非何杰金淋巴瘤p15基因操纵区5’-CpG岛的甲基化的研究

目的：探索p15基因异常甲基化在非何杰金淋巴瘤(NHL)中的变化及其在各分型中的表达。 方法：用特异PCR（MSP）的方法检测32例非何杰金淋巴瘤石蜡标本p15基因甲基化；检测非何杰金淋巴瘤患者标本21例，用RT-PCR方法测定p15基因的表达。 结果:非何杰金淋巴瘤p15基因操纵区甲基化的发生率为18.9%（10/53），高度恶性比低度恶性更易发生甲基化，其发生率分别为27.3%和0%。 结论:p15基因甲基化可能是非何杰金淋巴瘤发病的原因之一，并与病程进展有关。     

非霍奇金淋巴瘤p15基因甲基化及去甲基化再表达的研究

目的探索p15基因异常甲基化在非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin’s lymphomas，NHL)中的分布，去甲基化p15基因的再表达。方法检测32例非霍奇金淋巴瘤石蜡标本p15基因甲基化；用去甲基化因子5-Aza2-cdR诱导p15基因甲基化的淋巴瘤细胞株Raji细胞，RT—PCR方法测定p15基因的表达。结果非霍奇金淋巴瘤p15基因操纵区甲基化的发生率为18．8％(6／32)，高度恶性比低度恶性更易发生甲基化，其发生率分别为27.3％和0％，去甲基化因子5-Aza2-cdR在10^-7～10^-6mol／L诱导的raji细胞p15基因去甲基化再表达。结论p15基因甲基化可能是非霍奇金淋巴瘤发病的原因之一，去甲基化治疗是可行的。     

用~3H-TdK渗入法对难治性贫血外周血T淋巴细胞转化的研究

骨髓增生异常综合征(MDS)是近几年来开始研究的一组疾病。难治性贫血是MDS的最初阶段,其关键是病态造血,以贫血为主要症状,用VitB_(12)和叶酸等治疗效果不佳,有一部分病例发展为急性白血病。方法一、病例选择我们所选的14例难治性贫血病例均符合1982年FAB协作组有关MDS-RA的分型诊断标准。男8例。女6例,平均年龄37·14岁,病程1—3年均未用过激素和进行化疗。以健康献血员作为对照。二、植物血凝素(PHA)刺激剂浓度试验无菌抽取正常人静脉血15ml,加无菌肝索钠抗凝(50—60u/ml),加等量无血清RPMI 1640(U.S.A产品)培养液混匀后,用淋巴细胞分层液(上海试制二厂产品)进行分离,以2000rpm速度离心20分     

人乳头瘤病毒6bL1双顺反子载体的构建及其在哺乳动物细胞内的表达

目的构建尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒6b型晚期基因(HPV6b L1)的双顺反子表达载体,并使其在哺乳动物细胞内表达,以期建立含有HPV6b L1的细胞模型.方法表达质粒pEGFP-HPV6bL1经双酶切纯化后与经过相同双酶切的真核表达质粒pIRES2-EGFP连接,酶切鉴定,挑选阳性克隆进行测序.重组质粒pIRES2-HPV6bL1-EGFP转染进小鼠成纤维细胞(NIH3T3),荧光显微镜下观察EGFP蛋白的表达.RT-PCR检测HPV6b L1 mRNA的生成.结果成功构建含HPV6b L1的重组质粒pIRES2-HPV6bL1-EGFP.重组体成功转染进NIH3T3细胞,并用G418筛选.同时荧光倒置显微镜下可观察到细胞内有绿色荧光蛋白的表达.进一步进行RT-PCR,检测到HPV6b L1 mRNA的生成.结论成功构建携带HPV6b L1的重组体pIRES2-HPV6bL1-EGFP并转染入NIH3T3细胞.经荧光倒置显微镜观察及RT-PCR方法检测证明HPV6b L1在NIH3T3细胞内成功表达.     

多发性骨髓瘤中p15基因高甲基化的研究

目的：探索p15（MST INK4b）基因在多发性骨髓瘤中的作用特点和甲基化发生的规律。方法：用甲基化特异的PCR的方法-MSP（methylation-specific PCR）,检测23例多发性骨髓瘤（multiple myeloma, MM）p15基因甲基化的发生率。结果：MM中甲基化的发生率为73.5%(17/23),扩增产物为148 bp片段。其中4例Ⅰ期,骨髓象为浆细胞型的MM p15基因未发生甲基化;1例Ⅱ期和1例Ⅲ期,骨髓象为分化成熟的浆细胞的MM中p15基因未发生甲基化;在Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期中多数为浆细胞型或混合型中的幼稚浆细胞的病例易发生甲基化。Ⅰ、Ⅱ期和Ⅲ期中甲基化的发生率分别为55%(5/9)、100%(7/7)和71.4%(5/7)。结论：p15基因甲基化可能是MM发病原因之一,与病程的进展和预后有一定的关系。     

HA方案治疗血小板增多症

外周血象中,血小板计数为1000×10~9/L以上者称为血小板增多症。笔者观察3例,并给予HA方案化疗,取得了较好的疗效,现报告如下。     

人乳头瘤病毒6bL1双顺反子载体的构建及其在哺乳动物细胞内的表达

目的构建尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒6b型晚期基因(HPV6b L1)的双顺反子表达载体,并使其在哺乳动物细胞内表达,以期建立含有HPV6b L1的细胞模型.方法表达质粒pEGFP-HPV6bL1经双酶切纯化后与经过相同双酶切的真核表达质粒pIRES2-EGFP连接,酶切鉴定,挑选阳性克隆进行测序.重组质粒pIRES2-HPV6bL1-EGFP转染进小鼠成纤维细胞(NIH3T3),荧光显微镜下观察EGFP蛋白的表达.RT-PCR检测HPV6b L1 mRNA的生成.结果成功构建含HPV6b L1的重组质粒pIRES2-HPV6bL1-EGFP.重组体成功转染进NIH3T3细胞,并用G418筛选.同时荧光倒置显微镜下可观察到细胞内有绿色荧光蛋白的表达.进一步进行RT-PCR,检测到HPV6b L1 mRNA的生成.结论成功构建携带HPV6b L1的重组体pIRES2-HPV6bL1-EGFP并转染入NIH3T3细胞.经荧光倒置显微镜观察及RT-PCR方法检测证明HPV6b L1在NIH3T3细胞内成功表达.     

白细胞介素12诱导T细胞凋亡对Bcl-2表达和信号分子的影响

目的:了解和探讨白细胞介素12(IL-12)作用于T细胞,活化T细胞表面的IL-12受体β,诱导T细胞凋亡对Bcl-2表达和信号转导的作用。方法:用AnnexinV流式细胞仪检测细胞凋亡率和半定量PCR的方法测定在不同抑制剂作用下对Bcl-2信号转导表达的影响。结果:IL-12在高浓度下诱导人的白血病T细胞株TIB-152和人的淋巴瘤T细胞株HTB-176及正常人T细胞的凋亡。在IL-12处理6h后Bcl-2的表达明显升高,表达的高峰值在24h,Bcl-2的升高不能抑制和阻碍T细胞的凋亡;IL-12诱导上调T细胞Bcl-2mRNA表达。HA100能促进T细胞的凋亡,PKC是IL-12诱导T细胞凋亡信号转导的负性调节因子;AG490不抑制IL-12上调的Bcl-2mRNA表达作用,AG490阻断的Jak2通路不参与IL-12诱导T细胞mRNA表达的信号转导及其调节;HA1004不影响T细胞表达mRNA,PKA通路不影响IL-12诱导T细胞表达Bcl-2mRNA的信号传递。结论:Bcl-2是凋亡介导分子之一,但是Bcl-2不能阻断Fas-FasL介导的T细胞凋亡。