高转移小鼠肺癌株细胞导入人基因组DNA后的转移表型抑制

目的 探讨从正常人细胞基因组ＤＮＡ中寻找、分离并鉴定肿瘤转移抑制基因或相应ＤＮＡ序列的新途径。方法 采用体内转移灶体外再培养再硬琼脂集落克隆化筛选，获体内９０％以上高转移率小鼠肺腺癌ＬＭ２细胞株；使用磷酸钙共沉淀ＤＮＡ转染技术，将正常细胞人基因组ＤＮＡ随机片段，导入高转移小鼠肺癌细胞株ＬＭ２后，使用有限稀释法克隆化其中形态扁平的回复突变株。为证实细胞确实含有外源人ＤＮＡ序列，设计人特异性Ａｌｕ引物     

转化生长因子β_1基因转染对人肺巨细胞癌细胞体内外增殖调控机理的研究

转化生长因子β_１基因转染对人肺巨细胞癌细胞体内外增殖调控机理的研究ＡＳｔｕｄｙｏｎｒｅｇｕｌａｔｏｒｙｅｆｆｅｃｔｓｏｆｈｕｍａｎｌｕｎｇｇｉａｎｔｃｅｌｌｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｌｓｂｙｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｏｆｓｅｎｓｅａｎｄａｎｔｉｓｅｎｓ?..     

大鼠卵黄囊的分化及其肿瘤性转化研究

目的研究12d大鼠胚胎脏层卵黄囊(VYS)向多胚层组织分化的潜能和在逆转录病毒感染下的肿瘤性转化特征。方法在不同培养条件、移植位点的条件下,观察VYS体内外分化的改变;另外利用逆转录病毒载体将荧光蛋白基因(GFP)转染12d卵黄囊细胞,对GFP标记的转化细胞进行体内外研究。结果在不同培养条件下,均对体外培养的或体内移植的大鼠卵黄囊向三个胚层分化的进程无特异的导向性。将荧光蛋白标记卵黄囊克隆细胞接种在裸鼠皮下长出了未分化的间质细胞肉瘤。结论12d大鼠胚胎脏层卵黄囊具有向三胚层分化的潜能;逆转录病毒感染导致卵黄囊间质细胞发生肿瘤性转化。     

重组复制缺陷型腺病毒Ad p53AIP1的抗肿瘤效应及其作用机制

目的:探讨外源性p53AIP1（p53regulated apoptosisinducing protein 1）基因抗肿瘤效应及其作用机制，以评估p53AIP1基因在肿瘤基因治疗中应用的可行性。方法：构建携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒Adp53AIP1，感染人肝癌细胞HepG2，应用MTT比色法、Western blotting、流式细胞术、罗丹明染色以及电镜等观察外源性p53AIP1基因表达对肿瘤细胞的作用及其相关机制。小鼠皮下接种感染Adp53AIP1的小鼠乳腺癌4T1细胞，观察Adp53AIP1对肿瘤细胞体内成瘤性的影响;建立4T1细胞皮下移植瘤小鼠模型, 直接瘤内多点注射重组腺病毒，观察Adp53AIP1的抗肿瘤疗效。结果：感染Adp53AIP1的HepG2细胞能够高效表达P53AIP1蛋白。MTT检测显示Adp53AIP1对人肝癌细胞HepG2的生长抑制率达50％以上；流式细胞术分析证实p53AIP1使肿瘤细胞周期阻滞于G2/M期；罗丹明染色、电镜观察以及凋亡相关蛋白PARP表达的检测均证实p53AIP1 能诱导肿瘤细胞发生明显凋亡。感染Adp53AIP1的肿瘤细胞体内成瘤受到非常明显的抑制（P<001）, Adp53AIP1瘤体注射对移植瘤生长也有明显的抑制作用（P<0.05）。Western blotting以及RTPCR检测证实Adp53AIP1对p53mRNA表达无影响，能下调mdm2 基因的表达；p53AIP1能上调P53蛋白的表达、下调MDM2蛋白的表达水平，同时还影响P21等细胞周期相关蛋白和凋亡相关蛋白的表达。结论：p53AIP1有明显的体内外抗肿瘤作用，其作用机制与其反向调控P53蛋白、调控多种细胞周期和细胞凋亡相关蛋白、诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡有关，该基因在肿瘤基因治疗中具有潜在的应用前景。     

肿瘤转移相关新基因MAG-1和MAG-2的克隆

目的 从两株人肺巨细胞癌细胞株中分离并鉴定人肺癌转移相关基因，为探讨肿瘤转移的分子机制奠定基础。方法 以细胞系PLA-801的两个具有不同转移潜力的亚克隆为模型，利用抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization，SSH)技术克隆差异片段，对得到的片段经基因芯片筛选后测序并与GenBank数据库进行同源性比较，然后用Northern杂交和RT-PCR对其中的两条序列进行验证，并进行详细的生物信息学分析。结果 获得了79条在高转移细胞中高表达而在低转移细胞中低表达的序列，在与这些序列同源的己知基因中包括两条功能未知的全长cDNA序列BC006236和Bc002420，分别命名为MAC-1和MAG-2。MAG-l定位于4q21，由4个外显子组成，MAG-2定位于2q35，由9个外显子组成，基因长度分别为8．5kb和5．2kb。二条序列均有开放阅读框架(ORF)，编码产物以α螺旋为主并含有部分片层结构和无规卷曲。结论 MAG-l和MAG-2在高低转移性肺巨细胞癌细胞株中的表达具有显著差异，二者的表达与高转移潜能具有相关性，提示MAG-l和MAG-2可能参与肿瘤转移过程。     

利用RNA干扰技术研究14-3-3ζ对肺癌细胞转移的抑制作用

目的:探讨14-3-3ζ对肺癌细胞转移的抑制作用.方法:以人肺巨细胞癌低转移细胞株为模型,利用RNAi技术研究14-3-3ζ被干涉后肿瘤细胞恶性表型的变化,探讨14-3-3ζ与肿瘤转移的相关性.结果:本研究发现14-3-3ζ被干涉后细胞的集落形成能力明显提高,黏附能力明显降低,细胞迁移、侵袭能力明显提高.结论:14-3-3ζ可能抑制肺癌细胞的转移.     

检测血管生长因子作用的鸡胚绒毛尿囊膜技术

采用改良的鸡胚绒毛尿囊膜技术，探讨血管生长因子在肿瘤发生发展过程中的作用。方法是将肿瘤细胞培养上清液或某些细胞因子，置于孵育９ｄ鸡胚的ＣＡＭ膜上，继续孵育３ｄ后取膜，观察新生毛细血管的数量、长度和粗细，发现恶性程度高的肿瘤培养上清液促血管生长作用较强。     

INFLUENCE OF IMMUNE STATUS OF THE IMMUNE DEFICIENT MICE ON THE METASTATIC PHENOTYPES OF THE HETEROGENEOUS CLONAL SUBLINES OF HUMAN LUNG GIANT CELL CARCINOMA

By using cell cloning technique, 4 sublines (A,C,D,E) were isolated from a cell line of human lung giant cell carcinoma (PLA-801). After subcutaneous inoculation in T-cell deficient BALB/c nude mice, the incidence of tumor growth and spontaneous metastasis were the highest in subline D, moderate in sublines A and E, and lowest in subline C. Tumor cells of subline C also showed similar low tumorigenicity in another T-cell deficient 615/ PB1 nude mice.However, in 615/PB1 beige nude mice with con-genitally combined immune-deficiency in both T and NK cell activity, tumor cells of the rarely metastatic subline C do produce significantly high frequency of tumor growth and spontaneous metastasis.Morphological studies (light microscope, electron microscope and immunohistochemistry) showed rich microfilaments and Vimentin positive in the cytoplasm of metastatic tumor cells. This may imply a possibility that tumor cells differentiate towards the direction favourable to spreading and metastasis.     

DNA斑点杂交检测大肠癌C—myc癌基因扩增的临床意义

应用ＤＮＡ斑点杂交技术对４４例大肠癌及相邻正常粘膜组织Ｃ－ｍｙｃ癌基因扩增进行分析，探讨Ｃ－ｍｙｃ扩增与大肠癌分化程度及Ｄｕｋｅｓ分期的关系。结果表明：大肠癌Ｃ－ｍｙｃ扩增率为６１．４％，并与分化程度密切相关，粘液腺癌和低分化腺癌的扩增率明显高于高分化腺癌。Ｃ－ｍｙｃ扩增可作为大肠癌的一项有价值的生物学标志。