重组血红素加氧酶-2在大肠杆菌中表达与纯化方法的研究

目的　确定重组血红素加氧酶 2在大肠杆菌中表达与纯化方法。方法　将已构建的血红素加氧酶 2(HO 2 )的重组质粒pMW1 72a HO 2转入大肠杆菌BL 2 1 ,分析不同温度及摇床转速对HO 2表达的影响 ,确定可溶性表达最佳条件。使用超声波、超速离心、分级盐析、分子筛层析等方法纯化HO 2。检测酶活性。结果　确定了HO 2可溶性表达最佳条件为 37℃ ,(85± 5 )r min ;确定了HO 2具体纯化路线。得到蛋白纯度为 95 .0 % ,纯化倍数为 2 .9倍 ,收得率为 4 0 .9%的活性HO 2蛋白。结论　获得了纯度高、具有活性的HO 2蛋白 ,为进一步进行HO 2结构与功能之间关系的研究提供了可行的纯化路线     

钙敏感受体在大鼠心肌缺血/再灌注损伤的表达变化及与心肌损伤关系

目的： 观察钙敏感受体（CaSR）在大鼠心肌缺血/再灌注时的表达变化，揭示其与心肌缺血/再灌注损伤的关系。方法： Wistar大鼠随机分为5组：假手术组（sham组）、缺血再灌注1、2、4和6 h组（I/R 1 h、2 h、4 h、6 h组）。采用冠状动脉结扎和松结的方法，复制大鼠在体心肌缺血/再灌注损伤模型，记录左室收缩压（LVSP）和左室内压最大变化速率（±dp/dtmax），测定血清LDH、SOD活性和MDA含量，透射电镜观察心肌超微结构变化， RT-PCR法检测心肌组织中CaSR mRNA的表达变化。结果：LVSP、左室内压±dp/dtmax及SOD活性随再灌注时间延长而减低，LDH活性和MDA含量在再灌注2 h时最高；心肌超微结构损伤在再灌注1 h、2 h较重，随再灌注时间延长而减轻；大鼠心肌缺血/再灌注1 h、2 h心肌组织CaSR的mRNA表达升高，再灌注4 h、6 h后降低。结论： CaSR mRNA表达多时心肌损伤较重，CaSR可能参与了心肌缺血/再灌注损伤。     

大鼠心肌多巴胺受体在缺氧-复氧时的表达变化及其意义

目的： 观察大鼠心肌多巴胺受体在缺氧-复氧时的表达，初步探讨其与心肌缺氧-复氧损伤的关系。方法: 采用Langendorff离体灌流装置复制大鼠心肌缺氧-复氧模型。用RT-PCR和Western blotting结合图像分析系统，分别检测缺氧-复氧心肌多巴胺受体DR1、DR2 mRNA和蛋白质的表达变化；用紫外分光光度计测定大鼠冠脉流出液中LDH活性；透射电镜观察心肌超微结构的变化。结果: 大鼠心肌组织在缺氧40 min时的DR1、DR2 mRNA和蛋白表达高于正常对照组(P<0.05)，缺氧40 min后复氧1h显著高于正常对照组(P<0.01)，2 h达高峰，3 h、4 h后降低，但仍高于正常组(P<0.01)；同时随复氧时间延长，冠脉流出液中LDH活性增加，心肌超微结构损伤加重。结论: 大鼠心肌多巴胺受体DR1、DR2表达在缺氧-复氧过程中呈先升高后降低的特点，可能参与心肌缺氧-复氧损伤的发生。     

蚓激酶溶栓作用的实验研究

目的　研究蚓激酶在兔动 静脉旁路血栓形成模型中的溶栓作用。方法　将实验动物随机分为 6组 :模型组 ,生理盐水对照组 ,蚓激酶小剂量组 (2 5 μg kg) ,中剂量组 (5 0 μg kg) ,大剂量组 (10 0 μg kg) ,尿激酶阳性对照组 (2×10 4 U kg)。采用家兔颈动 静脉旁路模型 ,测定蚓激酶的溶栓作用 ;心脏取血 ,测定蚓激酶对血浆纤维蛋白原 (FIB)、血浆优球蛋白溶解时间 (ELT)、纤维蛋白裂解产物 (FDP)等生化指标的影响。结果　蚓激酶中剂量组与大剂量组可使ELT缩短 ,使血栓重量减轻 ;蚓激酶大、中、小剂量组可使FDP显著增多 ;蚓激酶对FIB影响不明显。结论　蚓激酶有抑制血栓形成 ,激活纤溶活性的作用 ,具有较好溶栓效力。     

钴原卟啉对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的研究钴原卟啉(COPP)预处理在H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用及分子机制。方法建立H9C2心肌细胞缺氧/复氧模型。在H9c2心肌细胞缺氧/复氧前用COPP预处理,并用锌原卟啉(Znpp),全反视黄酸(ATAR)分别抑制HO-1及Nrf2-ARE。检测细胞上清液中LDH、CK的水平变化;用RT-PCR法分析HO-1mRNA表达水平;Westernblot分析HO-1、Nrf2的蛋白表达水平。结果与缺氧/复氧组比,COPP预处理组中LDH和CK水平均明显降低,而HO-1mRNA水平,蛋白水平及细胞核的Nrf2蛋白水平均明显增加;Znpp的加入阻断了COPP预处理对心肌细胞的保护作用;ATAR的加入抑制了Nrf2在细胞核的聚集,进而抑制了COPP对HO-1的诱导。结论COPP预处理诱导H9c2心肌细胞HO-1过表达,具有抗心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用;其机制与Nrf2-ARE信号通路相关。     

MT2-MMP在Ⅱ期肺腺癌中的表达及临床意义

目的 探讨MT2-MMP在肺腺癌患者组织中的表达情况及其临床意义。方法 收集40例病理TNM分期Ⅱ期的肺腺癌组织标本,其癌旁正常组织为对照组,进行HE染色,免疫组织化学方法检测MT2-MMP的表达进行半定量分析;应用卡方检验分析MT2-MMP表达与临床病理特征的关系;结合TCGA肺腺癌数据分析MT2-MMP在肺腺癌中的表达情况。结果 肺腺癌组织呈现明显的肿瘤无序增殖病理特征;MT2-MMP在肺腺癌中表达高于癌旁正常组织,差异具有统计学意义(P＜0.001);肺腺癌组织中的MT2-MMP的表达水平与患者的肿瘤大小有关(P＜0.01),而与性别、年龄、是否有淋巴转移无明显相关(P＞0.05);TCGA大数据分析结果显示肺腺癌Ⅱ期及其他各期MT2-MMP的表达均显著高于正常组织,差异具有统计学意义(P＜0.01)。结论 MT2-MMP在Ⅱ期肺腺癌组织中呈高表达,可能参与肺腺癌早期的恶性进展,对肺腺癌的早期诊断具有潜在价值。     

戴明环在医院科研管理中的应用

目的 探讨戴明环在医院科研管理中的应用过程,提高科研管理效能与管理质量.方法 将戴明环的计划(Plan)、实施(Do)、检查(Check)和处理(Action)四个阶段PDCA应用于医院科研管理,通过制定计划与目标,采取措施,年度检查,找出问题、原因和总结经验等环节,将此循环周而复始不停地运转.结果 过程管理得到了进一步加强,实现了管理制度化、程序化、规范化,提高了科研管理人员的素质.结论 将PDCA循环应用于医院科研管理中可全面提高科研管理质量.     

人内皮抑素基因改造、表达、纯化及活性检测

目的克隆诱变的人内皮抑素(human endostatin,hES)氨基端基因,并检测其活性。方法双酶切已诱变的人内皮抑素基因,电泳回收氨基端片段,与质粒pTYB-2重组,转化E．coli BL-21(DE3)。通过鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验,MTT实验,HE染色及流式细胞术检测重组小分子人内皮抑素对新生血管生成、细胞增殖和细胞凋亡的影响。结果基因重组小分子内皮抑素对鸡胚尿囊膜新生血管生成具有明显的抑制作用;对脐静脉内皮细胞和肝癌细胞增殖的抑制存在量效关系;作用24h后,观察到细胞凋亡现象;与对照组相比,细胞凋亡数增加。结论成功构建了人内皮抑素氨基端基因工程菌,得到了具有生物活性的氨基端小分子内皮抑素,为便利临床应用奠定了基础。     

RNase L遗传改变与肿瘤相关性的研究进展

RNase L是先天免疫系统中的一个重要作用因子.能够使RNA水解从而抑制细胞蛋白质的合成.近年来,RNase L已被报道在多种肿瘤中存在表达差异,并与这些肿瘤的发生发展密切相关.因此,对于RNase L与肿瘤相关性研究可能为肿瘤的治疗提供新的靶点.本文主要对RNase L的结构与功能以及在遗传病方面的研究进展加以综述.