IV型II类反式激活因子基因新变异体的克隆、鉴定和功能测定

为获取有功能的IV型II类反式激活因子基因 (CIITA IV ) ,诱导肿瘤细胞表达MHCII类分子 ,从IFN γ刺激的THP 1细胞中以RT PCR获得CIITA IV ,将其连接到pGEMT easy载体。对所构建的pcDNA3 1 CIITA IV型表达载体进行反复测序后发现 ,所获得的CIITA IV基因存在结构变异 ,在 2 87位插入了 3个核苷酸TAG ,使 2 86 2 88位的AAG改变成为ATAGAG(2 86 2 90 ) ,并引起其他 8个座位核苷酸 (及推导的氨基酸残基 )发生改变。将表达载体转入原先不表达MHCII类分子的HeLa细胞中 ,检测到所获得的IV型CIITA变异体具有诱导人II类分子HLA DR表达的能力。空载体和CIITA IV基因导入的HeLa细胞中 ,DR阳性细胞百分率分别为 0 0 1 %和 37 6 4 %。该基因已从GenBank得到登录号 ,表明这是一个具有诱导HLA DR分子表达功能的IV型CIITA新基因。     

细菌细胞壁缺陷引起的变异及临床应用

细菌细胞壁部分缺损或完全丧失而形成的细菌称为细菌L型,细菌L型是细菌重要的形态变异类型。细菌胞壁的缺失可以是自发的,也可以是人工诱导的;细菌转变成细菌L型,这可能是细菌抵抗不利环境条件的一种方式。L型细菌的出现都发生在临床用药治疗之后,并且有一定的耐药性,仍可保留有一定的毒力,具有致病性,且免疫性也发生变化,因此医院在进行细菌性疾病的治疗时应注意细菌L型的产生。     

反向信号传递

有关反向信号传递的研究多集中于TNF配体超家族成员 ,如TM TNF、CD4 0L、CD30L、FasL等。当表达于细胞膜表面的TNF配体超家族分子 ,与相应的受体结合后 ,引起反向信号传递及靶细胞的多种生物学效应。研究发现 ,某些膜表面配体胞浆段具有一些磷酸化位点或CKI位点 ,也有人通过免疫共沉淀方法得到与胞浆段结合的蛋白分子 ,以及p38/MAPK活化等 ,然而反向信号传递确切的分子机制仍不清楚。对其进一步深入研究将有助于人们更好地理解细胞间的“握手”。     

天花粉蛋白免疫抑制作用的功能性肽段筛选及其作用机制

在人工合成天花粉蛋白(Tk)多个重叠肽段的基础上,采用前期工作中筛选出的天花粉蛋白高敏感(C57BL/6)和低敏感(C3H/He)小鼠近交系,建立OVA特异的体外二次应答增殖系统,检测各肽段抑制能力,并通过细胞剔除及过继试验确认发挥作用的细胞,采用ELISA方法检测细胞因子分泌格局的改变。结果筛选到5条具有明显免疫抑制功能的Tk衍生肽,其中PE和PS对两个品系皆显示抑制活性,而PQ、PB及PJ仅在C57BL/6小鼠中诱导抑制。Tk衍生肽段改变了OVA特异性增殖系统中细胞因子分泌的格局,使得以Th1/Tc1型细胞因子为主状态向Th2/Tc2偏移,表现为IL-4和IL-10分泌增加,而IFN-γ分泌减少。剔除CD8+T细胞明显解除Tk及其肽段的抑制作用。表明Tk的某些肽段与全蛋白一样具有免疫抑制功能,其机制可能与诱导T细胞向CD8+Tc2方向偏移有关。     

伤椎植骨结合伤椎置钉 6 钉固定治疗胸腰段骨折疗效观察

目的探讨伤椎植骨联合置钉6钉内固定治疗胸腰段骨折的临床价值。方法将胸腰段骨折患者随机分为2组,研究组行伤椎植骨与置钉6钉内固定治疗,对照组行植骨融合与跨伤椎椎弓根螺钉复位内固定治疗,对比2组·临床疗效。结果2组手术均成功完成,研究组愈合时间明显短于对照组。2组术后伤椎前缘高度比及Cobb角度相比治疗前均明显改善（P均〈0．05）。2组随访8个月以上,研究组伤椎前缘高度比相比术后未见显著减少,Cobb角度相比术后未见显著增加;对照组伤椎前缘高度比相比术后显著减少（P〈0．05）,Cobb角度相比术后明显增加（P〈0．05）;2组比较均有显著性差异（P均〈0．05）。结论伤椎植骨联合置钉6钉内固定治疗胸腰段骨折能够明显改善伤椎损伤情况,且具有术后长时间良好的稳定效果,相比传统手术方式疗效更持久,具有较好的临床价值。     

天花粉蛋白抑制T细胞增殖的免疫学机制研究

目的研究天花粉蛋白(Tk)诱导免疫抑制的免疫学机制。方法应用淋巴细胞体外增殖抑制试验，分别对丝裂原ConA、可溶性抗原OVA及CD3联合CD28 McAb三种T细胞增殖系统进行Tk诱导免疫抑制的剂量依赖性试验。建立OVA特异性的T细胞系(Tova)，观察Tk对由IL-2-IL-2R信号介导的T细胞增殖的抑制作用。用FACS测定Tk处理过的脾脏单个核细胞(SMC)的凋亡。分离骨髓诱导产生未成熟的DC(iBDC)，比较Tk冲击处理前后DC激活T细胞增殖能力的差异。用Tk冲击处理Tova，观察Tk冲击处理前后T细胞增殖能力的变化。结果低剂量的Tk(1ng，ml～500ng/ml)对OVA增殖系统有强烈的抑制作用，对ConA增殖系统抑制较弱，而对CD3联合CD28 McAb及IL-2增殖系统的T细胞增殖几乎无抑制作用。在5μg/ml的Tk浓度以下，Tk不诱导SMC凋亡。Tk冲击处理过的iBDC提呈OVA激活特异性T细胞的能力明显下降；而Tk冲击处理过的Tova增殖能力没有受到影响。结论Tk通过影响APC来诱导免疫抑制。     

天花粉蛋白诱导小鼠Th2/Tc2亚群分化与MHC背景相关

为阐明天花粉蛋白 (Tk )诱导免疫抑制和基因调控的机制 ,应用ELISA方法动态测定小鼠OVA特异性T淋巴细胞培养上清液中T细胞亚群相关细胞因子的含量 ,观察Tk对高、低易感品系小鼠T细胞分泌细胞因子格局的影响。发现Tk作用下 ,高易感品系C5 7BL/ 6 (H 2 b)IL 4、IL 10分泌量大幅度增高 ,IFN γ显著下降 ;而低易感品系C3H/He (H 2 k)相应的细胞因子变化极小。上述结果表明 :(1)Tk可诱导功能性T细胞亚群向Th2 /Tc2方向分化 ,并导致OVA特异性T细胞增殖受抑 ;(2 )T细胞亚群分化与MHC背景密切相关。提示Tk作用下T细胞亚群的分化受MHC基因调控     

天花粉蛋白及其肽段诱导的免疫抑制依赖APC表面Notch配体的表达

新近发现,Notch信号途径参与调节外周成熟T细胞及其亚群的分化和功能发挥。本研究应用天花粉蛋白及其衍生肽处理骨髓来源的小鼠树突状细胞(DC),检测Notch配体家族分子的表达及DC对CD8+T细胞分泌细胞因子的影响。结果表明,天花粉蛋白或其衍生肽PB处理DC可使Notch配体Jagged1、Delta1分子表达明显增加,并改变CD8+T细胞细胞因子分泌格局,明显抑制Th1相关细胞因子IFN-γ的分泌,而Th2相关细胞因子IL-4和IL-10分泌明显增加。Notch信号的阻断剂可以部分逆转Tk及肽段的抑制作用。表明天花粉蛋白及其衍生肽可诱导一群具有抑制能力的CD8+T细胞,该作用依赖于DC表面Notch配体的表达。     

TM-TNF-α介导的反向信号下调sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的表达

目的：观测TM-TNF-α介导的反向信号对sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的影响，构建TM-TNF-α胞浆段缺失突变体，并进一步验证。方法：sTNF-α激活U937细胞后撤除，加入可溶性TNFR（sTNFRⅠ）激活TM-TNF-α介导的反向信号，用RT—PCR方法检测反向信号对活化后U937细胞因子IL-1β、IL-8 mRNA的影响；采用分子克隆技术构建TM-TNF-α胞浆段缺失突变重组体，采用电穿孔法转染U937，并用Western blot检测蛋白表达。结果：sTNF-α激活U937细胞后撤除，高表达的细胞因子IL-1β、IL-8 mRNA随着时间的延长而逐渐降低；sTNFRⅠ激活的TM-TNF-α介导的反向信号可加速细胞因子mRNA的降解，且使mRNA降解至50％的时间分别由约75、60分钟缩短至约45、35分钟。成功构建TM-TNF—α胞浆段缺失突变重组体pcDNA3．0-△csTM-TNF—α并瞬时转染U937细胞，Western blot结果显示U937细胞膜表面除表达26000的野生型TM-TNF-α蛋白外，还可表达约20000的突变体蛋白。这种缺失胞浆段的突变体蛋白可竞争性抑制反向信号对活化后U937细胞因子mRNA的下调作用。结论：TM-TNF-α介导的反向信号可下调sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的表达；且TM-TNF-α胞浆段为其介导的反向信号所必需。