柚皮素通过环核苷酸通路拮抗血小板聚集的体外研究

目的:探讨柚皮素拮抗二磷酸腺苷(ADP)诱导血小板聚集的作用机制。方法:采用ELISA检测柚皮素对ADP诱导的大鼠血小板内环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)水平的影响。采用高效液相法检测柚皮素对血小板磷酸二酯酶(PDE)活性影响。采用Western blot检测柚皮素对ADP刺激的血小板内血管扩张刺激磷蛋白(VASP)磷酸化形式p-VASP(Ser157)、p-VASP(Ser239)的蛋白水平的影响。分别给予蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89、蛋白激酶G(PKG)抑制剂Rp-8-Br-PET-cGMPS和蛋白激酶C(PKC)抑制剂GF109203X预先孵育血小板后,再用柚皮素处理,然后给予ADP刺激,Western blot检测p-VASP(Ser239)蛋白水平。采用血小板聚集仪进一步观察PKA抑制剂、PKG抑制剂预先孵育血小板是否影响柚皮素对ADP诱导血小板聚集的抑制作用。结果:柚皮素剂量依赖性地升高ADP抑制的血小板内cGMP水平,而并不改变cAMP水平。柚皮素还能显著升高血小板PDE活性。Western blot结果显示,柚皮素可明显升高由ADP抑制的p-VASP(Ser239)水平,但不影响p-VASP(Ser157)的蛋白水平,预先孵育PKG或PKC抑制剂并不影响柚皮素对p-VASP(Ser239)蛋白表达的作用,而预先孵育PKA抑制剂后,则能抑制柚皮素对p-VASP(Ser239)蛋白表达的作用。PKA抑制剂能阻断柚皮素对血小板聚集的拮抗作用,而PKG抑制剂并不影响其作用。结论:柚皮素可能通过升高血小板内cGMP水平和激活PKA依赖的信号通路来介导VASP的磷酸化,从而发挥抗血小板聚集的作用。     

补中益气汤不同黄芪药量对脾气虚大鼠糖代谢酶的影响

目的：研究补中益气汤不同黄芪药量对脾气虚证大鼠糖代谢相关酶的影响。方法：采用“五味偏食＋游泳力竭＋控制饮食”多因素法建立脾气虚证大鼠模型,并随机分为补中益气汤组、2倍黄芪组、1／2倍黄芪组和脾气虚模型纽,分别给予相应的药物治疗。观察各组大鼠生物学体征变化,比较各组大鼠肝组织GK酶及血清LDH、SDH和IDH酶活性差异。结果：与模型组比较,补中益气汤组大鼠血清LDH水平有所提高（P〈0．05）,肝组织GK活力有所降低（P〈0．05）,2倍黄芪组在LDH、GK活力方面亦有所改善,但没有补中益气汤明显,而1／2倍黄芪组则变化不大（P〉0．05）;各组大鼠血清SDH和IDH活性无统计学差异（P〉0．05）。结论：补中益气汤能有效改善脾气虚证的无氧化代谢状况并调节机体葡萄糖水平。     

17β-雌二醇对骨外膜来源成骨样细胞增殖及基因表达的影响

目的探讨17β-雌二醇（17β-E2）对骨外膜来源成骨样细胞增殖及基因表达的影响。方法6周龄雌性Wistar大鼠颅骨骨外膜来源的成骨样细胞分别在含有0．01、0．05、0．1、0．25、0．5、0．75、1、5、10nmol／L9种浓度17β-E2的成骨诱导培养液中培养，用MTF法测定3、6、9、12d时细胞的增殖情况。用RT—PCR法测定7d时细胞Ⅰ型胶原蛋白仅。链（COLLI）、骨桥接素（OPN）、骨保护素（OPG）及RANKL基因的表达。结果17β-E2作用6、9d时，雌激素组的增殖水平显著高于对照组（P〈0．05）；12d时，0．05nmol／L及以上组的增殖水平显著高于对照组（P〈0．05），各雌激素组的增殖水平的差异无统计学意义（P〉0．05）。（1）COLLI：对照组的表达水平显著高于雌激素组（氏0．05）；在雌激素组中0．5nmo／／L组的表达水平最高，0．75nmol／L组次之，二者皆显著高于其他各组（P〈0．05）。（2）OPN：0．1nmol／L及以上组的表达水平显著高于对照组（P〈0．05）。（3）OPG和RANKL：OPG表达阴性，RANKL在对照组及雌激素组中均有较高水平的表达。结论雌激素对骨外膜成骨样细胞的调节可能以促进增殖，抑制分化为主。骨外膜来源成骨样细胞对破骨细胞的调节可能以促进其祖细胞分化为主。     

P16蛋白与细胞周期蛋白D1在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的：研究Ｐ１６和细胞周期蛋白Ｄ１在子宫内膜癌中的表达及其临床意义。方法：采用免疫组化ＬＳＡＢ法检测４２例子宫内膜癌中Ｐ１６、细胞周期素Ｄ１的表达。结果：４２例子宫内膜癌中２０例ｐ１６表达阳性，占４７．６％，ｐ１６与子宫内膜癌的细胞分级、临床分期、肌层浸润深度有关（Ｐ〈０．０５）；１７例子宫内膜癌细胞周期素Ｄ１表达阳性，占４０．４％细胞周期素Ｄ１与子宫内膜癌的细胞分级、临床分期、淋巴结转移有关（Ｐ〈０．０５）；ｐ１６、细胞周期素Ｄ１协同表达１５例，均为晚期或低分化癌。结论：ｐ１６、细胞周期素Ｄ１作为细胞周期调节因子参与子宫内膜癌的发生、发展，其协同作用促进子宫内膜癌的发展、且预后不良。     

雌激素对脂肪酸合成酶在骨膜组织中基因表达水平的调节作用

前言: 雌激素缺乏是导致绝经后骨质疏松主要原因。雌激素对骨代谢的作用有可能通过骨外膜这个靶点产生,其在基因水平的机制还远未阐明。本研究初步探索了骨膜组织中雌激素与脂肪酸合成酶基因表达水平之间的关系,为研究雌激素对骨膜的作用及机理提供了可能的方向。 方法:本研究通过体外培养人类骨膜细胞,采用半定量PCR、实时荧光定量 PCR的方法验证了差减文库中表达差异显著的基因,并对去势雌性SD大鼠骨膜组织中脂肪酸合成酶的表达情况进行了初步研究。 结果: （1）在半定量PCR方法验证的差减文库筛选基因中,脂肪酸合成酶表达差异最为显著。 （2）实时荧光定量PCR方法证实人类骨膜来源的成骨细胞中雌激素干预组脂肪酸合成酶基因表达显著低于对照组。 （3）大鼠血清雌二醇水平（pg/ml）：假手术（sham）组和对照组显著高于去势（OVX）组,分别为20.81±12.62,19.64±4.35,13.47±1.84(P=0.038)。大鼠骨外膜组织中脂肪酸合成酶基因表达水平：OVX组显著高于sham组和对照组,分别为3.09±1.97,1.33±0.47,1.51±1.32(P=0.0372)。 结论: 雌二醇可能对脂肪酸合成酶在骨膜组织中的表达具有调节作用。     

脾气虚证4种造模方法的比较研究

[目的]比较不同造模方法的实验结果,筛取最接近中医证候的有效的脾气虚证造模方法.[方法]选用SD大鼠分别采用酒醋硝黄饲料法、酒硝黄灌胃法、大黄灌胃法和利血平法复制脾气虚证模型,造模成功后,比较各模型组与正常对照组大鼠的体质量、脾指数、胸腺指数以及血清肌酸激酶(CK)与淀粉酶(Ams)活性之间的差异,筛选出最科学可行的造模方法.[结果]与正常对照组比较,喂饲酒醋硝黄饲料组大鼠的体质量、脾指数、胸腺指数、血清肌酸激酶与淀粉酶活性均显著降低(P＜0.05),其他3组各项指标均有不同程度降低.[结论]酒醋硝黄饲料法为本研究4种造模方法中最理想、有效、接近中医脾气虚证候的大鼠模型的造模方法.     

柴胡疏肝颗粒调控Keap1-Nrf2/HO-1信号通路改善四氯化碳诱导的小鼠急性肝损伤

目的 探讨柴胡疏肝颗粒对小鼠急性肝损伤的保护作用及可能机制。方法 将柴胡疏肝颗粒按低、中、高(生药量：11.4、22.8、45.6 g·kg^-1)3个剂量连续给药7 d,末次给药2 h后,除正常对照组外,用体积分数0.2%四氯化碳(tetrachloromethane, CCl₄)溶液造模,12 h后,收集小鼠的血清和肝组织,制作肝组织病理切片。测定血清中丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase, ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase, AST)和肝组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)、白细胞介素6(interleukin 6,IL-6)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α),以及活性氧自由基(reactive oxygen species, ROS)含量;转录组学获得肝脏组织差异表达mRNA并富集与差异表达基因显著相关的通路;代谢组学研究肝...     

柚皮素通过PI3K/Akt通路拮抗血小板聚集的体外研究

目的:探讨柚皮素拮抗二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集的作用及机制。方法:采用血小板聚集仪观察不同浓度柚皮素对ADP诱导的大鼠血小板聚集的影响。采用荧光显微镜观察柚皮素对血小板在固化纤维蛋白原上扩展功能的影响。采用Western blot检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)表达及蛋白激酶B(Akt)磷酸化水平。结果:柚皮素能剂量依赖性地抑制ADP诱导的体外血小板聚集,其半数抑制浓度(IC_(50))值为(132.1±31.7)μmol/L。柚皮素灌胃给药,对ADP诱导的大鼠体内血小板聚集也有明显的抑制作用。柚皮素还能显著抑制血小板在固化纤维蛋白原上的扩展。Western blot结果显示,柚皮素能明显抑制ADP刺激的PI3K表达和Akt磷酸化同时,PI3K广谱抑制剂LY294002能增强柚皮素对Akt磷酸化的抑制作用。结论:柚皮素可能通过抑制血小板PI3K/Akt信号通路发挥抗血小板聚集的作用。     

间接免疫过氧化物酶法对沙眼衣原体感染症的血清学诊断与意义

通过ＩＰＡ法测定了我院不孕、不育门诊１８３例患者血清中的抗沙眼衣原体（ＣＴ）ＩｇＡ抗体与ＩｇＧ抗体，把抗体阳性率和活动性感染者与３０例正常孕妇进行比较，对其ＣＴ感染状况与临床意义进行了分析与研究。结果表明，卵管因子不孕症者出现高值（Ｐ＜０．０５）；原发性不孕症者、继发性不孕症者也属相对高值；习惯性流产患者、男性患者与正常孕妇大体相同。阳性者的平均年龄为３１．２岁，３１～３５岁者３５／５１例，占６８％；对男性患者虽实施了抗原检查（２８例），但全部阴性，其中３例属抗体阳性。     

17β-雌二醇调控骨外膜来源成骨样细胞雌激素受体及相关受体α基因表达

目的 探讨雌激素受体（estrogen receptors，ER）及雌激素相关受体α（estrogen related—receptord，ERRα）基因在骨外膜来源成骨样细胞的表达及其与雌激素调控的关系。方法6周龄、雌性Wistar大鼠颅骨骨外膜来源的成骨样细胞分别在含有0．01、0．05、0．1、0125、0．5、0．75、1.5、10nmol／L9种浓度17β-雌二醇（17β—E2）或对照的成骨诱导培养液中培养7d，提取细胞总RNA，采用RT—PCR法分析ER及ERRα基因的表达情况。结果 ERα基因表达阴性，ERβ基因呈弱表达。从0-0．25nmol／L范围内可以看剑ERβ的表达水平有上升趋势。5nmol／L和10nmol／L雌激素组ERβ的表达水平显著低于其他雌激素组（P〈0．01）ERRα表达阳性，各雌激素组的表达水平均显著高于对照组（P〈0．01）。0．25nmol／L组的ERRα表达水平最高、0．5nmol／L组次之，两组的表达水平显著高于其他雌激素组（R0．05）；10nmol／L组表达水平昆若低于其他雌激素组（P〈0．05）。结论 雌激素上调了骨外膜来源成骨样细胞ERRα的表达水平，低水平的雌激素有可能上调ERβ的表达水平。血清17β—E2水平维持在早、晚卯泡期的生理浓度有可能扶得最佳的骨保护疗效。