耐核糖核酸酶内含HCV RNA病毒样颗粒的表达

目的 构建可以表达耐核糖核酸酶(RNase)的内含HCV RNA病毒样颗粒的载体质粒。方法 将表达载体pI NCCL用Hind Ⅲ酶切后，与用相同内切酶酶切的HCV RNA非编码区(5′-UTR)扩增产物，在T4 DNA连接酶的存在下连接，构建一新的表达载体pI NCCL-HCV RNA 5′-UTR，再转化BL21-DE3 E．coli进行原核表达。结果 成功构建得到了新的表达载体pI NCCL-HCV RNA5′-UTR，经原核表达为耐RNase的内含HCV RNA病毒样颗粒。结论 得到的pI NCCL-HCV RNA 5′-UTR表达载体及原核表达系统，可作为一个耐RNase的HCV RNA标准品和质控品的构建和制备表达载体平台。     

TOPSIS法和秩和比法模糊联合评价5家血站血液筛查实验室EIA检测质量

目的联合应用TOPSIS(technique for order preference by similarity to ideal solution,TOPSIS)法和秩和比法(rank-sum ratio,RSR法),综合评价5家血站血液筛查实验室(简称血站实验室)抗-HIV、抗-HCV和HBsAg EIA检测质量。探讨联合应用TOPSIS和秩和比方法对评价血站实验室过程能力的适用性和可行性。方法分析计算5家血站实验室抗-HIV、抗-HCV和HBsAg EIA 3个检测项目的灵敏度和特异性,并以此作为指标,使用TOPSIS法、秩和比法和2者的模糊加权联合法对5家血站实验室的EIA检测能力进行综合评价排序。原始数据来自于5家血站实验室按照常规检测方法,使用2种抗-HIV、抗-HCV和HBsAg EIA检测试剂盒分别对同1批样本进行检测的结果。结果通过TOPSIS法、秩和比法和2者的模糊加权联合法综合评价,5家实验室抗-HIV、抗-HCV和HBsAg EIA 3项检测质量的综合排名为EA、CBD。结论 TOPSIS法和秩和比法的联合应用可以为血站实验室检测结果的准确性提供综合量化结果,客观评价不同血站实验室的检测能力,为血站实验室综合能力评估提供基础。     

全国临床免疫室HBsAg检验室内质量控制的评价

全国临床免疫室ＨＢｓＡｇ检验室内质量控制的评价郑怀竞，王露楠，王文丽，李金明，邢文革，马嵘卫生部临床检验中心（简称：部中心）研制了一套评价方法，编制了相应的软件，对各室的ＨＢｓＡｇ检验室内质控进行了试评价。材料与方法一、材料：统一采用部中心提供的ＨＢ...     

2000～2002年丙型肝炎病毒核酸逆转录聚合酶链反应测定室间质量评价

目的 评价2000年至2002年临床基因扩增检验实验室在丙型肝炎病毒(HCV)RNA逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测中的质量。方法 从2002年至2003年每年进行质评两次，每次发放HCVRNA样本5份，其中阳性样本3—4份，含量在10^4-10^7拷贝数／ml范围内。阴性样本1～2份，均为冻干品。要求各个实验室按规定时间检测并回报结果，然后统计分析。结果 对质评样本测定全部正确的比率从2000年的001批的53．3％(24／45)、002批的4．8％(2／42)和2001年011批的73．8％(31／42)、012批的79．2％(42／53)，上升到2002年021批的89．7％(105／117)和022批的91．6％(109／119)。假阳性率也从2000年和2001年的高至26．7％和14．3％降至2002年的8．0％以下。对在10^5和10^4拷贝数／ml数量级的质评样本，测定假阴性率从2000年的15．6％(0011)、19．0％(0025)和81．0％(0023)下降到2001年的11．9％(0112)、11．3％(0125)和9．5％(0115)，到2002年更是下降到了4．6％(0221)、3．7％(0223)和3．8％(0212)。从试剂盒的临床使用评价来看，从2000年到2002年各厂家试剂的临床检测特异性、灵敏度和符合率均有明显改善。结论 从2000-2002年全国临床HCV RNA RT-PCR测定假阳性和假阴性明显降低。说明所建立的HCV RNA临床RT-PCR测定室间质量评价项目能很好的监测实验室存在质量问题，从而促使其加以改进。     

PCR测定乙型肝炎病毒DNA弱阳性质控血清的适用性研究

为确定目前国内PCR测定乙型肝炎病毒 (HBV)DNA弱阳性质控血清的浓度水平 ,将已知浓度的 10倍系列稀释的 5份质控血清寄发给全国 91个临床和试剂生产厂家实验室 ,让其以室内常规方法检测 ,回报测定结果由我处统计分析。结果表明 ,目前全国PCR测定HBVDNA灵敏度不高 ,当样品HBVDNA含量低于 5× 10 5拷贝 /ml时 ,大部分实验室 (5 6 0 % )测不出来 ,不同厂家试剂对上述样品的检出差异较大。因此 ,目前国内PCR测定HBVDNA弱阳性质控血清的浓度以 10 5拷贝 /ml为宜     

丙型肝炎病毒核酸检测的国家标准物质的研制

目的研制国内用于丙型肝炎病毒核酸(HCVRNA)扩增检测的血清标准物质。方法用HCVRNA阴性血浆将阳性血浆稀释至含量约300000拷贝数/ml,然后进行真空冷冻干燥。检测方法采用实时荧光定量聚合酶链反应方法和罗氏公司的PCR内标定量方法。制备标准品含量通过与国际标准(世界卫生组织属下的国家生物标准研究所标准物质编号:96/790)比对获得。结果该标准物质定值为:(1·29±0·24)×105IU/ml。其稳定性实验表明室温20~25℃(相对湿度20%~50%)14d、37℃(相对湿度60%~80%)7d均稳定。长期监测结果表明:2~8℃6个月及-20℃保存两年的含量均无明显变化。均一性检测结果:瓶间不精密度为3·53%。结论该制备物可以作为用于核酸扩增检测的丙型肝炎病毒核酸国家标准物质。     

临床基因扩增检验对临床标本接收的要求是什么?

答 :1.应在四个测定区域之外的地方或区域内接收。 2 .接收的标本应收集在原始容器中 ,不能接收从其他检测如生化、免疫检验等分出来的标本。 3.在核酸提取时 ,由基因扩增检验实验室人员将标本带入至标本制备区。临床基因扩增检验对临床标本接收的要求是什么?@王露楠     

1993～1994年全国抗－HCV血清学检验室间质量评价

目的掌握和提高全国医院及血站实验室对抗－ＨＣＶ的检验质量。方法将１９９３～１９９４年参加卫生部临床检验中心抗－ＨＣＶ血清学检验室间质量评价（质评）的回报结果进行分析和总结。结果１９９４年全国有２４３家医院及７４个血站参加抗－ＨＣＶ室间质评活动，同１９９３年相比质评成绩有明显提高。血站系统对１９９４年所发４份抗－ＨＣＶ弱阳性样本的平均检出率为８１．９％。对使用单位（包括医院和血站）在１０家以上的抗－ＨＣＶ试剂盒进行临床使用评价，９个生产单位的抗－ＨＣＶ试剂盒符合率在９０．０％以上，其中５个在９５．０％以上。结论医院系统的质评成绩受所选用的试剂盒质量影响比较大，血站系统对弱阳性样本的检出率还有待进一步提高。     

人巨细胞病毒pp65对系统性红斑狼疮诱导作用的研究

目的 探究人巨细胞病毒(HCMV) pp65是否可以诱发正常C57BL/6小鼠产生系统性红斑狼疮(SLE)相关实验室诊断指标的变化.方法 构建HCMV pp65原核表达质粒与真核表达质粒,然后进行HCMV pp65原核蛋白表达与纯化.间接法ELISA检测anti-pp65 IgG、dsDNA、抗核抗体(ANA),竞争法ELISA检测血浆中IL-1b、IL-6、TNF-α浓度.结果 成功获得HCMV pp65原核表达蛋白和真核表达质粒,免疫小鼠后血清中anti-pp65、抗dsDNA抗体、ANA、IL-6均有明显上升趋势.结论 HCMVpp65可以使C57BL/6小鼠SLE相关检测指标发生明显改变,这一结果有助于进一步研究自身免疫病的发病机制与影响因素.     

酶联免疫法检测弓形体感染初探

目的酶联免疫法正确有效诊断弓形体急性感染。方法对4 500例无偿献血者血浆样本分别检测弓形体IgM抗体、IgG抗体,对IgM抗体阳性和IgM抗体阴性且IgG抗体阳性的样本检测其IgG抗体亲合力。结果 4 500例样本中,弓形体IgM抗体阳性率为0.51%,IgG抗体阳性率为1.53%。其中22例为IgM（＋）IgG（＋）,1例为IgM（＋）IgG（-）,47例为IgM（-）IgG（＋）,4 430例为IgM（-）IgG（-）。在对69例弓形体IgG（＋）的样本进行IgG亲合力检测时,IgM（＋）IgG（＋）的22例样本中2例为IgG中等亲合力抗体,3例为IgG高亲合力抗体,但这5例样本的IgM抗体均为可疑,可能由于IgM抗体常年保持低水平,并非正处于弓形体急性感染期;IgG（＋）IgM（-）的47例样本中,3例为IgG低亲合力抗体,可能由于其中的弓形体IgM抗体在急性感染期后期,IgM抗体滴度太低无法检测到,仍可判定为处于急性感染期。最终确定弓形体急性感染的样本为20例,感染率0.44%。结论可同时检测弓形体IgM抗体和弓形体IgG抗体亲合力来诊断弓形体感染,IgM抗体阳性或IgG抗体低亲合力的样本均可判定为弓形体急性感染。