吸烟大鼠一氧化氮合酶和一氧化氮的变化

目的:观察吸烟对大鼠肺组织iNOS、eNOSmRNA和蛋白表达以及支气管肺泡灌洗液(BALF)中NO的影响, 探讨不同类型的NOS在吸烟所致慢性气道炎症中的作用。方法:选用Wistar大鼠80只随机分为对照组, 被动吸烟组, iNOS抑制剂L-NIL干预组及NOS抑制剂L-NAME干预组。用免疫组化法检测iNOS及eNOS的蛋白表达, 用RT-PCR检测iNOS及eNOSmRNA的表达, 用Griess法测定BALF中的NO^-₂/NO^-₃含量。结果:吸烟大鼠肺组织中iNOSmRNA及其蛋白表达增加, eNOSmRNA及蛋白表达下降, BALF中细胞总数及NO^-₂/NO^-₃显著增加(P＜0.05)。在体实验发现, L-NIL使BALF中细胞总数及NO^-₂/NO^-₃下降(P＜0.05);L-NAME对BALF中细胞总数及NO^-₂/NO^-₃无显著影响(P＞0.05)。结论:吸烟大鼠肺组织iNOSmRNA和蛋白表达增加, eNOSmRNA和蛋白表达减少。活化的iNOS产生大量NO促进炎症发展。     

选择性扩增外周血和支气管肺泡灌洗液中γδT细胞的研究

目的 :探讨选择性扩增外周血和支气管肺泡灌洗液 (BALF)中γδT细胞的方法 ,以获得高纯度的γδT细胞亚群。方法 :应用梯度离心法分离大鼠 (n =10 )外周血和BALF中的单个核细胞 ,经贴壁除去单核 /巨噬细胞后 ,用补体攻击αβT细胞 ,再用抗TCRγδ单克隆抗体 (mAb)通过固相法加IL 2刺激选择性培养扩增γδT细胞 (简称“攻击洗淘法”) ;通过细胞生长曲线观察细胞增殖变化 ,采用免疫组化法和流式细胞仪检测鉴定γδT细胞纯度。结果 :PBMC和BALF中的γδT细胞在抗TCRγδmAb和IL 2存在下 ,无须再用抗原刺激 ,能维持较长时间增殖 ;经“攻击洗淘法”纯化后扩增的γδT细胞纯度达到 81%～99%。结论 :“攻击洗淘法”能高度纯化扩增外周血和BALF中的γδT细胞     

磷酸二酯酶抑制剂对慢性阻塞性肺疾病患者PBMC中IL-8mRNA表达的影响

目的:探讨磷酸二酯酶(PDE)抑制剂对慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血单个核细胞(PBMC)IL-8mRNA表达的影响及机制。方法:采集20例急性发作期COPD患者(A组)和15例正常人(B组)的PBMC。A组的每份PBMC分4组培养:A1组为空白对照,A2组和A3组分别加入100μmol/L及1mmol/L的非选择性PDE抑制剂茶碱,A4组加入选择性PDEⅣ抑制剂Rolipram。应用RT-PCR检测IL-8mRNA的表达,以免疫组化法检测NF-κB阳性细胞的百分率,用Westernblot检测I-κB蛋白的含量。结果:(1)A1组PB-MC中IL-8mRNA的表达及NF-κB阳性细胞的百分率,均显著高于B组;IκB的水平显著低于B组(P<0.01)。(2)与A1组比较,A2组和A3组的PB-MC中IL-8mRNA的表达无显著差异(P>0.05);A4组IL-8mRNA的表达明显下降(P<0.01)。(3)与A1组比较,A2组NFκB阳性细胞的百分率及IκB的水平无显著差异(P>0.05);而A3组的PBMC中NFκB阳性细胞的百分率下降(P<0.05),IκB蛋白的水平无显著变化(P>0.05)。A4组PB-MC中,NF-κB阳性细胞的百分率较A1组明显下降,I-κB蛋白的水平明显增加(P<0.01)。结论:COPD患者PBMC中IL-8mRNA的表达较正常增高,提示IL-8参与了COPD的发病过程;选择性PDEⅣ抑制剂Roli-pram可抑制IL-8基因的表达,其作用机制可能与NF-κB阳性细胞百分率的下降有关。非选择性PDE抑     

COPD患者PBMC中IL-8 mRNA表达及内源性NO的作用和机制

【目的】探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血单个核细胞(PBMC)白细胞介素8(IL8)mRNA表达的变化以及内源性一氧化氮(NO)对其影响及机制。【方法】采集20例COPD急性发作期患者(A组)和15例正常对照者(B组)的静脉血分离PBMC,并各分组培养:A1组和B1组为空白对照,A2组和B2组加入左旋精氨酸(LArg),A3组和B3组加入N6(1亚氨乙基)赖氨酸(LNIL),A4组和B4组加入LArg+核因子κB(NFκB)抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC),应用原位杂交法检测IL8mRNA,用免疫组织化学方法检测NFκB的表达。【结果】①A1组的PBMC中IL8mRNA阳性细胞率及NFκB活化细胞百分率分别为22.58±2.86%和15.87±2.55%,均显著高于B1组(P<0.01)。②A2组的PBMC中IL8mRNA阳性细胞率升高,与A1组比较差异有显著性(P<0.05);A3组的PBMC中IL8mRNA阳性细胞率及NFκB活化细胞百分率下降,与A1组比较差异也有显著性(P<0.01)。A4组的PBMC中IL8mRNA阳性细胞率及NFκB活化细胞百分率下降,与A1组比较差异有显著性(P<0.01)。③COPD患者PBMCIL8mRNA表达阳性率、NFκB活化细胞百分率与FEV1/FVC%呈显著负相关(P<0.01)。COPD患者PBMCIL8mRNA表达阳性率与NFκB活化细胞百分率呈显著正相关(P<0.01)。【结论】COPD患者PBMC中IL8mRNA表达较正常增高,提示IL8可能参与了COPD的发病过程;内源性NO可调控IL8mRNA的表达,可能是通过NFκB来传导。     

香烟烟雾提取物对人外周血单个核细胞IL-8 mRNA表达的影响

目的 探讨香烟烟雾提取物(CSE)对人外周血单个核细胞(PBMC)IL-8 mRNA表达的影响及其细胞内信号途径。方法 体外应用CSE与健康者PBMC共同培养，用RT-PCR检测IL-8 mRNA的表达，用免疫细胞化学染色法检测核因子κB(NF-κB)的表达；并观察NF-κB抑制剂和酪氨酸蛋白激酶抑制剂对CSE诱导的：PBMC IL-8基因表达的影响。结果 加入CSE培养的人PBMC，IL-8 mRNA的表达增加，作用24h最高，NF-κB活化细胞百分比增加；NF-κB抑制剂和酪氨酸激酶抑制剂均使CSE诱导的IL-8 mRNA表达水平下降。结论 吸烟使人PBMC的IL-8 mRNA表达水平显著增加，与NF-κB和酪氨酸激酶有关。     

白介素-8与慢性阻塞性肺疾病

白介素-8(IL-8)作为一种多源的细胞因子,主要作用于中性粒细胞。近来研究发现IL-8参与慢性阻塞性肺疾病(COPD)的发病,吸烟、感染均可诱导IL-8的产生。IL-8主要通过趋化、激活中性粒细胞和嗜酸粒细胞促进COPD的气道炎症反应。     

延迟整流钾通道在哮喘大鼠模型气道平滑肌张力调控中的作用

目的　探讨电压依赖性延迟整流钾通道 (KV)在哮喘大鼠模型气道平滑肌张力调控中的作用及其对气道反应性的影响。方法　应用等长张力记录方法 ,观察钾通道对正常和哮喘大鼠离体支气管静息张力及收缩张力的影响。结果　 (1)KV 阻断剂 4 氨基吡啶 (4 AP)诱发大鼠离体支气管产生浓度依赖性的收缩反应。哮喘组支气管 (10只 ) 4 AP收缩反应量效曲线较对照组 (10只 )明显左移 ,两者达到最大效应的一半所需浓度的负对数值 (pD2 )分别为 2 5 8± 0 0 7,2 12± 0 0 4,两组比较差异有显著性 (P <0 0 1) ;最大反应强度 (Emax)哮喘组为 (3 2± 5 )mg/mg ,与对照组 [(3 1± 6)mg/mg]比较 ,差异有显著性 (P >0 0 5 ) ;(2 )在对照组中 ,4 AP使支气管对内皮素 1(ET 1)和组胺的收缩反应量效曲线明显左移 ,处理前pD2 分别为 6 2 7± 0 3 8、5 5 9± 0 2 7,处理后为 6 80± 0 47、6 42± 0 14,处理前、后比较 ,差异有显著性 (P均 <0 0 1) ;Emax处理前分别为 (3 6± 8)mg/mg、(3 6± 8)mg/mg,处理后为(40± 8)mg/mg、(3 9± 9)mg/mg,处理前、后比较 ,差异有显著性 (P均 >0 0 5 ) ;(3 )在哮喘组中 ,4 AP对ET 1和组胺诱发支气管收缩反应的量效曲线无显著影响 ,处理前pD2 分别为 6 5 1± 0 0 7、5 86± 0 14,处     

支气管哮喘大鼠γδT细胞分布和凋亡的变化

探讨γδT细胞在支气管哮喘外周血和支气管肺泡灌洗液 (BALF)中的分布和凋亡状态。应用鸡卵清蛋白(OVA)致敏和刺激Wistar大鼠 (每组 10只 ) ,制作致敏大鼠哮喘模型 ,收集外周血单个核细胞 (PBMC)和BALF ,采用流式细胞术检测γδTCR+ T细胞百分率和CD2 8 γδTCR平均荧光密度比 ,并用免疫荧光法结合HE染色以及免疫组化法检测γδT细胞占淋巴细胞的百分率 ,用TENUL法检测淋巴细胞凋亡。哮喘组PBMC中γδT细胞占总T细胞或总淋巴细胞比例明显低于正常组 (P <0 0 5 ) ,CD2 8 γδTCR平均荧光密度比则无明显差别 ;BALF中γδT细胞占总T细胞或总淋巴细胞比例明显高于正常组 (P <0 0 1) ,CD2 8 γδTCR平均荧光密度比也有显著增加 (P <0 0 1) ;哮喘组PBMC和BALF中淋巴细胞凋亡指数明显低于正常对照组 (P <0 0 1)。提示γδT细胞亚群参与了哮喘的发病过程。     

非人类免疫缺陷病毒感染的肺孢子菌肺炎患者的临床特征

【目的】探讨非人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的肺孢子菌肺炎(PCP)患者的临床特征。【方法】收集2018年10月至2019年9月在本院呼吸与危重症医学科诊治的非HIV感染的PCP患者的临床资料,分析其临床特征。【结果】研究纳入45例患者,19例(42.2%)死亡。基础疾病中最常见的为自身免疫性疾病,其次为恶性肿瘤、实体器官移植术后及肾脏疾病;PCP患者主要表现为非特异性的发热、咳嗽、呼吸困难,典型的胸部CT影像为双肺多发或散在磨玻璃影。和住院期间存活的患者相比,死亡患者入院时白蛋白更低(33.9±5.0vs27.7±4.3),乳酸脱氢酶更高(390.7±189.1vs524.1±246.9),血浆尿素氮水平更高[6.1(5.2~8.0)vs9.4(5.0~15.5)],氧合指数更差[371.4(316.2~423.8)vs300.0(257.1~354.8)],其差异均有统计学意义(均P<0.05)。入院后44例均使用复方磺胺甲噁唑抗PCP治疗,其中31例联合使用卡泊芬净;41例(91.1%)患者在抗感染基础上接受糖皮质激素治疗。【结论】非HIV感染的PCP患者病死率较高,入院时低白蛋白、血浆乳酸脱氢酶和尿素氮升高及氧合指数差的患者预后不良。