重组小鼠干细胞逆转录病毒载体高效基因转染CD41+、UT7、U937和MDA-MB-435细胞

目的:研究重组小鼠干细胞逆转录病毒载体介导基因转染,探索一条高效基因转染的途径,为重组小鼠干细胞逆转录病毒载体在基因转染中的应用提供理论依据和奠定实验基础。方法:①逆转录病毒载体的构建:EC1-4(repeats1-4ofcadherin-5extracellulardomains)基因克隆产物和mutant(Ser222A)MEK1基因克隆产物,Bg1Ⅱ和EcoRⅠ限制性内切核酸酶切割后,克隆进入逆转录病毒表达载体pMSCV。②CD41⁺细胞的获取和细胞培养:从脐带血分离的CD34⁺细胞通过TPO诱导表达CD41,FACS分离CD41⁺细胞。高糖DMEM培养液培养NIH3T3和MDA-MB-435细胞,U937细胞培养在RPMI-1640培养液,UT7细胞是细胞因子依赖性细胞株,Iscove'smodifiedDulbeco's培养液中加入GM-CSF。③测定病毒滴度:逆转录病毒载体转入包装细胞293,36h后收集病毒上清液,感染NIH3T3细胞,流式细胞仪测定病毒滴度。④Westernblot:基因转染CD41⁺、UT7、U937和MDA-MB-435细胞,Westernblot检测基因产物的表达。结果:293细胞产生高滴度MEK1pMSCV病毒:3.1×10⁷,高滴度EC1-4pMSCV病毒:1.0×10⁸。用稀释8倍的病毒转染基因,重组逆转录病毒MEK1pMSCV转染白血病细胞株UT7和U973,GFP阳性细胞(转染阳性细胞)分别是60.73％、72.56％。重组逆转录病毒MEK1pMSCV转染原代培养细胞CD41⁺,GFP阳性细胞为30.57％。重组逆转录病毒EC1-4pMSCV转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-435,GFP阳性细胞为97.54％。TPO作用CD41⁺和UT7细胞以及血清对U973细胞的作用,显示出外源mutationMEK基因的dominantnegative的效应,实验组磷酸化的MEK1减少。EC1-4基因转染的MDA-MB-435细胞表达了EC1-4基因产物。结论:重组小鼠干细胞逆转录病毒载体能高效基因转染CD41⁺、UT7、U937和MDA-MB-435细胞,转染的基因能稳定地表达。     

重组人白细胞介素-13对巨核细胞系-Dami细胞原癌基因c-mpl表达的影响

目的:研究重组人白细胞介素-13(rhIL-13)对巨核细胞系-Dami细胞原癌基因c-mpl表达的影响.方法:实验组细胞培养系统中分别加入25 ng/ml,50 ng/ml,100ng/ml rhIL-13,对照组不加任何细胞因子.用RT-PCR法检测c-mpl mRNA的表达.结果:经25 ng/ml、50 ng/ml、100ng/ml rhIL-13处理过的实验组Dami细胞较之对照组其c-mpl mRNA的表达分别提高24.8%、27.9%和31.5%.结论:rhIL-13增强了Dami细胞原癌基因c-mpl表达;rhIL-13促进Dami细胞增殖的部分机制可能是通过上调c-mpl的表达来实现的.     

整体护理对肾移植术后患者恢复的影响

目的观察整体护理对肾移植术后患者恢复的影响。方法选择2013年7月—2014年6月收治的肾移植手术患者30例,随机分为对照组和观察组各15例。对照组按泌尿外科常规护理进行护理,观察组采用整体护理。计数资料比较采用Fisher确切概率法,P0.05为差异有统计学意义。结果对照组治愈率46.7%,观察组16.7%,两组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论对肾移植术后的患者采用整体护理模式,可增强护理人员的责任感和主动性,增进护患沟通,融洽护患关系,提高护理服务质量,减少并发症的发生,明显提高肾移植术后患者的治愈率,改善患者预后,值得临床推广应用。     

大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶的特性及其在基因治疗中的应用

自杀基因是一类前体药物转换酶基闵，目前研究过的自杀基因有十余种，最常用的是HSV—TK／GCV和CD／5-FC 2种自杀基因系统，对多种肿瘤具有治疗作用等。近来发现的大肠杆菌deoD基因编码的嘌呤核苷磷酸化酶（purine nucleoside phosphorylase，PNP酶），能催化前体药物——腺苷类似物产生毒性嘌呤，具有高效能、高旁观者效应和抗非增殖细胞活性的优点，成为目前自杀基因治疗中的热点。现就大肠杆菌PNP酶的特性、在基因治疗中的应用等做一综述。     

重组人白细胞介素-13对造血细胞白细胞介素-13受体α1表达的调控

目的 探讨白细胞介素-13受体α1(interleukine-13 receptor α1,IL-13,Rα1)在造血细胞的表达及其在重组人白细胞介素-13(recombmant human ineterleukine-13,rhIL-13)作用下的表达变化.方法 细胞培养, 提取细胞总RNA, 用RT-PCR及图象分析法检测Dami细胞白细胞介素-13受体ɑ1mRNA表达的水平.结果 Dami细胞均表达白细胞介素-13受体α1;rhIL-13作用Dami细胞4h后,白细胞介素-13受体α1 mRNA表达降低12h后,IL-13Rα1 mRNA表达恢复.结论 ①Dami细胞表达IL-13Rα1.②rhIL-13短暂下调Dami细胞IL-13Rα1的表达.     

肌球蛋白ATP酶组织化学方法的改进

本文参照Guth介绍的酸碱预孵育肌球蛋白ATP酶法并加以改进，使之避免了肌纤维易断裂，组织块内产生冰晶，缓冲液种类过多等现象，结果表明，改进后的方法稳定可靠，在切片上能清楚显示不同类型的肌纤维。     

白介素-13与造血调控

白介素－13是由Th2细胞分泌的一种细胞因子，具有造血因子超家族类似的基因结构，染色体定位，空间结构及受体结构，通过与受体结合，表成IL－3－受体复合物，使JAK活化，启动JAK－STAT6信号通路，激活有关基因的转录，调节造血前体细胞的功能，本文就IL－13对造血系统的作用，IL－13的受体结构，信号传导的过程作一综述。     

促分裂原活化蛋白激酶信号阻断剂在TPO促进UT7细胞增殖和分化中的作用

目的探索促分裂原活化蛋白激酶(mitogenactivatedproteinkinase,MAPK)信号阻断剂对巨核细胞生长分化因子(TPO)促进UT7细胞增殖和分化作用,阐明TPO对UT7细胞作用的机制。方法将EGFPpMSCV和MEK1pMSCV质粒转染UT7细胞;转染细胞与TPO共培养,Westernblot法检测UT7细胞MEK1(MAPK/Erkkinase1)磷酸化;观察转染突变(Ser222A)的MEK1和MAPK阻断剂PD98059对UT7细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测转染突变(Ser222A)的MEK1和MAPK阻断剂PD98059对UT7细胞表达CD41的影响。结果①重组逆转录病毒载体MEK1pMSCV和EGFPpMSCV转染UT7细胞,EGFP阳性率为60.73%。②TPO不同的作用时间(1h,3h),实验组磷酸化MEK1均低于对照组(P值均<0.05)。③MAPK阻断剂PD98059和外源突变MEK基因阻断了TPO对UT7细胞的增殖作用,DMSO对照组的细胞增殖率为98.58%,PD98059组的细胞增殖率为39.00%(P<0.05);转染EGFPpMSCV组细胞增殖率为102.12%,转染MEK1pMSCV组细胞增殖率为48.93%(P<0.05)。④MAPK阻断剂PD98059组UT7细胞CD41表达(10.27%)明显低于对照组(36.43%),转染MEK1pMSCV组UT7细胞CD41表达(24.03%)明显低于转染EGFPpMSCV组(40.16%)。结论TPO诱导UT7细胞MEK1磷酸化,TPO作用时间与UT7细胞MEK1的磷酸化有明显的关系,MAPK信号转导通路介导TPO促进UT7细胞     

解脲脲原体和沙眼衣原体感染与不孕不育的关系

为了探讨沙眼衣原体(CT)、解脲脲原体(UU)感染与不孕不育的关系,我们对来我院就诊的不孕不育患者及正常对照者进行了CT、UU检测。一、材料和方法1.临床资料2004至2006年来我院就诊的不孕不育患者356例,其中男152例,女204例,年龄22~45岁。另选46例年龄相当有分娩史的妇女及39例其妻子有过分娩史的男性为对照,并对实验组进行治疗前与治疗后对照。2.标本采集用棉拭子取女性宫颈分泌物,男性取尿道分泌物或精液、前列腺液,置无菌试管中备用。3.仪器和试剂采用美国AB I公司的Gene Amp5700自动荧光定量聚合酶链反应(PCR)仪,试剂为广州达安生…