单克隆抗体亲和层析法粗提HFRS病毒的初步研究

用McAb亲和层析法粗提HFRS病毒81-14A株感染BHK细胞培养上清液,效果较满意。病毒抗原获得率为48.07％。经McAb亲和层析法洗脱,病毒抗原,蛋白峰基本一致。特异性试验证明洗脱物为HFRS病毒抗原。SDS-RAGE经氨银染色主要有4条区带。     

适于标记的HFRSV组特异性McAb的建立及其应用

本研究用陕西81-14A株HFRSV,免疫BALB/c小鼠,取该鼠牌细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得分泌抗HFRSV抗体的C_4株杂交瘤细胞系。C_4株McAb与我国各地的28株及朝鲜的76～118株,Seoul株HFRSV均产生免疫反应,表明是HFRSV组特异性抗体,并适用于荧光素及辣根过氧化物酶标记、经初步应用效果满意。     

约氏疟原虫红内期感染小鼠的免疫反应及IL—2,IFN—γ免…

在原虫血症上升期，致死株约氏疟原虫感染鼠脾细胞的增殖反应受到抑制，无γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）产生，血清未产生特异抗体，仅产生与正常鼠相同的白细胞介素２（ＩＬ－２０）；与此不同，非致死株Ｐ．ｙ．感染鼠脾细胞增殖反庆增强，产生ＩＦＮ－γ及更多的ＩＬ－２，血清中还无特异抗体产生。     

经静脉或吸入戊烷脒治疗艾滋病患者的卡氏肺孢子虫性肺炎

为了评价减量静脉给药或雾化吸入戊烷脒治疗轻至中度卡氏肺孢子虫性肺炎的疗效及其毒性作用,将轻至中度(PaO_2≥7.3kPa[55mmHg])第一次发作卡氏肺孢子虫性肺炎的45名艾滋病患者随机分为两组。其中22例接受戊烷脒静脉给药治疗,剂量为3mg/kg·d,23例接受戊烷脒雾化治疗,剂量为600mg。两种方法均为每日1次,持续2～3wk。结果显示:静脉给药组22个病人中有1人无评价价值,雾化组23个病人中有6人无     

单纯疱疹病毒Ⅰ型胸苷激酶基因的扩增、克隆和测序

目的：对单纯疱疹Ⅰ型胸苷激酶基因扩增、克隆和测序．方法：从单纯疱疹病毒Ⅰ型（ＨＳＶ－１）１７ｓｙｎ＋株感染的ＢＨＫ２１细胞上清液中提取ＨＳＶ－１基因组ＤＮＡ，以此为模板，用ＰＣＲ方法扩增胸苷激酶（ＴＫ）．将扩增的片段克隆入载体ｐＵＣ１８中，并进行测序．结果：除终止码外，ＨＳＶ－１ＴＫ基因全部编码区为１１２８ｂｐ，编码３７６个氨基酸，其中含１２个蛋氨酸，４个半胱氨酸．ＴＫ的第２４９和２５０位氨基酸残基分别为Ｌｅｕ和Ｇｌｎ，其相应密码子为ＣＴＧ，ＧＡＧ，构成１个ＰｓｔＩ位点，第３１３和３１４氨基酸残基分别为Ａｓｐ和Ｖａｌ，其相应密码子为ＧＡＣ和ＧＴＣ，构成另一个ＰｓｔＩ位点．结论：本研究扩增出了ＨＳＶ－１ＴＫ基因的全部编码区序列     

恶性疟原虫GBP130基因5′近端侧翼序列调控功能的研究

目的　对GBP130的 5′近端侧翼序列进行分析 ,发现可能的强度和期特异性调控元件。　方法　构建含有不同长度GBP130启动子的质粒载体。用pGBPCATΔ 2、pGBPΔ2 /4 0 0和 pGBPΔ2 /80 0分别转染疟原虫 ,在转染后 48h收集虫体制备细胞抽提物 ,检测报告分子CAT活性 ,分析近端侧翼序列不同区域的强度调控功能。另将 pGBPΔ2 /4 0 0和pGBPΔ2 /80 0分别同时转染疟原虫 ,分别于转染后 5h、15h和 46h收集虫体 ,制备细胞抽提物 ,检测CAT活性 ,分析近端侧翼序列不同区域的期特异性调控功能。　结果　强度分析中 ,当从转录起始点下游删除较小的片段 ( pGBPΔ2 /80 0 ) ,CAT表达水平与pGBPCATΔ 2中CAT水平无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ,当删除近端较大片段 ( pGBPΔ2 /4 0 0 )时 ,CAT表达水平明显下降 (P <0 .0 5 )。同时 pGBPΔ2 /4 0 0的转录活性与对照组也有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;期特异性分析 ,pGBPΔ2 /4 0 0与pGBPΔ2 /80 0相比 ,在 5h时前者转录活性高于后者 ,但在 15h和 46h时 ,后者转录活性高于前者 ,提示 2种质粒在疟原虫不同生活阶段具有期特异性调控。　结论　推测不同GBP130启动子活性强度的差异是因为 5′UTR长度的不同 ,较长的UTR可促进基因的转录表达 ,可能GBP130基因近端侧翼序列中 2个同聚 po     

读者来信

编辑同志: 您好! 贵刊第5卷第3期报道了中国免疫学会正式成立,并确定贵刊为中国免疫学会会刊的消息。我们作为陕西省免疫学会的会员,对此表示衷心的祝贺!并祝贺《中国免疫学杂志》4年来取得的可喜成绩。     

单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白B胞浆区编码基因的原核表达、纯化及抗体制备

目的 获得高纯度的重组单纯疱疹病毒I型（HSV－1）糖蛋白B（gB）胞浆区蛋白并制备其特异性抗体。方法 从感染HSV－1的BHK细胞中,提取总RNA,用RT－PCR特异性扩增HSV－1gB胞浆区编码基因,经双酶切后,克隆人表达载体pGEX4T－1中,进行融合表达。以纯化的重组蛋白免疫小鼠制备抗体,进行Westernblot鉴定。结果 用IPTG诱导后,表达出相对分子质量（Mt）约42000的融合蛋白。用纯化的融合蛋白免疫小鼠制备的抗体滴度为1：400。结论 获得重组HSV－1gB胞浆区蛋白及其特异性抗体,为后续功能研究奠定了基础。     

复合PCR系统检测间日疟原虫的应用研究

应用一种简易、快速的复合 PCR扩增系统检测间日疟原虫 (P.v)及混合感染。方法 :以间日疟原虫和恶性疟原虫 (P.f)小亚单位核糖体核糖核酸基因 (SSUr DNA)特定片段为靶基因 ,设计并合成引物 ,建立复合 PCR扩增系统。采用煮沸法快速制备 DNA模板研究该系统的敏感性和特异性 ,并用于临床血样的检测。结果 :从间日疟原虫和恶性疟原虫感染血样中分别扩增出分子量大小为 70 5bp和 575bp的特定扩增带。而食蟹猴疟原虫、诺氏疟原虫及正常人血样均无扩增带出现。单独检测 P.v敏感度达到 0 .1 5× 1 0 -5(约 7个原虫 /μl全血 ) ,在 P.f存在的情况下检测 P.v敏感度为 0 .1 5× 1 0 -4 。检测 1 32例疟区门诊病人冻存血标本 ,1 0 4份与镜检法结果相同。并发现 1 4份混合感染和 5份为镜检虫种鉴别失误。结论 :该系统敏感性高 ,特异性强 ,操作简单 ,并可在一次扩增中同时检出间日疟原虫和恶性疟原虫 ,具有一定的推广应用价值。     

恶性疟原虫富组氨酸蛋白-2基因诱导的免疫应答研究

[目的 ]探讨编码恶性疟原虫富组氨酸蛋白 2 (HRP Ⅱ )C端基因的真核表达重组质粒诱导小鼠的体液和细胞免疫效果。 [方法 ]将起始码和终止码引入HRP ⅡC端基因片段两端 ,经测序鉴定读框 ,将包含起始码和终止码的HRP Ⅱ基因片段克隆入真核表达质粒pcDNA3 1( )中 ,进行酶切鉴定。用重组真核表达质粒pcDNA3 1( ) /HRP Ⅱ 经肌肉免疫小鼠 3次 ,每次间隔 3wk。第 3次免疫后 2wk ,取小鼠血清和脾细胞 ,分别用ELISA测定HRP Ⅱ抗体水平和用脾细胞增殖实验测定细胞免疫反应。 [结果 ]序列测定结果表明 ,HRP ⅡC端基因片段被准确地引入起始码和终止码 ;酶切鉴定表明包含起始码和终止码的HRP ⅡC端基因片段成功地克隆入pcDNA3 1( ) ,形成pcDNA3 1( ) /HRP Ⅱ 。在pcDNA3 1( ) /HRP Ⅱ 免疫鼠血清中可检测出高水平的HRP Ⅱ抗体 ,用原核表达的HRP Ⅱ蛋白刺激免疫脾细胞 ,可检测出明显的细胞增殖反应。 [结论 ]编码HRP Ⅱ的真核表达重组质粒可诱导小鼠产生明显的体液和细胞免疫反应。其有可能作为恶性疟原虫红内期复合DNA疫苗的候选基因