rhTPO在大肠杆菌中的表达、纯化及生物活性分析

目的：探讨人促血小板生成素(human thromlbopoietin，hTPO)在大肠杆菌中表达、分离纯化及生物学活性初步鉴定。方法：利用RT-PCR法从人胎肝细胞中扩增目的基因片段，将其定向插入pQE30表达质粒T5启动子下游的多克隆区，转化大肠杆菌M15，得到pQE30-TPO的工程菌，诱导目的蛋白表达、纯化。将表达产物给血小板减少模型小鼠尾静脉注射，观察注射后不同时间血小板量的改变。结果：经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio-β-D-galactoside IPTG)诱导培养，该工程菌可以产生单一特异性的高表达蛋白条带。将纯化后的表达蛋白注射小鼠，结果显示对实验性小鼠血小板减少症具有一定的治疗作用。结论：在大肠杆菌中成功地高效表达了重组hTPO，该产物具有促血小板生成的活性。     

中药对糖皮质激素受体影响的研究进展

对近年来有关常用中药对糖皮质激素受体(GR)的调节作用的文献资料加以综合归纳，以明确其发挥作用的有效成分及其作用机理，为中药的临床应用奠定基础。     

一种新的检测胃黏膜幽门螺杆菌荧光定量PCR法

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)是全球最常见的人类感染菌之一,其被认为是慢性胃炎、消化性溃疡的主要原因,且与胃癌的发生密切相关[1,2]。WHO将HP列为第1类致病因子。因此快速准确地检测HP感染对大众健康具有重要意义。实时荧光定量PCR(fluorogenic quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)技术具有高灵敏度和高特异性的优点,并能对细菌进行定量,国内外已有多项研究应用FQ-PCR法检测HP不同的基因片段。本文以HP尿素酶     

周期性张应力对成纤维细胞增殖能力的影响

目的探讨周期性张应力对体外培养的小鼠胚胎成纤维细胞增殖特性的影响。方法将体外培养的L929细胞分为加力组与对照组,加载周期性张应力的细胞为加力组,不加力的为对照组。应用细胞应力加载系统对L929细胞加载8%形变率、0.1 Hz的周期性张应力,分别在加力1 h、2 h、4 h和8 h后应用流式细胞仪分析细胞周期;四甲基偶氮唑盐比色法分析细胞的增殖活性。结果加力组加力1 h(q=5.532,P<0.01)与2 h(q=6.569,P<0.01),S期细胞比率(S-phase fraction,SPF)较对照组出现了下降,并伴有细胞数量的增加(P>0.05);加力组在加力4 h后,SPF较对照组下降(P>0.05),细胞数量增加(P>0.05);加力组在加力8 h后,SPF较对照组开始出现增高(q=4.287,P<0.05),细胞数量显著增加(q=5.202,P<0.01)。结论 8%形变率、0.1 Hz的周期性张应力引起细胞增殖活性的变化,表现为随应力加载时间的延长,细胞的增殖活性出现先被抑制、后被促进的改变。     

组织芯片与普通切片检测结直肠癌相关基因表达比较

目的通过对组织芯片和普通切片的比较,探讨组织芯片技术在免疫组化实验中的有效性。方法选择84例人结直肠癌标本蜡块,分别制作普通切片和组织芯片,采用免疫组化技术检测促凋亡基因（Bax）、谷胱甘肽-S-转移酶（GST-π）、耐药蛋白（LRP）、P-糖蛋白（P-gp）和DNA拓扑酶Ⅱ（TopoⅡ）的表达。结果组织芯片与普通切片Bax、GST-π、LRP、P-gp和TopoⅡ的表达呈显著正相关（r=0.795-0.867,P〈0.001）,两者Bax、GST-π、LRP、P-gp及TopoⅡ的表达一致率分别达90.24%、93.90%、91.46%、90.24%、92.68%。组织芯片与普通切片Bax、GST-π、LRP、P-gp和TopoⅡ表达比较,差异无统计学意义（χ2=0.125~1.500,P〉0.05）。结论采用规范的组织芯片制作程序,2 mm直径的组织芯片在进行免疫组化染色时能够代表普通切片。该技术是一种可靠的、有代表性的、有效的高通量组织分析工具。     

应激性高糖血症对急性脑梗死病人TNF-α和IL-6水平及预后影响

目的探讨应激性高糖血症对急性脑梗死病人血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平及预后的影响。方法选择191例诊断明确的急性脑梗死病人,其中并发应激性高糖血症103例,血糖正常88例。分别用酶联免疫吸附法(ELISA法)及放射免疫分析法(RIA法)测定其血浆TNF-α、IL-6水平,并比较两组的预后。结果脑梗死并应激性高糖血症组血浆TNF-α、IL-6水平较血糖正常组显著升高(t=63.85、7.21,P<0.01),治疗有效率显著低于血糖正常组(χ2=9.61,P<0.01),病死率高于血糖正常组(χ2=6.43,P<0.05),预后较血糖正常组差(u=-4.62,P<0.01)。结论应激性高糖血症可引起急性脑梗死病人血浆TNF-α、IL-6水平升高,并使病人预后不良。     

肺上皮样血管内皮瘤1例

患者男性,45岁.1个月前感冒后出现全身乏力、咽部不适、鼻塞、流涕、打喷嚏、痰中带血块等症状.入院前4天患者晚上自觉发热,测体温37 ℃.CT及增强CT检查示左肺上叶结节灶,双下肺纹理重,肺癌不能除外(图1).在本院做痰培养,抗酸杆菌染色阴性.临床诊断为左肺上叶结节性质待查.     

组织芯片与普通切片检测结直肠癌相关基因表达比较

目的 通过对组织芯片和普通切片的比较,探讨组织芯片技术在免疫组化实验中的有效性.方法 选择84例人结直肠癌标本蜡块,分别制作普通切片和组织芯片,采用免疫组化技术检测促凋亡基因(Bax)、谷胱甘肽-S-转移酶(GST-π)、耐药蛋白(LRP)、p-糖蛋白(P-gp)和DNA拓扑酶Ⅱ(TopⅡ)的表达.结果 组织芯片与普通切片Bax、GST-π、LRP、P-gp和TopoⅡ的表达呈显著正相关(r=0.795～0.867,P<0.001),两者Bax、GST-π、LRP、P-gp及TopoⅡ的表达一致率分别达90.24%、93.90%、91.46%、90.24%、92.68%.组织芯片与普通切片Bax、GST-π、LRP、P-gp和TopoⅡ表达比较,差异无统计学意义(χ2=0.125～1.500,P>0.05).结论 采用规范的组织芯片制作程序,2mm 直径的组织芯片在进行免疫组化染色时能够代表普通切片.该技术是一种可靠的、有代表性的、有效的高通量组织分析工具.     

慢性便秘患者血清中5-羟色胺、生长抑素的表达及意义

目的检测慢性便秘（CC）患者血清中5-羟色胺（5-HT）、生长抑素（SS）的表达水平及其影响因素。 方法收集自2016年10月至2017年2月于青岛市市立医院干部保健科就诊符合慢性便秘诊断标准的患者48例,其中男性31例,女性17例,平均年龄（70.0±12.7）岁,对照组为37例无便秘患者,男性24例,女性13例,平均年龄（64.4±9.0）岁。采用酶联免疫吸附实验法测定入组患者血清中5-HT、SS的表达水平;正态分布的计量资料采用（ ±s）表示,两组间比较采用t检验进行统计学分析。 结果慢性便秘患者血清中5-HT的含量为（23.30±6.57）pg/mL明显低于无便秘者（29.61±9.49）pg/mL,两者差异有统计学意义（t=-3.624,P=0.001）;而慢性便秘患者血清中SS的含量为（20.82±5.96）pg/mL明显高于对照组（16.92±6.47）pg/mL,差异有统计学意义（t=2.886,P=0.005）;不同年龄（t=-0.762,P=0.450）,不同性别（t=-0.907,P=0.369）,不同伴随症状如腹痛（t=0.894,P=0.376）、腹胀（t=-0.711,P=0.480）、排便费力（t=-1.534,P=0.132）、排便不尽感（t=1.339,P=0.187）的慢性便秘患者血清中5-HT的表达差异均无统计学意义（P>0.05）;不同年龄（t=-0.694,P=0.491）,不同性别（t=-0.028,P=0.977）,有无临床伴随症状如腹痛（t=-0.095,P=0.925）、腹胀（t=0.546,P=0.587）、排便费力（t=-1.391,P=0.171）、排便不尽感（t=0.110,P=0.913）的慢性便秘患者血清中SS的表达差异均无统计学意义（P>0.05）。 结论5-HT、SS在慢性便秘患者血清中的表达有其特点,年龄、性别及有无临床伴随症状对便秘患者血清中5-HT、SS的表达无明显影响。     

周期性张应力下人牙周膜成纤维细胞结缔组织生长因子的表达

背景：前期研究发现,周期性张应力在一定时间内可以诱导人牙周膜成纤维细胞增殖。 目的：观察周期性张应力对人牙周膜成纤维细胞表达结缔组织生长因子的影响;明确JNK、p38MAPK、PI3K信号通路在周期性张应力诱导人牙周膜成纤维细胞表达结缔组织生长因子过程中的作用。 方法：采用多通道细胞牵张应力加载系统对体外培养的人牙周膜成纤维细胞分别给予周期性张应力刺激1,6,12,24 h,并以未加力组为对照组。对加力12 h的细胞分别添加JNK、p38MAPK、PI3K信号通路特异性抑制剂预处理,并与未加抑制剂的细胞作对比。应用ELISA法检测培养细胞分泌到上清液中的结缔组织生长因子蛋白;应用荧光定量PCR技术检测细胞结缔组织生长因子mRNA的表达。 结果与结论：加载周期性张应力组与对照组相比较,1 h人牙周膜成纤维细胞表达结缔组织生长因子开始增强、6 h表达明显增强,12 h达最高峰值、24 h表达开始下降。加入JNK信号通路特异性抑制剂后,人牙周膜成纤维细胞表达结缔组织生长因子出现下降;而加入p38MAPK信号通路和PI3K信号通路的特异性抑制剂后结缔组织生长因子表达未发生明显改变。提示在一定时间范围内,周期性张应力引起结缔组织生长因子mRNA与蛋白水平的表达与时间呈依赖性升高;其后随着时间的延长,结缔组织生长因子的表达则开始下降。周期性张应力通过JNK通路的介导调控人牙周膜成纤维细胞结缔组织生长因子的表达。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程