细胞色素P450酶2A6基因多态性与123例汉族吸烟人群牙周炎及炎性细胞因子表达水平的关系

目的: 检测细胞色素P450酶2A6（CYP2A6）基因多态性与汉族吸烟人群牙周炎及炎性细胞因子表达水平的关系。方法: 收集2018年10月—2019年10月常州市口腔医院收治的123例吸烟牙周炎患者为实验组,同期125例非吸烟牙周炎患者为对照组。收集患者一般资料,包括年龄、性别、体质量指数（BMI）、咀嚼、刷牙习惯和磨牙情况;检测菌斑指数（PLI）、牙龈出血指数（BI）、牙周探诊深度（PD）和附着丧失（AL）。采用PCR扩增CYP2A6;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测龈沟液中炎性细胞因子白介素（IL）17、IL-1、IL-6、IL-23和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。采用SPSS 25.0软件包对数据进行统计学分析。结果: 2组性别,PLI,龈沟液中IL-17、IL-1、IL-6、IL-23、TNF-α水平存在显著差异（P<0.05）。对所有样品进行PCR扩增,未扩增出的23例判定为CYP2A6缺失型（CYP2A6del）,其中,实验组5例、对照组18例;扩增出的225例判定为CYP2A6野生型（CYP2A6wt）,其中,实验组118例、对照组107例。2组CYP2A6基因型存在显著差异（P<0.05）。实验组不同CYP2A6基因型IL-1水平、PLI存在显著差异（P<0.05）;对照组不同CYP2A6基因型IL-17水平、PLI存在显著差异（P<0.05）。结论: CYP2A6基因型在汉族人群牙周炎患者是否吸烟中存在差异,但与炎性细胞因子水平的关系尚不明确。     

抑制细胞骨架改建对流体剪切力作用下成骨细胞增殖与分化影响研究

目的 探讨RNA干扰抑制细胞骨架改建对流体剪切力(FSS)下成骨细胞增殖和分化的影响.方法 对小鼠颅骨分离的成骨细胞分别给予RNA干扰、阴性RNA干扰两种处理后,进行FSS加载或不加载.分别应用噻唑蓝(MTT)比色法观测细胞增殖、检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性、采用流式细胞仪检测细胞周期,并进行统计分析.结果 在无FSS加载条件下,单纯应用RNA干扰方法抑制细胞骨架改建,并不能促进成骨细胞的细胞周期中处于S期的细胞百分比[(3.600±0.447)%与(3.420±0.217)%,t=-0.810,P>0.05]、成骨细胞增殖性能(0.208±0.724与0.211±0.044,t=0.251,P>0.05)及ALP活性(0.095±0.001与0.090±0.020,t=-1.857,P>0.05)增高;FSS能使成骨细胞的细胞周期中处于S期的细胞百分比[(11.110±3.840)%>(3.420±0.217)%,t=-4.460,P<0.05]、成骨细胞的增殖性能(0.336±0.029>0.211±0.044,t=-13.878,P<0.05)及ALP的活性(0.110±0.010>0.090±0.012,t=-7.937,P<0.05)增高;RNA干扰处理可显著提高FSS下的细胞周期中处于S期的细胞百分比[(25.140±3.329)%>(3.600±0.447)%,t=-14.339,P<0.05]、成骨细胞增殖性能(0.480±0.953>0.208±0.724,t=-13.454,P<0.05)及ALP活性(0.140±0.006>0.095±0.001.t=-7.384,P<0.05).抑制细胞骨架改建与FSS作用两因素对提高成骨细胞的细胞周期中处于S期的细胞百分比(F=240.125,P<0.05)、成骨细胞增殖性能(F=44.550,P<0.05)及ALP活性(F=13.798,P<0.05)存在正交互作用.结论 采用RNA干扰抑制细胞骨架改建,可以 促进FSS作用下成骨细胞的增殖和分化.     

抑制细胞骨架改建对流体剪切应力下成骨细胞胞外信号调节激酶激活的影响

目的 探讨RNA干扰抑制细胞骨架改建对流体剪切应力(fluid shear stress,FSS)下原代成骨细胞胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK1/2)激活的影响.方法 酶消化法原代培养BALB/c小鼠成骨细胞,分别进行RNA干扰(干扰+加载组)和阴性RNA干扰(单纯加载组),并加载0、5、15、30、60 min 1.2 Pa的FSS,检测胞质中磷酸化ERK1/2(phosphorylationERKI/2,P-ERK)和ERK1/2的变化情况,并对结果进行组间双因素方差分析和组内单因素方差分析.结果 单纯加载组加载0、5、15、30、60 min FSS后成骨细胞P-ERK/ERK比值差异有统计学意义(分别为0.047±0.031、0.253±0.137、0.390±0.155、0.613±0.123、0.680±0.108)(P＜0.01).对P-ERK/ERK比值而言,RNA干扰因素与FSS加载因素间存在交互效应(P＜0.01).干扰+加载组FSS作用5和15 min时,P-ERK/ERK比值(分别为0.623±0.129和0.623±0.064),与0 min (0.440±0.032)差异有统计学意义(P＜0.05);加载30 min时P-ERK/ERK比值(0.333±0.086)降到基线水平;加载60 min时,P-ERK/ERK比值(0.667±0.064)再次显著升高并达高峰,与0 min差异有统计学意义(P＜0.01).结论 FSS可快速激活原代成骨细胞ERK1/2途径;RNA干扰抑制细胞骨架改建可加速FSS介导的ERK1/2途径的激活,从而提高成骨细胞ERK1/2对FSS的敏感性.     

血小板源性生长因子与流体剪切力对成骨细胞增殖及c-fos表达的影响

目的研究血小板源性生长因子(PDGF)与流体剪切力(FSS)对成骨细胞增殖及c-fos表达的影响。方法将0、10、30和50 ng/ml的PDGF作用于成骨细胞,CCK-8、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)分别检测细胞增殖和c-fos m RNA表达;将PDGF作用于成骨细胞,同时以12 dyne/cm2的FSS加载1 h,分别采用CCK-8、实时荧光定量PCR和Western blot检测成骨细胞增殖、c-fos m RNA和蛋白的表达。结果 PDGF或FSS单独作用均能促进成骨细胞增殖(FFSS=6.500,PFSS<0.05;FPDGF=6.077,PPDGF<0.05),并使c-fos m RNA表达水平显著升高(FFSS=6.425,PFSS<0.05;FPDGF=7.549,PPDGF<0.05);但PDGF与FSS间不存在协同作用(F增殖=1.826,P增殖>0.05;Fc-fos m RNA=2.101,Pc-fos m RNA>0.05;Fc-fos蛋白=1.561,Pc-fos蛋白>0.05)。结论 PDGF单独作用或与FSS联合应用均可促进成骨细胞增殖和c-fos基因的表达,但PDGF与FSS间不存在协同作用。