刚地弓形虫培养上清对卵巢癌SKOV-3细胞的影响

目的:研究体外培养条件下的弓形虫培养上清对卵巢癌细胞SKOV-3细胞增值的影响及诱导其凋亡的情况.方法:取对数生长期的SKOV-3细胞(数量为5×107/L)分别接种于不同细胞培养板,对照组加入RPMI-1640孵育,试验组加入相同体积不同数量(3×1010/L,6×1010/L,12×1010/L)弓形虫速殖子培养上清,四甲基氮噻唑蓝(MTT)法检测吸光度(A490nm值)并计算SKOV-3细胞增值抑制率;Annexin-V-FITC/PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点细胞凋亡率;并以荧光显微镜观察SKOV-3细胞形态改变情况;以琼脂糖凝胶电泳观察SKOV-3细胞凋亡DNA条带.结果:MTT法检测结果显示SKOV-3细胞增殖抑制率随着弓形虫速殖子培养上清数量和作用时间增加均明显增大,12×1010/L数量组72h抑制率最高可达(33.52±2.63)%,弓形虫速殖子培养试验组抑制率与对照组之间比较差异均有统计学意义(P<0.05).弓形虫培养上清流式细胞仪检测显示SKOV-3细胞凋亡率随着时间增加有升高趋势,48h达到凋亡最高值(18.23%),48h后凋亡率开始下降,死亡率增加.荧光显微镜观察到试验...     

过氧化氢酶:二甲双胍药理效应新靶点?

降糖药二甲双胍(MET)具有降糖、抗炎等多种药理学效应,这些效应主要依赖于腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)。但我们近期发现MET也可通过AMPK非依赖的方式直接结合过氧化氢酶(CAT)并增强CAT活性。我们推测这可能是MET发挥效应的新机制,并在小鼠内毒素性肝炎模型上开展了系列研究。结果发现:MET在减轻内毒素性肝炎的同时可增强肝内CAT活性、且CAT在内毒素性肝炎中发挥保护效应,但CAT抑制剂并不能消除MET对内毒素性肝炎的保护效应,MET激活CAT的效应在内毒素性肝炎中无重要药理意义。因而,CAT是否为MET药效新靶点有待进一步研究。     

二甲双胍对内毒素性肝损伤的保护效应与过氧化氢酶的关联性研究

 目的 本实验在前期发现二甲双胍可减轻脂多糖/右旋半乳糖胺诱导的内毒素性肝损伤的基础上,进一步探讨二甲双胍保肝效应与过氧化氢酶的可能关联。方法 雄性Balb/c小鼠经腹腔注射脂多糖/右旋半乳糖胺诱导急性肝损伤,随后检测二甲双胍对肝内过氧化氢酶活性的影响并观察过氧化氢酶抑制剂氨基三唑可否阻断二甲双胍对肝损伤的保护效应。结果 二甲双胍处理可提高脂多糖/右旋半乳糖胺暴露小鼠肝内过氧化氢酶活性、降低过氧化氢及丙二醛水平。过氧化氢酶抑制剂氨基三唑可明显消除二甲双胍对模型小鼠肝内过氧化氢酶活性的增强作用,但氨基三唑仅能部分消除二甲双胍对过氧化氢水平的抑制作用,氨基三唑不能消除二甲双胍对丙二醛生成、血浆丙氨酸氨基转移酶和天冬氨酸氨基转移酶升高的抑制效应,氨基三唑也不能消除二甲双胍对模型小鼠肝组织病变的改善效应。结论 本实验结果提示二甲双胍可增强脂多糖/右旋半乳糖胺暴露小鼠肝组织内过氧化氢酶活性,但这一效应在二甲双胍的保肝效应中不具有重要意义。     

刚地弓形虫ME49株对体外培养的小鼠胎盘滋养细胞凋亡的影响

目的研究刚地弓形虫ME49株对体外培养的孕期小鼠胎盘滋养层细胞凋亡的影响。方法制备小鼠胎盘滋养层细胞并分别接种于不同细胞培养板,对照组加入DMEM高糖培养液孵育,实验组加入相同体积不同密度(2×106/ml、4×106/ml、8×106/ml)弓形虫速殖子培养8h后,AnnexinⅤ-FITC/PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点细胞凋亡率变化,以蛋白质印迹法分析凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果流式细胞仪检测弓形虫感染后的滋养层细胞凋亡率较对照组有升高趋势(P0.05),呈量效依赖性,弓形虫密度8×106/ml组8h凋亡率最高,为28.37%;荧光显微镜观察,随弓形虫感染密度增加,滋养层细胞凋亡数目增多。蛋白质印迹法检测刚地弓形虫ME49株作用于滋养层细胞8h后实验组的Bax、Bcl-2蛋白表达(与β-actin比值)各为1.24±0.05、1.37±0.03、1.78±0.04与1.15±0.03、1.09±0.05、0.97±0.01,较对照组的比值(1.17±0.06和1.23±0.02)有明显的改变(P0.05)。结论刚地弓形虫ME49株可促进体外培养的孕期小鼠滋养细胞正常凋亡,其机制可能与滋养细胞Bax表达上调和Bcl-2表达下调有关。     

刚地弓形虫培养上清对THP-1增殖的影响及可能机制

 利用弓形虫速殖子细胞内寄生的特性和对宿主细胞生物学行为的影响,提取弓形虫体外细胞共培养上清,并研究上清对人急性单核细胞白血病细胞THP-1增殖及细胞周期的影响。方法 取对数生长期的THP-1细胞（浓度为5×105）分别接种于不同细胞培养瓶,对照组加入含10%胎牛血清RPMI-1640,试验组加入相同体积不同数量(2×107mL-1、 4×107mL-1、 8×107 mL-1 )弓形虫速殖子培养上清孵育不同时间后, MTT法检测THP-1细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞周期改变;以Western印迹方法分析上清作用48h后细胞核转录因子NF-κB/p65与周期蛋白cyclinD1表达或活性的变化。结果 MTT法检测结果显示弓形虫培养上清抑制THP-1细胞株增殖,且呈时间剂量依赖性。流式细胞仪检测显示处理组细胞周期在G0/G1期产生阻滞; Western印迹方法分析THP-1细胞株的NF-κB/p65、cyclin D1 蛋白表达量下降,结论 刚地弓形虫培养上清能够抑制人急性单核细胞白血病细胞THP-1细胞株增殖并可通过细胞株的NF-κB信号途径来下调cyclin D1蛋白表达引起人急性单核细胞白血病细胞THP-1细胞株G0/G1期阻滞。     

香菇多糖促BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞抗弓形虫感染的研究

目的:研究香菇多糖预处理对弓形虫感染后BALB/c小鼠巨噬细胞免疫功能的影响.方法:将45只周龄、体重相近的雌性BALB/c小鼠随机均分为3组,即空白对照(无菌生理盐水)、模型(无菌生理盐水)和香菇多糖组(0.5g·L-1).各组小鼠以每次1mL、每天1次腹腔注射给药,连续给药5 d后,第6天模型与香菇多糖组各用3×1...     

刚地弓形虫RH株对小鼠胎盘滋养细胞凋亡的影响

目的 通过研究刚地弓形虫强毒株RH株对体外培养的孕期小鼠胎盘滋养层细胞凋亡的影响,初步探讨不同毒力虫株引起病理妊娠的机制.方法 将小鼠胎盘滋养层细胞分别接种于不同细胞培养瓶,对照组加入DMEM培养基孵育,实验组加入相同体积不同数量(2×106/ml、4×106/ml、8×106/ml)弓形虫速殖子培养2、4、8 h,Annexin-V-FITC/PI染色细胞后上流式细胞仪检测各个时间点细胞凋亡率变化;荧光显微镜观察细胞形态改变情况;Western blot分析凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达或活性.结果 流式细胞仪检测弓形虫感染后的滋养层细胞凋亡率较对照组有下降趋势(P<0 05),呈量效依赖性,弓形虫数量8×106/ml实验组8 h凋亡率最低,为(15.81±0.19)%;荧光显微镜观察到8 h不同数量实验组滋养细胞凋亡形态改变情况,各组均有典型的早期凋亡细胞:细胞膜着绿色,细胞核拒染.随着弓形虫感染数量增加,凋亡细胞数目有所减少.Western blot 检测刚地弓形虫RH株作用于滋养层细胞8 h后实验组的Bax、Bcl-2蛋白表达较对照组分别有明显的降低与升高(P<0.05).结论 刚地弓形虫RH株可抵抗体外培养的孕期小鼠滋养细胞正常凋亡,其机制可能与滋养细胞Bax表达下调和Bcl-2表达上调有关.     

替米沙坦对2型糖尿病大鼠肾脏内氧化应激及NIH3T3细胞中促成熟因子活性的影响

目的 探讨替米沙坦对2型糖尿病大鼠肾脏氧化应激和NIH3T3细胞中促成熟因子(MPF)活性的影响.方法 将动物分为正常对照组、糖尿病组及替米沙坦治疗组,检测各组给药4,5,11,17周后的血糖、血胰岛素、血脂(TG,TC),11,17周的血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、尿微白蛋白排泄率(UAE)、肾组织中丙二醛(MDA)含量、铜,锌-超氧化物歧化酶(Cu,Zn-SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)及MPF活性.结果 与糖尿病组相比,替米沙坦治疗组血糖、血胰岛素及血脂无明显变化,而Scr,BUN,UAE、肾脏MDA含量、肾细胞膜MPF均明显下降,肾脏抗氧化酶活性(Cu,Zn-SOD,CAT,GSH-Px)则明显上升.肾脏内MDA含量的变化及抗氧化酶活性的变化与细胞膜、细胞浆MPF活性的变化相关.结论 替米沙坦可以抑制2型糖尿病大鼠肾脏内的氧化应激,并且可能与其下调MH3T3细胞中MPF活性有关.     

替米沙坦对2型糖尿病大鼠肾脏内氧化立激及NIH3T3细胞中促成熟因子活性的影响

目的探讨替米沙坦对2型糖尿病大鼠肾脏氧化应激和NIH3T3细胞中促成熟因子（MPF）活性的影响。方法将动物分为正常对照组、糖尿病组及替米沙坦治疗组，检测各组给药4，5，11，17周后的血糖、血胰岛素、血脂（TG，TC），11，17周的血肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、尿微白蛋白排泄率（UAE）、肾组织中丙二醛（MDA）含量、铜，锌-超氧化物歧化酶（Cu，Zn—SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化酶（GSH—Px）及MPF活性。结果与糖尿病组相比，替米沙坦治疗组血糖、血胰岛素及血脂无明显变化，而Scr，BUN，UAE、肾脏MDA含量、肾细胞膜MPF均明显下降，肾脏抗氧化酶活性（Cu，Zn—SOD，CAT，GSH—Px）则明显上升。肾脏内MDA含量的变化及抗氧化酶活性的变化与细胞膜、细胞浆MPF活性的变化相关。结论替米沙坦可以抑制2型糖尿病大鼠肾脏内的氧化应激，并且可能与其下调NIH3T3细胞中MPF活性有关。     

刚地弓形虫培养上清对乳腺癌MCF-7细胞增殖及凋亡的影响

目的观察体外培养条件下弓形虫培养上清对乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖及其诱导其凋亡的情况。方法取对数生长期的MCF-7细胞(浓度为5×104和5×105)分别接种于不同细胞培养板,加入相同体积不同浓度弓形虫速殖子培养上清(速殖子浓度分别为2×107/mL、4×107/mL、6×107/mL、8×107/mL)与培养液共同作用12h、24h、48h、72h,四甲基氮噻唑蓝(MTT)法检测吸光度(A490值)并计算抑制率;Annexin-v-FITC/PI染色细胞后上流式细胞仪检测细胞凋亡率;AO/EB染料染色作用后细胞在荧光显微镜下观察细胞形态改变情况并拍照;琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡DNA条带。结果MTT法检测结果显示MCF-7细胞增殖抑制率随着上清浓度和作用时间增加均明显增大,各实验组抑制率与对照组比较以及对照组之间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测显示MCF-7细胞凋亡率随着上清浓度和作用时间增加明显增大,48h达到凋亡最高值(19.79%),48h后凋亡率开始下降,死亡率增加;荧光显微镜观察实验组培养48h的MCF-7细胞,出现细胞核固缩及凋亡小体,对照组未出现凋亡小体。琼脂糖凝胶电泳见DNA梯形条带。结论弓形虫速殖子对体外培养MCF-7细胞增殖有明显的抑制作用,并可诱导MCF-7细胞凋亡。