骨肉瘤细胞中Polo样激酶3的表达和定位

目的:构建新型人源真核表达载体3* Flag-hPlk3并同时检测其在骨肉瘤细胞U2OS中的表达及定位.方法:以GST-hPlk3作为模板,利用聚合酶链反应扩增人源Plk3目的基因eDNA全长,并将其克隆到含有3* Flag标签的真核表达载体中.进一步将构建的重组质粒进行酶切和测序分析鉴定,并转染至U2OS骨肉瘤细胞系中,提取细胞总蛋白进行Western blot检测.同时利用荧光共聚焦激光扫描显微镜观察3*Flag-hPlk3在U2OS细胞系中的定位,进一步利用免疫沉淀方法纯化人源Plk3蛋白.结果:hPlk3基因cDNA全长成功构建于含有3* Flag标签的真核表达载体中,Western blot检测3*Flag-hPlk3融合蛋白表达,分子量约为74kDa.3 * Flag-hPlk3在骨肉瘤细胞系U2OS中主要定位于细胞质及核周,并成功纯化了hPlk3蛋白.结论:成功的构建了含有3* Flag标签的人源Plk3真核表达质粒,同时鉴定3*Flag-hPlk3融合蛋白的表达,最终成功纯化hPlk3蛋白.3*Flag-hPlk3蛋白主要定位在细胞质和核周.     

hSesn3基因真核表达载体的构建及在骨肉瘤细胞中的蛋白表达和定位

目的:通过构建人Sesn3真核表达载体同时证实融合蛋白在细胞中的表达及定位.方法:提取Hela工具细胞的mRNA,反转录至cDNA.进一步通过PCR来扩增人Sesn3基因的cDNA全长片段,并将其亚克隆于pEGFP-C1真核表达载体中,进而将构建的重组质粒进行酶切及测序鉴定,转染到MG-63骨肉瘤细胞中,获取细胞总蛋白,通过Western blot方法检测表达.进一步利用激光共聚焦扫描显微镜方法观察MG-63细胞内pEGFP-hSesn3的定位,最后利用免疫沉淀方法纯化人源hSesn3蛋白.结果:hSesn3基因cDNA全长片段克隆于真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为1 410 bp,并成功测序.Western blot检测到了GFP-hSesn3融合蛋白表达,分子量约为79 kDa.在MG-63细胞中pEGFP-hSesn3主要定位于细胞质,进一步成功纯化了hSesn3蛋白.结论:成功构建了hSesn3基因cDNA全长的真核表达载体,在MG-63细胞中pEGFP-hSesn3蛋白主要定位于细胞质,最终成功纯化了hSesn3蛋白.     

3*Flag-hPlk4真核表达载体的构建及其在骨肉瘤细胞中的表达和定位

目的:构建3*Flag-hPlk4真核表达载体,并证实重组表达载体在骨肉瘤细胞内的表达及定位.方法:以pGEX-4T-2-hPlk4为模板,利用聚合酶链反应扩增hPlk4基因cDNA全长,并将其克隆至含有3*Flag标签的真核表达载体中.进一步将构建的重组载体进行双酶切和测序鉴定,并转染到U2OS骨肉瘤细胞中,Western blot检测重组蛋白的表达.同时利用共聚焦激光显微镜观察3*Flag-hPlk4表达载体在U2OS细胞中的定位,进一步利用免疫沉淀的方法纯化人源Plk4蛋白.结果:hPlk4基因cDNA全长成功构建到3*Flag真核表达载体中,Western blot检测到含有3*Flag的人源Plk4融合蛋白表达,进一步在U2OS骨肉瘤细胞中主要定位于细胞质和细胞核周,并成功纯化hPlk4蛋白.结论:成功构建了3*Flag-hPlk4真核表达质粒,同时鉴定了融合蛋白的表达,并成功纯化人源Plk4蛋白.3*Flag-hPlk4蛋白主要定位在细胞质和细胞核周.     

膝关节单髁置换静脉与局部联合应用氨甲环酸止血的效果及安全性

文题释义：单髁置换：与全膝关节置换相比,手术切口小,截骨量少,软组织剥离面积小,但单髁置换围术期出血量的控制仍然需要引起足够重视。手术创伤及术中止血带的使用等因素导致的纤溶系统异常激活造成患者大量失血的问题,一直困扰着骨科医师。氨甲环酸：为一种合成赖氨酸衍生物,通过竞争性抑制赖氨酸结合位点对纤溶酶原的作用,减少纤维蛋白的局部降解,从而产生对手术切口的止血作用,在全髋关节置换及全膝关节置换术中已得到广泛应用。 背景：越来越多的患者行膝关节单髁置换治疗,既往氨甲环酸在单髁置换过程中为关节腔内注射,关于单髁置换围术期氨甲环酸静脉滴注联合局部应用的研究并未见报道。 目的：探讨静脉联合局部应用氨甲环酸在膝关节单髁置换过程中的止血效果及安全性。 方法：回顾性分析2015年6月至2019年12月中山市人民医院骨一科收治的行初次单侧单髁置换的48例膝关节骨关节炎患者的病历资料。根据围术期是否使用氨甲环酸分为2组,试验组30例手术切皮前静脉点滴1.0 g氨甲环酸及术中关闭切口前0.5 g氨甲环酸与鸡尾酒混合局部注射,对照组18例术前未使用氨甲环酸及术中关闭切口前不配有氨甲环酸等量鸡尾酒注射。对比分析2组患者显性、隐性及总失血量、术后第2天血红蛋白及红细胞压积丢失量、输血例数、术后及总住院时间、术后30 d内任何并发症发生情况。结果与结论：①试验组的显性、隐性及总失血量、术后第2天血红蛋白及红细胞压积丢失量均显著少于对照组,差异有显著性意义(P < 0.05);②2组在输血例数、术后及总住院时间与术后30 d内并发症方面差异均无显著性意义(P > 0.05);③结果证实,静脉联合局部应用氨甲环酸在膝关节单髁置换术中有明显的止血效果及安全性。 ORCID: 0000-0002-6407-8806(邓增发) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：人工关节;骨植入物;脊柱;骨折;内固定;数字化骨科;组织工程     

hSesn1基因真核表达载体构建及蛋白的表达和定位

目的 构建人源的Sesn1真核表达载体同时检测融合蛋白在COS-7细胞系内的表达和定位。方法 提取工具细胞系HeLa的mRNA,进而反转录成为cDNA。聚合酶链反应方法扩增人源Sesn1基因的cDNA全长片段,将其克隆于pEGFP-C1真核表达载体中。进一步将已构建好的重组表达载体进行双酶切以及测序鉴定,继而转染到工具细胞系COS-7中,进行Western blot方法检测。最后应用激光共聚焦扫描显微镜方法来观察pEGFP-hSesn1在COS-7细胞中的定位情况。结果 hSesn1基因cDNA全长片段克隆至pEGFP-C1真核表达载体中,酶切鉴定片段大小为1479bp,测序证实成功。Western blot方法检测出GFP-hSesn1融合蛋白的成功表达,分子质量（Mr）约为80kDa。pEGFP-hSesn1在COS-7于细胞中主要定位在细胞质及核周。结论 成功构建了pEGFP-hSesn1真核表达载体,进而检测到融合蛋白的表达,并且在COS-7细胞中主要定位于核周及细胞质。     

骨肉瘤细胞中Sestrin2的表达和定位

目的:构建新型人源真核表达载体3*Flag-hSesn2并同时检测其在骨肉瘤细胞中的表达及定位.方法:以GST-hSesn2作为模板,利用聚合酶链反应扩增目的基因hSesn2的cDNA全长,并将其克隆到含有3*Flag标签的真核表达载体中.进一步将构建的重组质粒酶切并测序分析鉴定,转染至MG-63骨肉瘤细胞中,提取细胞总蛋白后进行Western blot检测重组蛋白表达.此外利用荧光共聚焦激光扫描显微镜检测3*Flag-hSesn2在MG-63细胞系中的定位,并最终利用免疫沉淀方法纯化人源Sesn2蛋白.结果:hSesn2基因cDNA全长成功构建于含有3*Flag标签的真核表达载体中,利用Western blot检测3*Flag-hSesn2融合蛋白表达,分子量约为55kDa.3*Flag-hSesn2在MG-63骨肉瘤细胞系中主要定位于细胞质及核周,进一步成功纯化了hSesn2蛋白.结论:成功的构建了含有3*Flag标签的人源Sesn2真核表达质粒,同时鉴定3*Flag-hSesn2融合蛋白的表达,最终成功纯化hSesn2蛋白.其中3*Flag-hSesn2蛋白主要定位在细胞质和核周.     

3*Flag-hSesn1重组质粒的构建及其在骨肉瘤细胞中的表达

目的:构建3*Flag-hSesn1真核表达载体并检测在骨肉瘤细胞内的表达及定位.方法:以GST-hSesn1为模板,利用聚合酶链反应扩增hSesn1基因cDNA全长,并将其克隆至3*Flag标签的真核表达载体中.将构建的重组载体进行双酶切和测序鉴定,并转染到MG-63骨肉瘤细胞中,提取总蛋白进行Western blot检测.进一步利用共聚焦激光显微镜观察3*Flag-hSesn1在MG-63细胞中的定位,使用免疫沉淀的方法纯化人源Sesn1蛋白.结果:hSesn1基因的cDNA全长成功构建到3*Flag标签的真核表达载体中,Western blot检测到了含有Flag标签的人源Sesn1融合蛋白表达,且在MG-63骨肉瘤细胞中主要定位于细胞质和核周,并成功纯化人源Sesn1蛋白.结论:成功构建了3*Flag-hSesn1真核表达质粒,同时鉴定了其融合蛋白的表达,并纯化人源Sesn1蛋白.3*Flag-hSesn1蛋白主要定位在细胞质,部分定位于细胞核周.