丝切蛋白在成骨细胞细胞骨架改建中的作用探讨

目的 采用流体剪切力加载成骨细胞,通过观察细胞骨架改建和测定丝切蛋白及磷酸化丝切蛋白的含量,探讨丝切蛋白在流体剪切力引起成骨细胞细胞骨架改建中的作用.方法 采用1.2 Pa的流体剪切力作用于成骨细胞0(空白对照组)、15、30、45、60、120 min后,蛋白质印迹法测定细胞内丝切蛋白及磷酸化丝切蛋白的含量,采用异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽染色观察纤维型肌动蛋白的变化.结果 成骨细胞受流体剪切力刺激后,随加载时间延长,细胞内磷酸化丝切蛋白含量持续升高.流体剪切力作用60 min内丝切蛋白随加载时间延长有所下降,但加载120 min时细胞内丝切蛋白含量(0.254±0.026)为加载60 min(0.162±0.004)的1.5倍.随流体剪切力作用时间延长,各组细胞纤维型肌动蛋白染色逐渐增强,纤维增粗;加载120 min时的平均荧光强度(42.93±6.41)为空白对照组(15.41±3.60)的2.8倍(P＜0.05).结论 流体剪切力刺激可通过丝切蛋白磷酸化,使成骨细胞细胞骨架发生改建.     

抑制细胞骨架改建对流体剪切力作用下成骨细胞增殖与分化影响研究

目的 探讨RNA干扰抑制细胞骨架改建对流体剪切力(FSS)下成骨细胞增殖和分化的影响.方法 对小鼠颅骨分离的成骨细胞分别给予RNA干扰、阴性RNA干扰两种处理后,进行FSS加载或不加载.分别应用噻唑蓝(MTT)比色法观测细胞增殖、检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性、采用流式细胞仪检测细胞周期,并进行统计分析.结果 在无FSS加载条件下,单纯应用RNA干扰方法抑制细胞骨架改建,并不能促进成骨细胞的细胞周期中处于S期的细胞百分比[(3.600±0.447)%与(3.420±0.217)%,t=-0.810,P>0.05]、成骨细胞增殖性能(0.208±0.724与0.211±0.044,t=0.251,P>0.05)及ALP活性(0.095±0.001与0.090±0.020,t=-1.857,P>0.05)增高;FSS能使成骨细胞的细胞周期中处于S期的细胞百分比[(11.110±3.840)%>(3.420±0.217)%,t=-4.460,P<0.05]、成骨细胞的增殖性能(0.336±0.029>0.211±0.044,t=-13.878,P<0.05)及ALP的活性(0.110±0.010>0.090±0.012,t=-7.937,P<0.05)增高;RNA干扰处理可显著提高FSS下的细胞周期中处于S期的细胞百分比[(25.140±3.329)%>(3.600±0.447)%,t=-14.339,P<0.05]、成骨细胞增殖性能(0.480±0.953>0.208±0.724,t=-13.454,P<0.05)及ALP活性(0.140±0.006>0.095±0.001.t=-7.384,P<0.05).抑制细胞骨架改建与FSS作用两因素对提高成骨细胞的细胞周期中处于S期的细胞百分比(F=240.125,P<0.05)、成骨细胞增殖性能(F=44.550,P<0.05)及ALP活性(F=13.798,P<0.05)存在正交互作用.结论 采用RNA干扰抑制细胞骨架改建,可以 促进FSS作用下成骨细胞的增殖和分化.     

铸瓷贴面和烤瓷全冠在口腔美容修复中的效果比较

目的 对比铸瓷贴面和烤瓷全冠在口腔美容修复中的效果。方法 选取2013年1月~2017年9月于我院治疗的124例有活髓牙牙体缺损患者为主要研究对象,随机进行分组,对照组73例用钴铬烤瓷全冠修复,观察组51例用e-max铸瓷贴面修复,对两组患者满意度,并发症等对比分析。结果 观察组患者的美容满意度为96.08%,对照组患者的满意度为80.82%,两组差异对比,有统计学意义（P＜0.05）;观察组随访期间的并发症发生率为7.84%,对照组的并发症发生率为17.81%,两组差异对比,有统计学意义（P＜0.05）。结论 在口腔美容的修复治疗上,铸瓷贴面的修复效果优于烤瓷全冠,可有效提高牙齿的美观度,且并发症发生率低,长期治疗效果颇为理想。     

口腔粘结材料在烤瓷冠修复中的粘结效果

目的:对烤瓷冠修复中应用口腔粘结材料的粘结效果讨论研究。方法:共选取2015年9月至2017年7月广州市番禺中心医院烤瓷冠修复患者200例为观察样本,以随机数字表法为分组原则将其分成两组,医护人员将聚羧酸锌水门汀粘固剂和日本富士九玻璃离子分别应用于观察组和对照组患者烤瓷冠修复中,对比分析不同组别患者并发症发生率及牙龈指数变化等。结果:虽然不同组别患者应用不同粘固剂,但是观察组和对照组患者并发症发生情况和牙龈指数变化情况组间比较差异,均不存在统计学意义(P0.05),两种粘固剂粘结效果相当。结论:在烤瓷冠修复中应用口腔粘结材料能够达到预期烤瓷冠修复效果,对于粘固剂的选取本文作者研究的两种均可,临床及预后效果均相似,可以根据治疗实际情况选取任意一种粘固剂。     

抑制细胞骨架改建对流体剪切应力下成骨细胞胞外信号调节激酶激活的影响

目的 探讨RNA干扰抑制细胞骨架改建对流体剪切应力(fluid shear stress,FSS)下原代成骨细胞胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK1/2)激活的影响.方法 酶消化法原代培养BALB/c小鼠成骨细胞,分别进行RNA干扰(干扰+加载组)和阴性RNA干扰(单纯加载组),并加载0、5、15、30、60 min 1.2 Pa的FSS,检测胞质中磷酸化ERK1/2(phosphorylationERKI/2,P-ERK)和ERK1/2的变化情况,并对结果进行组间双因素方差分析和组内单因素方差分析.结果 单纯加载组加载0、5、15、30、60 min FSS后成骨细胞P-ERK/ERK比值差异有统计学意义(分别为0.047±0.031、0.253±0.137、0.390±0.155、0.613±0.123、0.680±0.108)(P＜0.01).对P-ERK/ERK比值而言,RNA干扰因素与FSS加载因素间存在交互效应(P＜0.01).干扰+加载组FSS作用5和15 min时,P-ERK/ERK比值(分别为0.623±0.129和0.623±0.064),与0 min (0.440±0.032)差异有统计学意义(P＜0.05);加载30 min时P-ERK/ERK比值(0.333±0.086)降到基线水平;加载60 min时,P-ERK/ERK比值(0.667±0.064)再次显著升高并达高峰,与0 min差异有统计学意义(P＜0.01).结论 FSS可快速激活原代成骨细胞ERK1/2途径;RNA干扰抑制细胞骨架改建可加速FSS介导的ERK1/2途径的激活,从而提高成骨细胞ERK1/2对FSS的敏感性.     

siRNA沉默小鼠原代成骨细胞LIMK2基因的实验研究

目的 探讨采用RNA干扰抑制原代成骨细胞中LIMK2的表达及其抑制效率,为进一步研究LIMK2基因的作用奠定基础.方法 针对小鼠LIMK2基因,化学合成3条siRNA,分别编号为R1、R2、R3,用脂质体分别介导转染到小鼠原代成骨细胞中,转染后24、48 h提取细胞的总RNA和总蛋白,分别进行RT-PCR和Western blot检测,研究3条siRNA 在不同时间点对LIMK2基因的抑制效率.结果 RT-PCR结果 显示编号为R3的siRNA对LIMK2 mRNA表达的抑制效率最高,两组应用R3 siRNA后的LIMK2 mRNA表达量分别为对照组的19.30%(转染后24 h)、18.63%(转染后48 h);Western blot检测显示编码为R3的siRNA对LIMK2蛋白表达的抑制效果最明显,两组应用R3 siRNA的LIMK2蛋白表达量分别仅为空白对照组的1.32%(转染后24 h)、1.19%(转染后48 h).结论 编号为R3的siRNA可以很好地抑制小鼠原代成骨细胞的LIMK2表达.