急性早幼粒白血病细胞ATRA耐药株HL-60R、NB4R的构建及鉴定

目的：构建急性早幼粒细胞白血病细胞系HL-60、NB4的全反式维甲酸耐药株HL-60 R、NB4 R,并对其生物学性状进行鉴定。方法：以全反式维甲酸（ ATRA ）为诱导药物,采用浓度递增间歇诱导法构建HL-60、NB4细胞相应的ATRA耐药株。 CCK8法鉴定其ATRA耐药性,并检测耐药细胞株的生长曲线及多药耐药性。结果：成功构建了ATRA耐药细胞株HL-60 R、NB4 R,并发现与亲代细胞相比,其生长增殖速度减慢,群体倍增时间延长,且对其它多种化疗药物产生一定程度的交叉耐药。结论：成功构建的耐药细胞系HL-60R、NB4R为急性早幼粒细胞白血病多药耐药机制的进一步研究奠定了基础。     

江苏汉族人群KIR配体HLA-Cw位点基因多态性研究

目的使用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)法检测江苏地区汉族人群KIR配体HLA-Cw的基因多态性。方法合成10对特异性分型引物及1对内参照引物,对183例江苏地区汉族无关个体进行HLA-Cw低分辨率分型。用χ2检验对等位基因表现频率进行统计分析。结果共检出8种等位基因;HLA-Cw01～08的基因频率分别为0.17、0.01、0.19、0.07、0.00、0.11、0.15、0.11,其中HLA-Cw01、03、06、07型为常见型;有12例样本未扩增出HLA-Cw01～08等位基因型,占总人数的6.60%。经吻合度χ2检验验证,所有样本符合Hardy-Weinberg平衡(χ2=223.5,df=28,P>0.05)。第一组的HLA-Cw02、04、05、06基因频率之和(GF=0.186 9)小于第二组的HLA-Cw01、03、07、08型之和(GF=0.606 3),差异具有统计学意义(P<0.01)。结论江苏地区汉族人群HLA-Cw基因分布具有明显的不均衡性和独特的地理和人种特征。HLA-Cw01～08等位基因的分布以HLA-Cw01、03、06、07为主。     

肝癌细胞中HLA I类重链基因表达与启动子区域甲基化的相关性

目的:研究肝癌细胞株中DNA甲基化与HLAI类分子异常表达的相关性。方法:应用MSP技术对相关细胞系的HLA I类分子重链A、B、C位点启动子区域CpG岛的甲基化状态进行分析,Real-time PCR检测HLAI类分子重链mRNA水平的表达情况,Western blot检测RNA干扰后HLAI类分子重链表达情况。结果:在8株肝癌细胞系中HLA I类分子重链A、C位点启动子区域CpG岛存在甲基化;将启动子区域的DNA甲基化与相关基因表达数据相比较显示二者没有关联性;在RNA干扰DNA甲基化转移酶3a或3b的肝癌细胞系SMMC7721中,比较基因干扰前后HLA I类分子重链蛋白表达无显著变化。结论:在研究的肝癌细胞系中DNA甲基化没有参与调控肝癌中HLA I类分子的异常表达。     

关于高等学校医学专业开设综合性、设计性实验课程的思考

探讨了高等学校医学专业开设综合性、设计性实验课程的关键要素,指出了实验课程对人才培养的重要性,主要对综合性、设计性实验课程的内涵与定位、实施步骤与关键环节、课程精髓进行了多方面的探讨。医学专业开设综合性、设计性实验课程,是进一步提高学生创新能力和综合素质的基本要求,同时也是医学教育改革面临的艰巨任务。     

江苏启东地区人群KIR基因型及单倍型与HBsAg清除相关

目的探讨杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell immunoglobulin-like receptor,KIR)的多态性、KIR基因型及单倍型与乙型肝炎病毒(HBV)感染不同转归之间的相关性。方法以肝癌高发的启东地区HBV感染男性人群为研究对象,随访10年后对其再次进行血清学检测,按照HBsAg是否转阴分为HBsAg转阴组(161例)和HBsAg持续阳性组(493例)。采用序列特异性引物PCR方法进行KIR分型,用χ2检验对KIR等位基因阳性率、KIR基因型、KIR单倍型进行统计学分析。结果 HBsAg转阴组KIR2DS4(d)、单倍型1和基因型AG的频率高于HBsAg持续阳性组(P=0.014、P=0.029、P=0.048);KIR2DL5的频率低于HBsAg持续阳性组(P=0.044)。结论江苏启东地区KIR2DS4(d)、单倍型1和基因型AG可能是HBsAg转阴的保护因素,KIR2DL5可能是HBsAg持续阳性的风险因素。     

SLE患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因相关性分析

SLE是一种慢性自身免疫病.遗传和环境因素及机体免疫状态在其发病中占重要地位.免疫系统中T淋巴细胞和自然杀伤(NK)细胞功能异常与其发牛发展密切相关~([1]).杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)主要表达于NK细胞和部分T淋巴细胞表面,具有高度多态性.     

SARS冠状病毒S蛋白基因片段的表达及其单克隆抗体的制备

目的: 表达SARS冠状病毒S蛋白片段,并制备特异性单克隆抗体(mAb).方法: 原核表达SARS冠状病毒S蛋白片段,从SARS病毒cDNA中扩增S蛋白(N端205至419aa)基因片段,测序结果正确.将该基因片段插入pQE-30中,构建重组质粒pQE-30-S1m,以重组质粒转化E.coli M15诱导表达His-S1m蛋白.纯化后免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性mAb.结果: 表达并纯化了重组蛋白His-S1m,获得1株抗His-S蛋白的mAb1H2.Ig亚类鉴定为IgG1a,轻链为κ型.经Western blotting检测,mAb1H2与S蛋白发生特异性反应,而与His蛋白无交叉反应.结论: 成功表达了重组S蛋白并制备了特异性mAb,为SARS-CoV的早期诊断及进一步研究S蛋白的功能奠定了基础.     

抗ARL-1单克隆抗体的制备及初步应用

目的: 制备抗醛糖还原酶相似蛋白(aldosereductaselikeprotein, ARL- 1)的单克隆抗体 (mAb)并进行初步应用。方法: 用纯化的ARL- GST蛋白免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备mAb。间接ELISA法、Westernblot及免疫组织化学染色法, 对mAb进行鉴定及初步应用。结果: 获得 1株可稳定分泌抗ARL -1蛋白mAb的杂交瘤细胞系。mAb的Ig亚类为IgG2b, 轻链属于κ型。腹水mAb的效价为: 1∶4. 096×105。Westernblot的结果表明, ARL 1蛋白在被检测的肝癌组织中呈高表达, 而在相应的癌旁组织中不表达。免疫组织化学染色的结果表明, ARL -1蛋白在肝癌组织中呈高表达且主要定位在胞质内。结论: 成功地制备 1株抗ARL -1蛋白的mAb。初步应用的结果表明, ARL- 1蛋白在肝癌组织中呈高表达, 为进一步研究ARL -1蛋白的功能, 以及其与肝癌的确切关系奠定了基础。     

人源性噬菌体抗体库的构建和抗CEA抗体的筛选及表达

目的构建人源性噬菌体抗体库,筛选和表达人源性抗癌胚抗原(CEA)单克隆抗体。方法从结肠癌患者肠系膜淋巴结中的淋巴细胞克隆出免疫球蛋白Fd段和κ链基因,建成噬菌体抗体库。用人CEA对抗体库进行筛选,将得到的阳性克隆进行表达及检测。结果抗体库库容为5．2×106,Fab基因重组率为30％。ELISA及Western blot分析检测,证实表达出人源抗CEA单克隆抗体。DNA序列测定,证实所获基因为人免疫球蛋白可变区基因。结论成功构建噬菌体抗体库,从中获得人源性抗CEA的单克隆抗体。     

肝癌细胞中HLA Ⅰ类重链基因表达与启动子区域甲基化的相关性

目的： 研究肝癌细胞株中DNA甲基化与HLA Ⅰ类分子异常表达的相关性.方法： 应用MSP技术对相关细胞系的HLA I类分子重链A、B、C位点启动子区域CpG岛的甲基化状态进行分析, Real-time PCR检测HLA Ⅰ类分子重链mRNA水平的表达情况, Western blot检测RNA干扰后HLA Ⅰ类分子重链表达情况.结果： 在8株肝癌细胞系中HLA I类分子重链A、C位点启动子区域CpG岛存在甲基化; 将启动子区域的DNA甲基化与相关基因表达数据相比较显示二者没有关联性; 在RNA干扰DNA甲基化转移酶3a或3b的肝癌细胞系SMMC7721中, 比较基因干扰前后HLA Ⅰ类分子重链蛋白表达无显著变化.结论： 在研究的肝癌细胞系中DNA甲基化没有参与调控肝癌中HLA Ⅰ类分子的异常表达.