荧光定量PCR评价铜绿假单胞菌感染的实验研究

目的探讨FQ-PCR定量检测铜绿假单胞菌oprI基因的方法在快速诊断铜绿假单胞菌败血症，及快速判定抗生素体内疗效中的作用。方法（1）制备不同浓度的标准菌株并行药敏实验，找出敏感药物（丁胺卡那霉素）及非敏感药（苯唑西林钠）。（2）SD大鼠120只随机分为5组，分别取不同浓度的菌液尾静脉注入，于实验开始0h、12h、24h、48h各组分别麻醉6只大鼠，采血作血培养、FQ-PCR。（3）SD大鼠72只随机分为治疗组、处理组和对照组，均给予1×10^9CFu／ml尾静脉注入。随后治疗组立即给予敏感抗生素；处理组立即给予非敏感抗生素；对照组同时给予等量生理盐水，均于尾静脉注入。各组于首次注射后0h、12h、24h、48h分别麻醉6只大鼠，采血作血培养、FQ-PCR。结果（1）1×10^9CFu／ml、1×10^8CFU／ml组各时间段血培养均为阳性，FQ-PCR检测，均为阳性。（2）1×10^7CFU／ml、1×10^6CFU／ml组0h、12h血培养均为阳性，1×10^7CFU／ml组24h血培养为阳性，48h为阴性，而1×10^6CFU／ml组24h、48h血培养均为阴性。FQ-PCR检测1×10^7CFU／ml组0h、12h、24h为阳性，48h为阴性。1×10^6CFU／ml组0h、12h、为阳性24h、48h为阴性。（3）1×10^5CFU／ml组各时间段血培养均为阴性，FQ-PCR检测均为阴性。（4）处理后对照组、处理组各时间段血培养均为阳性，而处理后治疗组各时间段血培养均为阴性。FQ-PCR检测三组各时段均为阳性。结论（1）FQ-PCR诊断铜绿假单胞菌败血症与传统细菌培养比较其特异性吻合率达100％，虽灵敏度并未增加，但诊断时间明显缩短。（2）有效抗生素治疗后，运用FQ-PCR诊断灵敏度明显高于细菌培养。（3）利用FQ-PCR检测铜绿假单胞菌oprI基因的拷贝数的变化可能有助于抗生素体内敏感性的判断。     

丙型肝炎患者HCV RNA与转氨酶的关系

目的了解丙型肝炎病毒核糖核酸（HCVRNA）与天冬氨酸转移酶（AST）及丙氨酸氨基转移酶（ALT）之间的关系。方法对119例（自2008年1月～2009年5月）来自湖南省人民医院住院和门诊丙型肝炎患者进行HCVRNA、抗-HCV及AST、ALT检测。采用荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测标本中的HCVRNA,同时采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测抗-HCV,用全自动生化检测仪测定AST、ALT水平。分析分别在HCVRNA大于临界值组和HCVRNA小于临界值组的病人血清中转氨酶与其的关系。结果本研究的119例标本中有116例抗-HCV均为阳性,其中HCVRNA高于上限值（≥1000copies/mL）87例,二都有很好的相关性;共有70例存在ALT异常,73例存在AST异常,ALT、AST水平与HCVRNA含量对数值无显著相关性,但ALT、AST阳性率与HCVRNA大于临界值有一定的吻合关系。结论HCVRNA是反映HCV复制的可靠指标。结合AST、ALT结果可帮助临床了解HCV在体内的复制状况及肝脏的损伤情况。RT-PCR法检测HCVRNA具有非常好的临床应用价值。     

抗CCP抗体和RF对类风湿性关节炎患者诊断价值的比较

目的:评价抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体和类风湿性关节炎因子(RF)在类风湿性关节炎(RA)中的意义。方法:对90例RA患者、30例其他疾病患者和35例健康对照组血清用ELISA法检测抗CCP抗体、免疫散射比浊法检测RF,比较两种抗体单独或联合检测对诊断RA的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、总符合率及Youden指数;探讨抗CCP抗体和RF的相关性,通过绘制ROC曲线,计算ROC曲线下面积(ACU)。结果:RA组抗CCP抗体和RF阳性率均高于其他疾疾患者和健康对照组(P<0.05);RF诊断RA的敏感性高于抗CCP抗体;抗CCP抗体对论断RA的其它5项指标均高于RF;抗CCP抗体和RA联合检测对RA的诊断的敏感性明显高于抗CCP抗体、RF两项检测指标;另外,抗CCP抗体和RA联合检测对RA的诊断的的阴性预测值,总符合率及Yiuden指数也高于抗CCP抗体、RF两项检测指标。抗CCP抗体、RF及两者联合检测ROC曲线下面积(ACU)均>0.5,并且抗CCP抗体与RF联合检测AUC大于抗CCP抗体及RF的AUC。结论:抗CCP抗体对RA有较高的诊断价值。和RF联合检测对诊断RA有重要意义。     

HBV DNA免提取核酸荧光定量PCR检测法应用评价

目的评价乙型肝炎病毒核酸免提取荧光定量PCR方法(一步法)对不同病毒载量时检测性能。方法评价试剂为圣湘公司HBV DNA荧光定量PCR检测免提取试剂盒,对照试剂为匹基公司、科发公司、达安公司3家煮沸核酸提取法试剂盒。将4种试剂盒按各自要求对配套的不同浓度标准品、阴性、临界值的反应曲线考核其线性和灵敏度。另检测1份已知浓度质控品、5份未知浓度样本血清考核其准确性、可比较性。检测仪器为瑞士罗氏公司Light Cycler荧光定量仪。结果一步法、匹基公司、科发公司、达安公司4家标准品浓度相关性R2分别为0.992、0.998、0.999及0.963,线性均满意。4个不同浓度标准品扩增曲线图形:一步法曲线比其他3家更为光滑,呈间距均匀的S形抛物线,2次结果重复曲线更趋重迭。对已知定值为(1.5E+06)IU/mL的质控品检测:一步法、匹基公司、科发公司、达安公司相应结果为(1.16E+06)、(5.27E+05)、(4.32E+05)及(4.90E+06)IU/mL,一步法最接近靶值。5份血清结果显示:4种试剂盒除P公司对2号样本结果为低于检出下限外,其他对1号、2号、3号、5号检出结果均与其他3家接近,可为临床接受。4号样本为一个低值临界范围,出现低于报告限、低值及临界追踪值3种结果现象。结论 4家HBV DNA荧光定量PCR检测检测试剂线性结果均满意,对中、高浓度样本检测结果较接近,但在低浓度临界范围检测报告可能会对临床诊断带来误导,需追踪复查。HBV PCR一步法检测技术免除了核酸高温裂解提取步骤,操作简便,人为误差减少,性能稳定,有利提高检测灵敏度、结果准确性。     

两种HBV DNA荧光定量试剂盒检测结果比较

目的 比较两种乙型肝炎病毒(HBV)荧光定量PCR检测试剂盒的临床性能.方法 采用两种HBV荧光定量PCR检测试剂盒对526例临床样本进行检测,比较两种试剂的灵敏度、检测结果的一致性及相关性.结果 两种试剂阳性一致性为97.44%,阴性一致性为95.77%,总一致性为96.77%,两种试剂具有较好的相关性,相关系数r=0.965.结论 HBV一步法试剂具有操作简便、定量准确、灵敏度较高等优点,是一种较好的临床HBV快速定量检测试剂.     

495例男性患者人乳头瘤病毒感染状况分析

目的 了解男性患者人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染率、亚型分布以及不同年龄阶段HPV感染状况,为男性预防治疗HPV感染提供科学依据。方法 采用快速导流杂交法对2014年6月17日－2015年6月5日在湖南省人民医院皮肤性病科、泌尿外科门诊、泌尿男性科门诊就诊的495例男性患者进行21种HPV基因型的分型检测。结果 ①HPV阳性总检出率为23.23%(115/495),其中单一HPV基因型感染占84.35%(97/115),双层感染占13.91%(16/115),三层感染和四层感染各1例。②HPV感染率最高是HPV6,感染率为10.51%(52/495);最低亚型为HPV42、HPV43、HPV44、HPV59、HPV56,其感染率都为0.20%。③除<21岁的检查者没有检出HPV阳性患者外,其它各年龄组检出率在11.11%~32.14%之间,21~70岁各年龄组间HPV阳性率差异无统计学意义(χ²=2.729,P>0.05)。结论 男性患者HPV感染率处于较高水平,HPV感染率最高的亚型为HPV6。男性易感染年龄集中于21~50岁之间。建议处于婚姻阶段的男女双方以及婚后夫妻要加强HPV筛查,防止相互交叉感染。     

抗CCP抗体和RF对类风湿关节炎患者诊断价值的比较

目的 评价抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体和类风湿性关节炎因子(RF)在类风湿性关节炎(RA)中的意义. 方法 对90例RA患者、30例其他疾病患者和35例健康对照组血清用ELISA法检测抗CCP抗体、免疫散射比浊法检测RF,比较2种抗体单独或联合检测对诊断RA的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值、总符合率及Youden指数;探讨抗CCP抗体和RF的相关性,通过绘制ROC曲线,计算ROC曲线下面积(ACU). 结果 RA组抗CCP抗体和RF阳性率均高于其他疾病患者和健康对照组(P<0.0125);RF诊断RA的敏感性高于抗CCP抗体;抗CCP抗体对论断RA的其他5项指标均高于RF;抗CCP抗体和RA联合检测对RA的诊断的敏感性明显高于抗CCP抗体、RF两项检测指标;另外,抗CCP抗体和RA联合检测对RA的诊断的阴性预测值,总符合率及Youden指数也高于抗CCP抗体、RF两项检测指标.抗CCP抗体、RF及两者联合检测ROC曲线下面积(ACU)均>0.5,并且抗CCP抗体与RF联合检测AUC大于抗CCP抗体及RF的AUC. 结论 抗CCP抗体对RA有较高的诊断价值.和RF联合检测对诊断RA有重要意义.     

乙型肝炎患者前S2抗原,抗体检测与临床

近几年来，有关乙型肝炎病毒前S2蛋白研究取得了突破性进展。乙型肝炎病毒包膜由蛋白质、碳水化合物及脂质组成，除了HBsAg作为主要蛋白外，还有另外两种蛋白，这两种蛋白由DNA序列编码，位于S基因框架内，即前S1蛋白和前S2蛋白，它们与HBV感染与复制有着密切的关系，可作为急性HBV感染的一个新的检验系统。1检测对象与方法1．1检测对象66例血清标本均选自我院门诊及住院病人，经ELISA两对半检查，并结合临床诊断确诊的乙肝患者，另外还选入甲肝病人20例，丙肝病人10例，均符合第六次全国病毒性肝炎会议标准。血清分离后－20℃保存…     

AFP、AAT、r-GT联合测定对原发性肝癌诊断的意义

为提高原发性肝癌的检出率,我们对已确诊的59例原发性肝癌病例采用甲胎蛋白（AFP）、α－抗胰蛋白酶（AAT）及r－－谷氨酰转肽酶（r－GT）三项血清联合检测与单项检测对比,结果表明：原发性肝癌患者单项检测阳性率AFP为79．7％、AAT66．1％r－GT47．4％,而三项联合检测阳性率为96．6％。60例健康成人对照三项检测均为阴性。     

兔急性心肌梗死模型的建立与心功能、病理演变的动态研究

目的：建立兔急性心肌梗死模型,并评估梗死后的心功能及病理动态变化。材料与方法35只新西兰大白兔采用开胸结扎冠状动脉左前降支（LAD）制作心肌梗死模型,术后1d、1周、2周、4周、8周行超声心动图检查,同时抽取静脉血检测脑钠肽（BNP）浓度,并与术前及前一时间点比较。制作心肌病理切片,行HE染色并观察病理变化。结果制模总体死亡率为28.6%（10/35）。术后1周、2周、4周左心室舒张末期内径（LVEDD）、收缩末期内径（LVESD）均较术前和前一时间点增大（P<0.05）。术后1 d、1周、2周、4周左心室射血分数（LVEF）、短轴缩短率（LVFS）均较术前和前一时间点降低（P<0.05）。BNP术后1 d开始升高,1周达峰值,然后逐渐下降,至8周仍持续升高（P<0.01）。病理切片呈典型的心肌细胞变性、坏死、纤维化、钙化、瘢痕形成等动态变化。结论开胸结扎兔冠状动脉LAD是建立急性心肌梗死模型的有效方法;兔急性心肌梗死后心功能明显降低、BNP明显升高,其变化与病理演变密切相关。