆,并通过GST-Pulldown体外实验验证其相互作用.结果:以Orai1-C端为诱饵最终筛出了几个阳性克隆,经测序分析, 发现了其中一个感兴趣的蛋白.结论:Orai1可以和该蛋白发生相互作用,其相互作用可能与CRAC通道功能调节有关.