pCDM8-GFP报告载体的构建及鉴定

1　实验资料　ｐＤＭ 8 ＰＢＬｃＤＮＡ文库由Ｊａｃｋｓｏｎ博士惠赠 ,ｐＥＧＦＰ Ｎ3真核表达载体购自Ｃｌｏｎｔｅｃｈ公司 .ＮｏｔＩ、ＨｉｎｄⅢ和Ｔ4ＤＮＡ连接酶购自大连宝生物公司 .ＣＯＳ7细胞为本室冻存。ｐＣＤＭ8 ＧＦＰ载体的构建方法参照文献 .提取 ｐＣＤＭ8 Ｘ(Ｘ表示载体中插入的未知ｃＤＮＡ片段 )和 ｐＥＧＦＰ Ｎ3质粒 ,分别用ＮｏｔＩ和ＨｉｎｄⅢ进行双酶切 ,回收酶切片段 ,用Ｔ4连接酶进行连接 ,转化感受态宿主菌。挑单菌落培养 ,提取质粒用ＮｏｔＩ和ＨｉｎｄⅢ双酶切进行阳性克隆鉴定 .提取重组ｐＣＤＭ8 ＧＦＰ载…     

LAIR-1/LAIR-2(CD305/CD306)与配体结合亲和力的比较

目的:LAIR-1/LAIR-2(CD305/306)与配体结合亲和力的比较。方法:应用不同浓度混合的LAIR-1和LAIR-2融合蛋白,同时或先后与配体表达细胞孵育后,用特异性LAIR-1或LAIR-2单克隆抗体(mAb)进行免疫荧光染色和流式细胞术(FCM)分析,比较LAIR-1和LAIR-2融合蛋白与细胞结合的百分率的变化及相互竞争情况。结果:LAIR-1和LAIR-2膜型配体的分布较广泛,人和小鼠LAIR受体与配体的结合具有相互交叉的特点。LAIR-2能够明显阻断LAIR-1与其膜型配体的结合,而LAIR-1对LAIR-2与其配体的结合无影响。结论:LAIR-1和LAIR-2可能结合相同的膜型配体,但LAIR-2结合配体的亲和力明显高于LAIR-1结合的亲和力。此结果为深入探讨LAIR家族免疫调节的分子机制提供重要的实验依据。     

泛素水解酶22调控丝裂原活化蛋白激酶激酶6基因的转录活性

目的：克隆丝裂原活化蛋白激酶激酶6(mitogen-activated protein kinase kinase 6,MKK6)基因启动子,研究泛 素水解酶22(ubiquitin specific peptidase 22,USP22)对MKK6转录活性的调控作用。方法：采用PCR扩增MKK6基因启动 子片段,并以该片段为模板对USP22结合位点进行定点突变,将野生型与突变型启动子片段定向插入荧光素酶表达 载体pGL3-Basic;用重组载体与内参质粒pRL-TK共转染HeLa细胞,行双荧光素酶活性检测以确定其转录活性;利用 染色质免疫共沉淀(chromatin immunoprecipitation,ChIP)实验观察USP22蛋白与MKK6启动子是否存在直接的结合;下 调USP22表达后,检测MKK6转录活性的变化。结果：成功扩增MKK6启动子及其突变体并构建荧光素酶表达载体; USP22结合位点的突变导致该启动子活性在HeLa细胞中明显降低(P<0.05);USP22与MKK6启动子在细胞中存在直接结 合;抑制USP22的表达导致MKK6转录水平明显下降(P<0.05)。结论：在HeLa细胞中,USP22有效地调控MKK6基因的 转录。     

罗氏易位精子检测在辅助生殖技术中的应用

由于环境及人们生活方式的改变,不孕不育患者占人群比例大幅升高,不孕症将成为继肿瘤和心血管疾病之后,影响人类家庭生活质量的第三大疾病。导致不孕不育的原因多样化,男性因素引起的不育约占50%(World Health Organization,1999),其中遗传缺陷所致的精子发生障碍约占男性不育的30%以上[1]。本文主要就男性罗氏易位携带者的精子染色体结构、发     

系统性红斑狼疮患者的妊娠管理

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)是一种慢性炎症性自身免疫性疾病,好发于育龄期女性。SLE患者治疗的进展及合并妊娠时孕期多学科监测与管理的进步,使母体和胎儿都有了良好的预期结果。本文将对狼疮患者妊娠前、妊娠期、哺乳期等阶段所涉及的主要问题展开讨论。     

心脑联通胶囊治疗冠心病100例疗效观察

目的旨在应用心脑联通胶囊治疗冠心病100例疗效观察。方法100例冠心病患者服用心脑联通胶囊每次4粒每日三次,疗程一月。采用自身对照法,观察用药前后心绞痛控制总有效率,血脂疗效,心电图改善的变化。结果心脑联通胶囊治疗前后冠心病心绞痛控制率87.5%,P〈0.05;治疗前后血脂疗效（TC、TG、HDL）均P〈0.01;治疗前后心电图改善P〈0.05。结论心脑联通胶囊治疗冠心病疗效显著,在治疗过程无任何副作用。     

人pSecTag2B-CD226真核表达载体的构建、表达及初步鉴定

目的:构建含有6His标签的可溶性人CD226分子的真核表达载体pSecTag2B-CD226,并进行表达和初步鉴定。方法:PCR扩增CD226细胞膜外区,插入真核表达载体pSecTag2B,构建真核表达载体pSecTag2B-CD226。酶切和测序法鉴定后,转染COS-7细胞进行表达,培养上清液经抗CD226抗体免疫亲和层析柱纯化后用酶标记免疫吸附分析法(ELISA)进行初步鉴定。结果:经表达和纯化获得了含有CD226细胞膜外区的CD226-6His融合蛋白。结论:成功构建了可分泌人CD226蛋白的真核表达载体pSecTag2B-CD226,本实验结果将为进一步的功能学研究奠定基础。     

多黏菌素B抗炎作用机制的研究

目的观察多黏菌素B(PMB)和内毒素(LPS)共同处理大鼠肺泡巨噬细胞(PAM)后对核因子-κB(NF-κB)信号通路的变化。方法分离、培养大鼠PAM,分为正常对照组、LPS刺激组及PMB干预组。采用原位杂交(ISN)技术、凝胶电泳迁移率改变(EMSA)及ELISA法,检测刺激后0、15、30、60、120和240min各时相点PAM中IKK-βmRNA及IκB-α的表达、NF-κB的活性和TNF-α的含量。结果LPS刺激组IKK-βmRNA的水平在刺激后15min出现升高,30min达高峰,60min后逐渐下降;IκB-α的水平的变化趋势在各时相点与IKK-βmRNA刚好相反;NF-κB活性的峰值相出现在60min,15min出现升高,120min后逐渐下降;TNF-α的含量峰值相出现在60min,30min出现升高,120~240min后恢复至刺激前水平。PMB干预组NF-κB的活性与TNF-α的含量虽较刺激前和正常对照组升高,但均显著低于LPS刺激组(P<0.01)。IκB-α水平的最低值显著高于LPS刺激组(P<0.01);而IKK-βmRNA的峰值则显著低于LPS刺激组(P<0.01)。结论LPS能诱导PAM中的IKK-β激活、IκB-α降解和NF-κB活化,并促进TNF-α释放。而PMB则能抑制LPS诱导的IKK-β激活、IκB-α降解、NF-κB活化和TNF-α释放。     

推拿联合中药热敷治疗神经根型颈椎病疗效观察

目的观察推拿联合中药热敷治疗神经根型颈椎病的临床疗效。方法将60例神经根型颈椎病患者随机分为两组,均采用推拿手法治疗,治疗组加用中药热敷;两组均以10d为1疗程,治疗3个疗程后评效。结果治疗组总有效率（96.67%）,高于对照组（83.33%）。结论推拿联合中药热敷治疗神经根型颈椎病疗效确切。     

铝暴露对大鼠记忆学习的影响及其机制研究

[目的]通过观察慢性铝暴露后大鼠学习记忆行为学、神经生化（ERK含量、磷酸化水平）指标变化，探讨铝影响学习记忆的作用机制，并为中医学“脑主神明”理论提供实验依据。[方法]给大鼠自由饮用不同剂量AlCl3水溶液的方法实行铝暴露，观察大鼠圆形Morris水迷宫学习记忆的行为学表现，蛋白免疫印迹（Western—Blot）方法测定各组细胞外信号调节激酶（ERK1／2）活性及含量变化。[结果]对照组、低剂量组、高剂量组的行为学表现和Western—Blot ERK表达比较有显著差异（P〈0．05）。[结论]中医学“脑主神明”理论是正确的而且铝暴露可以影响大鼠的学习记忆。