ELISA一步法检测HBsAg的钩状效应

ＥＬＩＳＡ一步法检测ＨＢｓＡｇ的钩状效应上海市东方医院（２００１２０）吕红根，张淼发本文用ＥＬＩＳＡ一步法检测ＨＢＶ标志物时，发现２３例ＨＢｅＡｇ阳性而ＨＢｓＡｇ阴性。经用生理盐水对标本作１：１０，１：２０及１：１００稀释后再作ＨＢｓＡｇ测定，２１例...     

上海地区汉族健康人群血清脂联素水平分析

目的探讨上海地区汉族健康人群血清脂联素水平，分析其与年龄、性别、血脂浓度及胰岛素抵抗指数的关系。方法收集400名汉族健康体检者的血清标本，采用酶联免疫吸附双抗夹心（ELISA）法测定血清脂联素水平和血清空腹胰岛素（FINS）水平。结果上海地区汉族健康人血清空腹脂联素水平为（9．48±4．86）μg／ml，各年龄组间比较差异无统计学意义；男性脂联素浓度为（8．46±3．97）μg／ml，女性为（10．22±5．30）μg／ml，男性和女性相比脂联素浓度差异有统计学意义；女性绝经前后脂联素浓度分别为（11．89±4．78）μg／ml和（8．78±4．65）μg／ml，两者脂联素浓度差异有统计学意义。结论①血清脂联素浓度在各年龄段差异无统计学意义；女性脂联素浓度高于男性，差别有统计学意义（P〈0．05）；绝经前、后女性脂联素浓度差异有统计学意义（P〈0．05）。②血清脂联素水平与空腹胰岛素水平、体重、体重指数、腰臀比、收缩压、LDL—C等指标呈负相关，与HDL—C水平呈正相关。     

荧光定量RT-PCR检测类风湿关节炎患者葡萄糖-6-磷酸异构酶mRNA表达水平的研究

目的通过比较分析葡萄糖-6-磷酸异构酶(G6PI)mRNA在类风湿关节炎(RA)、其他自身免疫性疾病及健康人群之间的表达差异,探讨其在RA中的致病机制。方法建立实时定量RT-PCR方法,并利用该法检测128例RA患者(RA组)、32例其他自身免疫性疾病患者(疾病对照组)、100例健康体检者(健康对照组)G6PI基因的表达水平。结果经GAPDH校正后G6PI基因表达水平在RA组为2.72±2.09,其中活动组和缓解组分别为3.12±2.40和2.13±1.34,疾病对照组为2.14±1.43,健康对照组为1.25±0.73。RA组显著高于健康对照组(P0.01),RA活动组基因表达水平显著高于缓解组(P0.01),也显著高于疾病对照组(P0.01)。结论 G6PI在RA患者中表达的显著增加表明G6PI可能参与了RA的发病过程,并与疾病的活动性相关,可作为RA的辅助性诊断指标及早期筛查指标。     

葡萄糖-6-磷酸异构酶免疫复合物检测方法的建立及其在类风湿关节炎诊断中的应用

目的建立葡萄糖-6-磷酸异构酶(G6PI)免疫复合物测定方法,初步探讨其与类风湿关节炎(RA)发病机制的关系及其对RA辅助诊断、病情监测的作用。方法建立C1q抗体捕获ELISA方法,并对311例血清标本(RA患者176例、其他免疫疾病患者35例和健康体检者100例)和44例关节液标本(RA患者33例、非RA关节疾病患者11例)中的G6PI/G6PI抗体/C1q免疫复合物水平进行检测。结果以波长450 nm吸光度值(A_(450nm))表示复合物含量,176例RA患者血清中G6PI免疫复合物为0.918±0.507,显著高于其他免疫疾病对照组(0.746±0.399)和健康对照组(0.696±0.362),P0.01;而两对照组间差异无统计学意义。RA活动组为1.045±0.529,显著高于非活动组(0.764±0.436),P0.01。以健康对照组A_(450nm)值建立正常参考区间,结果G6PI免疫复合物对RA诊断的敏感性和特异性分别为60.2%和67.4%,活动期RA的阳性率为74%,显著高于非活动期(43.7%)。33例RA患者、11例其他关节疾病患者关节液中G6PI免疫复合物A_(450nm)分别为0.835±0.497和0.596±0.132,RA患者组显著高于其他关节病组,P0.05。结论 RA患者血清和关节液G6PI免疫复合物含量增高,且增高程度与RA病情活动相关;G6PI免疫复合物可能在RA发病中起重要作用,且与疾病的活动性密切相关。     

RNAi表达载体干扰四型肽精氨酸脱亚氨基酶基因在HL-60细胞系中的表达

目的：设计针对PADI-4基因的RNAi表达载体,抑制PADI-4基因在HL-60细胞中的表达,初步确定PADI-4基因在类风湿性关节炎发生发展中的作用,为后续研究奠定实验基础。方法：设计并合成4对针对PADI-4基因编码区的核苷酸链,核苷酸链经体外退火后形成双链SiRNA,克隆进入pSiRNA-hH1neo G2空载体后转化入GT116细胞,通过蓝白斑筛选后,挑取白斑进行扩增,抽提质粒并对重组质粒进行双酶切分析。以脂质体转染法,分别将pSiRNA-hH1neo G2空载体和4个重组质粒载体转染进入HL-60细胞系,于转染的第3、5、7、10、14天后收集细胞,抽提细胞总RNA后,反转录成cDNA,用Real-time PCR技术检测各实验组HL-60细胞内PADI-4基因mRNA水平的表达情况,并做统计分析。结果：经Acc65Ⅰ和HindⅢ双酶切鉴定,重组质粒中已经插入目的片段,为合格质粒；转染pSiRNA表达载体后,HL-60细胞系中PADI-4基因mRNA表达水平下降,其中以第3号载体的干扰效果最优,干扰效率达到62%。结论：成功构建针对PADI-4基因的pSiRNA表达载体,并且筛选出干扰效率最好的载体,为后续研究PADI-4基因在类风湿性关节炎中的作用奠定实验基础。     

外周血人软骨糖蛋白-39在原发性干燥综合征患者中的检测价值

目的探究外周血人软骨糖蛋白-39在原发性干燥综合征患者中的检测价值。方法选取2011年7月至2014年7月本院收治的首次诊断为原发性干燥征的患者50例,为原发性干燥综合征组,另外选取同期来本院体检健康志愿者50例,作为健康对照组;抽取静脉血,测量并对比患者和志愿者红细胞沉降率(ESR)、C-反应蛋白(CPR)和人软骨糖蛋白-39水平等,并检查对比口唇腺体淋巴细胞病灶数和唾液流率等。结果原发性干燥综合征组患者外周血人软骨糖蛋白-39明显高于健康对照组志愿者(t=25.207,P0.001)。原发性干燥综合征患者外周血人软骨糖蛋白-39水平与口唇腺体淋巴细胞病灶数(r=0.46,P=0.001)、ESR(r=0.48,P=0.001)、CRP(r=0.70,P0.001)、RF(r=0.41,P=0.004)、IgG(r=0.50,P0.001)成正相关,与唾液流率(r=-0.42,P=0.003)成负相关。有并发症的原发性干燥综合征患者外周血人软骨糖蛋白-39水平(252.4±23.5)μg/L明显高于无并发症患者(174.6±21.7)μg/L,差异有统计学意义(t=11.678,P0.001)。结论人软骨糖蛋白-39可作为判断原发性干燥综合征疾病活动度的指标,其水平明显升高还可提示患者可能发生并发症,为较客观、全面地反映pSS病情的指标,可广泛应用于临床。     

ELISA法和电化学发光免疫法检测血清HBsAg结果比较分析

目的对酶联免疫吸附试验（ELISA）和电化学发光免疫法（ECLIA）检测血清中的乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）结果进行比较分析。方法采用ELISA和ECLIA 2种方法分别检测8 913例血清中的HBsAg。结果 ELISA法和ECLIA法检测出的总阳性数和总阳性率分别为519例占5.82%,451例占5.06%;以ECLIA法为参照,ELISA法假阴性率为0.67%,假阳性率为1.43%,相对敏感性为88.3%,相对特异性为98.5%二者的符合率为97.9%;403例阳性标本用ECLIA法复检,ELISA法的假阳性率为11.9%,相对敏感性为100%,相对特异性为50%,二者的符合率为88.1%;116例弱阳性标本用ECLIA法复检,ELISA法的假阳性率为69%,相对敏感性为100%,相对特异性为50%,二者的符合率为31%;8 394例阴性标本用ECLIA法复检,ELISA法的假阴性率为0.71%,相对敏感性为50%,相对特异性为100%,二者的符合率为99.3%。结论血清HBsAg ELISA法检测存在一定的假阴性率和假阳性率,敏感性和特异性较ECLIA法差,且随HBsAg浓度变化较大。ECLIA法快速、准确、敏感性、特异性更高。     

葡萄糖-6-磷酸异构酶抗原、抗体测定在类风湿关节炎诊断中的作用

目的探讨血清和关节液中葡萄糖-6-磷酸异构酶(G6PI)抗原和抗体含量变化与类风湿关节炎(RA)病情活动状态的关系。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定RA患者176例、其他免疫疾病患者35例、健康体检者100例的血清标本及RA患者33例、其他免疫疾病患者11例的关节液标本中G6PI抗原和抗体水平。结果 G6PI抗原在诊断RA中的敏感度和特异度分别为75.0%和93.3%;176例RA患者血清G6PI含量为(4.37±8.65)μg/mL,显著高于疾病对照组(0.07±0.07)μg/mL(P0.01)和健康对照组(0.34±1.30)μg/mL(P0.01);在RA组中,活动期患者血清G6PI含量为(7.61±10.69)μg/mL,显著高于缓解组(0.47±0.47)μg/mL(P0.01);关节液G6PI表达量也显著高于疾病对照组,分别为(1.39±0.58)μg/mL和(0.16±0.17)μg/mL(P0.05)。以波长450 nm吸光度值(A_(450nm))表示抗体含量,G6PI抗体的含量在RA组、疾病对照组以及健康对照组之间差异无统计学意义(P0.05),在RA活动组与非活动组之间差异无统计学意义(P0.05);关节液中G6PI抗体含量RA患者与疾病对照组差异无统计学意义(P0.05)。结论 G6PI抗原在RA患者中高表达,并且与疾病活动性有密切关系。因此G6PI抗原可以作为敏感度、特异性俱佳的RA辅助诊断指标,尤其对病情判断有重要作用。而G6PI抗体在RA的诊断中价值不大,与病情活动亦无关。     

应用国产SH120微量血液离心机检测红细胞比积方法学探讨——附1371例正常参考值调查

测定红细胞比积(Hct),有常量法和微量法二种,前者以Wintrobe法使用最广,但用血量大,需静脉采血,操作繁琐、费时。后者用血量少,且快速、简便,精确度高。我们使用国产SH 120微量血液离心机调查了1371例正常人Hct参考值,并就影响检测因素进行了探讨。