rhGM-CSF基因真核表达载体的构建及其在COS-7细胞和小鼠体内的表达

将ｈＧＭＣＳＦ基因克隆至真核表达质粒ｐＣＤＳ中，构建成重组质粒ｐＣＧ１。用电穿孔法将质粒ｐＣＧ１导入ＣＯＳ７细胞和直接注射小鼠骨骼肌内，ＥＬＩＳＡ检测显示质粒ｐＣＧ１转染ＣＯＳ７细胞后４８、７２、９６ｈ和肌注质粒ｐＣＧ１后ｄ１０、ｄ１５、ｄ２０、ｄ２５小鼠体内均有ｈＧＭＣＳＦ的表达。生物学活性检测显示含肌注ｐＣＧ１的小鼠血液有维持ＴＦ１细胞生长的作用，表明重组质粒ｐＣＧ１表达分泌的ｈＧＭＣＳＦ具有生物学活性     

同源盒（HOX）基因对造血的调控作用

同源盒（ＨＯＸ）基因，不仅在胚胎发育中起作用，而且在造血发育和分化以种系特异性和阶段特异性的方式起调控作用，研究表明，ＨＯＸＢ（Ｂ２，Ｂ４，Ｂ６～９），ＨＯＸＣ（Ｃ６，Ｃ８）和ＨＯＸＡ（Ａ５）基因与红系造血有关；ＨＯＸＡ，ＨＯＸＢ，ＨＯＸＣ的部分基因在淋巴系分化中起重要作用，Ａ９，Ａ１０，Ｂ３，Ｂ７和Ｂ８调节粒单核系的发育。而且，ＨＯＸ基因在琐发育阶段有不同的表达模式，位于３’端的基因在ＣＤ３４＾     

异基因型和同基因型MHCⅡ类基因转染对小鼠肥大细胞？…

目的：提高肿瘤细胞的免疫原性。方法：将异基因型或同基因型的ＭＨＣⅡ类基因转染至小康习肥大细胞瘤Ｐ８１５中，用此细胞接种同系小鼠，１个月后给不成瘤的小鼠再接种野生型Ｐ８１５细胞，观察小鼠的存活情况。结果：转同基因型ＭＨＣⅡ基因的Ｐ８１５细胞接种同系小鼠后，４／１０不成瘤，而异基因型ＭＨＣⅡ基因转染组，１０／１０不成瘤。１个月后不成瘤的小鼠再接种野生型的Ｐ８１５细胞，同基因型转染组２／４不成瘤，异型转     

同源盒(HOX)基因对造血的调控作用

同源盒(HOX)基因,不仅在胚胎发育中起作用,而且在造血发育和分化中以种系特异性和阶段特异性的方式起调控作用。研究表明,HOXB(B2,B4,B6～9),HOXC(C6,C8)和HOXA(A5)基因与红系造血有关;HOXA,HOXB,HOXC的部分基因在淋巴系分化中起重要作用;A9,A10,B3,B7和B8调节粒单核系的发育。而且,HOX基因在不同发育阶段有不同的表达模式:位于3’端的基因在CD34~+骨髓造血细胞早期亚群中的表达水平最高,而位于5’端的基因有更广的表达谱,并在晚期造血分化中出现下调。另外,HOX基因的表达紊乱与白血病的发病有关。     

MHCⅡ类基因转染对肿瘤免疫的影响

本文用人ＨＬＡ－ＤＲ３基因转染到小鼠黑色素瘤细胞系Ｂ１６，构建了带有异种ＭＨＣⅡ类基因的Ｂ１６－ＤＲ细胞。对此细胞进行免疫学分析发现，Ｂ１６－ＤＲ细胞的致瘤性下降，免疫原性提高；经过Ｂ１６－ＤＲ细胞免疫的小鼠可经受后续的Ｂ１６细胞的攻击；过继免疫也可以在一定程度上保护小鼠抵抗Ｂ１６细胞的攻击。上述结果提示，ＭＨＣⅡ类基因转染有利于体内抗肿瘤免疫应答的产生     

逆转录病毒载体介导人GM－CSF基因转染肿瘤细胞

应用逆转录病毒载体ｐＺＩＰＮｅｏＳＶ（Ｘ）介导人ＧＭ－ＣＳＦ基因转染肿瘤细胞获得表达。经Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将含有人ＧＭ－ＣＳＦ基因的重组逆转录病毒载体ｐＺＩＰ－ＧＭ转染兼性病毒包装细胞系ＰＡ３１７，继之用病毒收获液感染人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１和人胃癌ＢＧＣ－８２３，经ＧＭ－ＣＳＦ依赖细胞株ＴＦ１测活和双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ测定表明：人ＧＭ－ＣＳＦ基因在人肿瘤细胞中获得稳定高效表达。为进─步建立ＧＭ－ＣＳＦ的转基因治疗模型提供了基础。     

逆转录病毒载体介导入GM—CSF基因转染肿瘤细胞

应用逆转录病毒载体ｐＺＩＰＮｅｏＳＶ介导入ＧＭ－ＣＳＦ基因转染肿瘤细胞获得表达。经Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将含有人ＧＭ－ＣＳＦ基因的重组逆转录病毒功茶ｐＺＩＰ－ＧＭ转染兼性病毒包装细胞系ＰＡ３１７，继之用病毒睡获感染人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１和人胃癌ＢＧＣ－８２３，经ＧＭ－ＣＳＦＪ依赖细胞株ＴＦ１活活和双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ法测定表明：人ＧＭ－ＣＳＦ基因在人肿瘤中获得稳定高效表达。     

异基因型和同基因型MHC Ⅱ类基因转染对小鼠肥大细胞瘤免疫原性的影响

目的 :提高肿瘤细胞的免疫原性。方法 :将异基因型或同基因型的MHCⅡ类基因转染至小鼠肥大细胞瘤P815中 ,用此细胞接种同系小鼠 ,1个月后给不成瘤的小鼠再接种野生型P815细胞 ,观察小鼠的存活情况。结果 :转同基因型MHCⅡ基因的P815细胞接种同系小鼠后 ,4/ 10不成瘤 ,而异基因型MHCⅡ基因转染组 ,10 / 10不成瘤。 1个月后给不成瘤的小鼠再接种野生型的P815细胞 ,同基因型转染组 2 / 4不成瘤 ,异基因型转染组 7/ 10不成瘤。结论 :研究说明MHCⅡ基因转染具有使肿瘤细胞的致瘤性下降、免疫保护能力提高的作用 ;并且异基因型比同基因型MHCⅡ类基因转染的效果更佳。     

应用SCF＋IL—2等细胞因子从脐血CD34^＋细胞扩增T细胞

肿瘤和艾滋病（ＡＩＤＳ）的基因治疗或免疫治疗的研究需要大量的Ｔ细胞克隆。尽管Ｔ细胞来源于ＣＤ３４＾＋细胞，但由于需要胸腺组织的参与，使其在体外扩增大量细胞克隆非常困难。本研究用脐血单个核细胞作为辅助细胞，在ＳＣＦ＋ＩＬ－２等细胞因了的作用下，人脐血ＣＤ３４＾＋在此培养条件下，不断产生ＣＤ４＾＋或ＣＤ８＾＋Ｔ细胞至少持续３周。在培养扩增过程中，发现ＣＤ４＾＋和ＣＤ８＾＋Ｔ细胞的比例有一个不断变化的动     

MHC Ⅱ类基因修饰的小鼠黑色素瘤细胞对肿瘤特异性CTL诱导的实验研究

大多数的肿瘤细胞只表达MHC I类抗原，不表达Ⅱ类抗原，而Ⅱ类抗原主要与T辅助细胞作用，激活T辅助细胞，为细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的活化提供必需的辅助信息。如果肿瘤细胞是MHC Ⅱ类阳性的，就可以直接作为抗原提呈细胞来刺激T辅助细胞的增殖，进而产生有效的免疲反应，因此向肿瘤细胞内转移MHC Ⅱ类基因是目前正在尝试的一种新的基因治疗方法。为了探讨MHC Ⅱ类基因修饰的肿瘤细胞其免疫原性的变化，我们利用已经获得的表述MHC Ⅱ类基因的B16-DR细胞，进行CTL诱导的实验研究。结果表明，经MHC Ⅱ类基因修饰的B16-DR细胞可以在体内和体外诱导产生针对原始B16细胞的CTL反应，而未经修饰的B16细胞却无此作用。此CTL反应可用抗MHC Ⅱ的单克隆抗体封闭，并且封闭的程度随着加入的抗体量的增加而增加，说明此CTL反应的诱导与所转入的MHC Ⅱ类基因密切相关。抗CD4／CD8的单克隆抗体可以阻断CTL的诱导，表明T辅助细胞和杀伤性T细胞也参与了这一CTL诱导过程。总之。我们的实验结果提示所转入的MHC Ⅱ类基因以及CD4和CD8T细胞在CTL诱导反应中具有重要作用。