G-CSF和GM-CSF对髓系白血病细胞增殖的影响

目的 了解粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）和粒细胞－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）对髓系白血病细胞增殖的影响。方法 采用甲基纤维素半固体培养法培养白血病细胞集落（ＣＦＵ－Ｌ）,观察Ｇ－ＣＳＦ和ＧＭ－ＣＳＦ对１１例ＡＭＬ和ＣＭＬ患者外周血ＣＦＵ－Ｌ形成的影响。结果 ＣＭ－ＣＳＦ对ＣＦＵ－Ｌ的促进作用明显高于Ｇ－ＣＳＦ（Ｐ＝０．０１２）,而Ｇ－ＣＳＦ对ＣＦＵ－Ｌ形成影响与对照组没有显著性差别（Ｐ＝０．４９５）。结论 Ｇ－ＣＳＦ对髓系白血病细胞体外增殖无明显影响,作为髓系白血病大剂量化疗的支持治疗可能更为安全。     

AML-M2a诱导TCR Vβ T细胞的克隆性增殖和细胞毒作用

目的:了解急性髓性白血病(AML)M2a细胞诱导的体外增殖T细胞的特异性杀伤作用和克隆性增殖情况.方法:利用肿瘤细胞-T淋巴细胞混合培养方法(MLTC),分别收集3例经AML-M2a细胞体外诱导不同扩增时间的健康人T细胞,利用LDH释放方法分析其特异性细胞毒作用,同时利用RT-PCR和基因扫描方法分析经AML-M2a细胞诱导前后T细胞的24个TCR Vβ亚家族基因的表达和克隆性情况.结果:在培养第12天和第21天时,1例AML-M2a细胞诱导的3例健康人T细胞对该诱导细胞的平均杀伤率分别为39.88±7.79%和62.14±9.79%,而对AML-M2a患者和健康人外周血T细胞均无杀伤作用.TCR Vβ谱系分析发现诱导后3例健康人T细胞均出现Vβ16的克隆性增殖.结论:AML-M2a细胞可诱导健康人T细胞成为具有克隆性增殖的特异性CTL,并以Vβ16的克隆性增殖为主.     

血清核苷二磷酸激酶A(NDPK-A)含量测定及其临床意义初探

[目的]研究血清核苷二磷酸激酶A(NDPK-A)含量与白血病的相关性,探讨血清NDPK-A含量检测对于白血病早期诊断和疗效判断意义。[方法]应用重组人NDPK-A及相应抗体建立双抗体夹心ELISA测定NDPK-A含量方法,应用此方法测定正常人和血液病患者血清NDPK-A含量。[结果]20例正常人血清NDPK-A含量为3.89±0.39μg/L,16例白血病患者血清NDPK-A含量为11.06±18.03μg/L,5例骨髓瘤患者患者血清NDPK-A含量为4.80±0.96μg/L,5例淋巴瘤患者血清NDPK-A含量为24.31±5.65μg/L。白血病患者治疗前后血清NDPK-A含量差异显著,7例治疗前患者NDPK-A含量为16.23±26.61g/L,治疗后患者NDPK-A含量为7.05±6.10g/L。[结论]建立的ELISA方法简单,灵敏、准确地测定血清NDPK-A含量;NDPK-A含量检测可发展为白血病的早期诊断和疗效判断指标。     

非霍奇金淋巴瘤病人外周血T细胞TCR Vβ谱系的选择性利用和克隆性增殖分析

为了解B细胞性非霍奇金淋巴瘤（B－NHL）和T细胞性非霍奇金淋巴瘤（T－NHL）病人TCR Vβ亚家族T细胞的分布及其克隆性的情况，利用RT－PCR分别扩增4例B－NHL和2例T－NHL病人外周血单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族基因的CDR3，了解病人各Vβ亚家族的利用情况。阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度，以了解T细胞克隆性。结果显示，6例NHL病人外周血T细胞仅选择性表达6－12个Vβ亚家族，全部病人均选择了表达Vβ，Vβ8，Vβ13和Vβ19，5例病人表达Vβ2和Vβ16，而全部病人均未能检测到Vβ4－6，Vβ10－12，Vβ15，Vβ17－18，Vβ20，Vβ22－23。基因扫描发现2例B－NHL和1例T－NHL病人的1－3个Vβ亚家族T细胞呈克隆性增殖。结论提示，B－NHL和T－NHL病人外周血T细胞具有相似的Vβ亚家族选择性利用的特点，部分病人存在与肿瘤细胞抗原相关的克隆性增殖的T细胞。     

T细胞中TCR Vα40与TCR Dδ3,Jδ1和ψJα重排的特点

利用巢式PCR扩增10例正常人外周血单个核细胞、4例分选的外周血CD3^ 细胞和7例心胸外科手术的非免疫性疾病和非肿瘤病人的正常胸腺细胞DNA的TCR Vα40基因与Jδ1，Dδ3和ψJα重排的情况，从对不同含量DNA的PCR分析，了解其重排分布频率。结果显示，TCR Vα40分别与Jδ1，Dδ3和ψJα重排均可见于多6数外周血T细胞和胸腺细胞中，对不同含量DNA的PCR分析显示TCR Vα40重排的分布频率在外周血和胸腺细胞有所不同。研究结果提示，TCR Vα40-ψJα的重排最常见于成熟和未成熟T细胞中，而TCR Vα40-Dδ3则在未成熟T细胞中发生频率更高。     

下调PPP2R5C表达对Jurkat细胞GSK-3β、MDM2、pTEN、TP53通路相关调控基因表达谱的影响

目的 利用基因芯片技术研究RNA干扰下调PPP2R5C对Jurkat细胞中GSK-3β、MDM2、pTEN、TP53通路相关基因表达的影响。方法 利用核转染技术将PPP2R5C-siRNA799转导Jurkat细胞,培养48 h后,提取细胞总RNA,纯化mRNA后反转录制备目标序列,与Affymetrix基因表达谱芯片3’IVT杂交,以Affymetrix GeneChip Scanner 3000扫描仪扫描得到原始图像数据,并应用GeneSpringGX 11.0软件进行差异表达谱分析。结果 基因芯片分析GSK-3β、MDM2、pTEN、TP53信号通路相关的47个基因,发现全部基因发生了差异表达,其中上调基因有22个,下调基因有25个。明显上调的基因有SNAI1、APC、CDKN1A、ATM、MDM2和pTEN,而明显下调的基因只有GSK-3β。结论 下调Jurkat细胞PPP2R5C基因时,在一定程度上选择性调节涉及细胞增殖和凋亡相关的GSK-3β、MDM2、pTEN和TP53信号通路基因的表达,从而抑制Jurkat细胞增殖。     

AMLM2a型细胞诱导自体及异体优势增殖TCR Vβ亚家族T细胞的研究

目的：研究急性髓细胞性白血病M2a亚型（AML-M2a）患者外周血白血病细胞反应性T细胞受体V区β链(TCR Vβ)亚家族T细胞体内外优势表达情况及其体外细胞毒性分析。方法：采用混合淋巴细胞/肿瘤细胞培养法(MLTC)将AML-M2a细胞与自体或正常人外周血T细胞体外混合培养和扩增,用反转录多聚酶链反应(RT-PCR)分析MLTC前后患者和正常人T细胞TCR 24个Vβ亚家族的表达情况,同时用四甲基偶氮唑盐(MTT)法对其进行细胞毒性分析。结果：AML-M2a患者和正常人T细胞在MLTC培养后均出现了TCR Vβ亚家族优势表达情况,与淋巴因子激活杀伤细胞(LAK细胞)相比具较高特异性的细胞毒性(P<0.01)。结论：AML-M2a细胞可以诱导自体与异体特异性细胞毒性T细胞(CTL),且其主要为一些优势的TCR Vβ亚家族T细胞。     

Semaphorin Ⅲ和neuropilin-1在正常人和CML患者外周血与骨髓中的表达及意义

ｅｕｒｏｐｉｌｉｎ 1又称ＮＲＰ1或ＶＥＧＦ16 5Ｒ ,是细胞膜表面蛋白 ,与其配体ｓｅｍａｐｈｏｒｉｎⅢ相互作用在神经系统的生长发育调节中起重要作用。最近发现ｎｅｕｒｏｐｉｌｉｎ 1也表达于骨髓基质细胞 ,而ｓｅｍａｐｈｏｒｉｎⅢ表达于骨髓造血细胞 ,两者可能参与造血调控。本研究 2 0 0 1年 6月至 2 0 0 2年 1月检索文献、搜集样本及检测分析 ,旨在分析它们在正常人和ＣＭＬ患者骨髓及外周血中的表达情况 ,为进一步研究其在造血调控和血液病发病中的作用提供线索。对象和方法一、样本取材与处理 :(1)骨髓 ,经细胞形态学和组织化学…     

下调PPP2R5C表达对Jurkat细胞TAL1相关调控基因表达谱影响的初步分析

目的:前期研究显示,下调PPP2R5C表达能抑制T细胞白血病细胞株Jurkat细胞增殖。本研究利用基因芯片技术分析RNA干扰下调PPP2R5C表达对Jurkat细胞中TAL1通路相关基因的影响。方法:利用核转染技术将PPP2R5C-siRNA799转导Jurkat细胞,培养48 h后,提取细胞总RNA,纯化mRNA后逆转录制备目标序列,与Affymetrix基因表达谱芯片3'IVT杂交,以Affymetrix Gene Chip Scanner 3000扫描仪扫描得到原始图像数据,并应用Gene spring GX 11.0软件进行差异表达谱分析。结果:基因芯片分析的TAL1信号通路相关的26个基因全部发生了差异表达,其中上调表达的基因有15个,下调表达的基因有11个;明显上调表达的基因有GATA1、TCF4、XRCC6和TCF3,而明显下调表达的基因有SIN3A和RUNX1。结论:下调Jurkat细胞PPP2R5C基因表达,在一定程度上能抑制TAL1信号通路基因,从而抑制Jurkat细胞增殖。